Barbara Heinze,
Für den qualitativen Indikatornachweis von Enterobacteriaceae in Lebensmitteln wurde eine spezifische Real-Time-PCR-Anwendung entwickelt. Nach kultureller Anreicherung der Lebensmittelprobe erfolgt die Durchführung der PCR im LightCycler®. Das entwickelte Nachweisverfahren erreicht gegenüber den konventionellen mikrobiologischen Methoden eine Spezifität von 100 % und führt mit einem zeitlichen Aufwand von maximal einem Tag bei einem Drittel der Zeit für Horizontalverfahren zum zuverlässigen Ergebnis. Überprüft wurde die Spezifität mit 92 taxonomisch definierten Bakterienstämmen sowohl der Familie Enterobacteriaceae als auch anderer, nicht zu amplifizierender Gruppen. Mit hoher Sensitivität ermöglicht der Enterobacteriaceen-Nachweis die Detektion einer einzelnen Bakterienzelle. Er eignet sich für die Qualitätskontrolle von Lebensmitteln unterschiedlichster Produktgruppen sowie die Überwachung aller kritischen Prozessstufen in lebensmittelproduzierenden Betrieben. Mögliche Gesundheitsge-fährdungen durch Rekontaminationen und unzureichende Verarbeitungs-, Betriebs- und Distributionshygiene werden sicher nachgewiesen. Mit 72 Lebensmittelproben verschiedener Produzenten, Kategorien und Matrices wurde die Funktionalität des Nachweises im Vergleich mit den Horizontalverfahren zum qualitativen Nachweis von Enterobacteriaceae überprüft. Die Ergebnisse aller Untersuchungen stimmten mit denen der Mikrobiologie überein, 30 Proben wurden positiv auf das Vorhandensein der Markerorganismen Enterobacteriaceen getestet.
Zielmolekül der Real-Time-PCR ist die für 23S rRNA codierende DNA-Sequenz der Enterobacteriaceen. Für das Nachweissystem wurden die forward- und reverse-Primer fw9 und rev10 sowie die Sonden HzFlu und HzRed generiert. Das in der PCR entstehende partielle Amplifikat der 23S rDNA hat eine Größe von 225 bp und wird zeitgleich mit seiner Amplifikation im Kanal F2/Back-F1 des LightCycler® detektiert. Zum Ausschluss falsch negativer Ergebnisse wurde eine Interne Amplifikationskontrolle entwickelt. In Form einer kompetitiven PCR erfolgt die Amplifikation der Kontroll-DNA zusammen mit der Ziel-DNA mit den gleichen fw9- und rev10-Primern im selben PCR-Ansatz. Detektiert wird die Interne Amplifikationskontrolle während ihrer Entstehung anhand der generierten Sonden IAKRed und HzFlu im Kanal F3/Back-F1 des LightCycler®.
In der Entwicklung der Konsensus-PCR kam es zur unerwünschten Amplifikation spezifischer DNA in PCR-Reaktionen ohne Untersuchungsprobe und damit zu falsch positiven Ergebnissen. Es wurde gezeigt, dass es sich hierbei um Amplifikationen kontaminierender DNA in allen getesteten Taq-DNA-Polymerasen diverser Hersteller handelte. Durch enzymatischen Verdau mit DNase I konnte reproduzierbar die vollständige Dekontamination der rekombinanten Taq-Polymerasen erreicht und die Entstehung falsch positiver Ergebnisse ausgeschlossen werden.
Barbara Heinze,
Für den qualitativen Indikatornachweis von Enterobacteriaceae in Lebensmitteln wurde eine spezifische Real-Time-PCR-Anwendung entwickelt. Nach kultureller Anreicherung der Lebensmittelprobe erfolgt die Durchführung der PCR im LightCycler®. Das entwickelte Nachweisverfahren erreicht gegenüber den konventionellen mikrobiologischen Methoden eine Spezifität von 100 % und führt mit einem zeitlichen Aufwand von maximal einem Tag bei einem Drittel der Zeit für Horizontalverfahren zum zuverlässigen Ergebnis. Überprüft wurde die Spezifität mit 92 taxonomisch definierten Bakterienstämmen sowohl der Familie Enterobacteriaceae als auch anderer, nicht zu amplifizierender Gruppen. Mit hoher Sensitivität ermöglicht der Enterobacteriaceen-Nachweis die Detektion einer einzelnen Bakterienzelle. Er eignet sich für die Qualitätskontrolle von Lebensmitteln unterschiedlichster Produktgruppen sowie die Überwachung aller kritischen Prozessstufen in lebensmittelproduzierenden Betrieben. Mögliche Gesundheitsge-fährdungen durch Rekontaminationen und unzureichende Verarbeitungs-, Betriebs- und Distributionshygiene werden sicher nachgewiesen. Mit 72 Lebensmittelproben verschiedener Produzenten, Kategorien und Matrices wurde die Funktionalität des Nachweises im Vergleich mit den Horizontalverfahren zum qualitativen Nachweis von Enterobacteriaceae überprüft. Die Ergebnisse aller Untersuchungen stimmten mit denen der Mikrobiologie überein, 30 Proben wurden positiv auf das Vorhandensein der Markerorganismen Enterobacteriaceen getestet.
Zielmolekül der Real-Time-PCR ist die für 23S rRNA codierende DNA-Sequenz der Enterobacteriaceen. Für das Nachweissystem wurden die forward- und reverse-Primer fw9 und rev10 sowie die Sonden HzFlu und HzRed generiert. Das in der PCR entstehende partielle Amplifikat der 23S rDNA hat eine Größe von 225 bp und wird zeitgleich mit seiner Amplifikation im Kanal F2/Back-F1 des LightCycler® detektiert. Zum Ausschluss falsch negativer Ergebnisse wurde eine Interne Amplifikationskontrolle entwickelt. In Form einer kompetitiven PCR erfolgt die Amplifikation der Kontroll-DNA zusammen mit der Ziel-DNA mit den gleichen fw9- und rev10-Primern im selben PCR-Ansatz. Detektiert wird die Interne Amplifikationskontrolle während ihrer Entstehung anhand der generierten Sonden IAKRed und HzFlu im Kanal F3/Back-F1 des LightCycler®.
In der Entwicklung der Konsensus-PCR kam es zur unerwünschten Amplifikation spezifischer DNA in PCR-Reaktionen ohne Untersuchungsprobe und damit zu falsch positiven Ergebnissen. Es wurde gezeigt, dass es sich hierbei um Amplifikationen kontaminierender DNA in allen getesteten Taq-DNA-Polymerasen diverser Hersteller handelte. Durch enzymatischen Verdau mit DNase I konnte reproduzierbar die vollständige Dekontamination der rekombinanten Taq-Polymerasen erreicht und die Entstehung falsch positiver Ergebnisse ausgeschlossen werden.
Präsentation Dorfversammlung Groothusen am 12.05.2012groothusen
Der Dorfversammlung wird ein Leitbild für das Dorf vorgestellt. Ein Arbeitskreis hat dieses Leitbild entwickelt, als gemeinsam getragene Orientierung für zukünftige Maßnahmen. Das eigenverantwortliche Handeln steht dabei im Vordergrund. Mit der Präsentation wir um die Verabschiedung des Leitbilds gebeten.
Innovation/Public: Denken in Geschäfts- und Gemeindemodellen?Roland Schegg
PwC als Partner an der ersten Tagung für das Gemeinde- und Städtepersonal mit einem konkreten Workshop. --> Braucht die öffentliche Hand Innovation? Falls ja, wie viel? Wie könnte Innovation konkret aussehen, und wie bekommen wir diese besser in die öffentliche Verwaltung? Ist vielleicht schon mehr Innovation vorhanden, als wir zunächst erkennen? Viel Innovation kommt gerade in der Schweiz von der Basis, also von den Mitarbeitenden, die täglich nahe bei Prozessen oder Bürgerschaft arbeiten. Teils sind es viele, unauffällige Teilschritte, die zu innovativer Veränderung führen. Wie könnte das Potential und die Kreativität besser gefördert werden? Dieser Workshop stellt die Geschäftsmodell-Perspektive als pragmatische Diskussionsgrundlage vor. In einer offenen Diskussion folgt sogleich die Anwendung dieses bewährten Ansatzes. Gemeinsam denken wir über Veränderungen, Potentiale und letztlich Innovation konkret nach.
The document discusses hate and violence, mentioning 1.5 million innocent people and 780 people who were killed. It provides high-level numbers but does not include any other context or details about the events mentioned.
A document discusses war in Gaza, with mentions of explosions, tanks, and threats of violence. It refers to war in Gaza, 10,000 tanks of war, and the phrase "I kill you".
Conflict and homelessness are ongoing problems that affect thousands of people who are alone and sad. While these issues are difficult to ignore, addressing the underlying truths is important.
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Conflict and homelessness are ongoing problems that affect thousands of people who are alone and sad. While these issues are difficult to ignore, addressing the underlying truths is important.
Conflict and homelessness are ongoing problems that affect thousands of people who are alone and sad. While these issues may be difficult to confront, it is important not to ignore the truth about the challenges faced by those without homes.