Algo nuevo, algo viejo y algo prestado en alzheimer 2014 jparodi
1. Algo viejo, algo nuevo y algo usado en
Alzheimer; La idea del poro, del etanol y los
ovocitos para comprender la enfermedad
Jorge Parodi
jparodi@uct.cl
http://nucleo-nipa.uct.cl/reproduccion-animal/
2.
3.
4.
5. Figure. The amyloid precursor protein molecule with localization of the A{beta} and p3
proteins, showing pathogenic mutations and the novel sequence variant identified in this
study
Janssen, J.C. et al. Neurology 2003;60:235-239
9. Efecto neurodegenerativo de agregados del péptido amiloide
Lorenzo & Yankner. 1994 PNAS.
MAP-2
Sinaptofisina
Control Soluble
20 μM
Agregados
20 μM
10. Presencia del péptido amiloide bloquea el fenómeno de LTP
Stéphan et al., 2001 J. Neuroscience
11. La presencia del péptido amiloide en la sinápsis
PSD-95 Ab Merged
Verde M94 (ADDL´s)
Rojo, en B Anti α-CaMKII
Rojo ,en C Anti PSD-95 Lacor et al., 2004 J. Neurosci.
12. CPP, bloqueador de NMDA
BTX, bloqueador Colinergico
Conclusion,
Oligomeros, disminuyen el
numero de espinas, reduciendo
la actividad por un mecanismo
que involucra a receptores de
Shankar et al., 2007 J of Neuroscience. NMDA
16. Solokov et al 2006 JGP
Kawahara et al., 1997 Biophysical Journal
Péptido amiloide, induce
cambios en las bicapas
Lipidicas, ¿poro amiloide?
17. CCVD
Receptores
Receptores
nicotínico
Canales NMDA
potasio
Poro
amiloide
CCVD, tipo N y L Yagami et al., 2004; Bobich et al., 2004
Poro amiloide, Arispe et al., 1994
Canales de potasio, Ye et al 2003
Receptores nicotínico, Tran et al., 2002
Receptores NMDA, Snyder et al., 2005
18. Demuro et al., 2004 JBC
Modelo, para bloqueo del “poro” amiloide
Tomado de Arispe 2004, construcción del
Na7, para ser usado como bloqueador
Selectivo de los efectos del péptido amiloide
23. 0 50 100 150 200
Modeling
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
Tiempo (min)
Turbimetria
(D.O. 405 nm)
Control
5 mM Etanol
10 mM Etanol
A B 50 mM Etanol
C D E
Ormeño et al 2013
27. A B C
-6 -5 -4 -3 -2 -1 0 1
1,5
1,0
0,5
0,0
Number of events
Amplitude (nA)
Control
Gramicidin
Amphotericin B
Aggregate
8
6
4
2
0
-200 -150 -100 -50 0 50 100
-2
-4
-6
-8
nA
mV
Aggregate
Gramicidin
Amphotericin
Control
Control
Gramicidin
Amphotericin B
Aggregates
-1000
-800
-600
-400
-200
0
*
*
Membrane conductances (nS)
*
Parodi et al 2012
28. B
A
C
D
+ 20 mV
0 mV
Control
High Ca2+
NR
Aggregate
High Ca2+
NR
-100 mV
+ 20 mV
0 mV
-100 mV
100 nA
250 ms
Rabbit serum
4 min
200 nA
15 min Aggregate
NR
0 min 15 min
300
250
200
150
100
50
0
NR 2+
High Ca
Aggregate
*
*
Current amplitude
(% of control at +20 mV)
*
NR High Ca
2+
200
150
100
50
0
*
15 min 15 min Aggregate
Current amplitude
(% of control )
NR
0 min
29. 200 nA
NR 15 min Aggregate
60 s
100 μM ATP
0 min 15 min
120
100
80
60
40
20
0
15 min 15 min Aggregate
Current (% of control)
0 min
*
33. Agradecimientos
Colaboradores
•Dr. Luis Aguayo
•Dr. Carlos Opazo
Colaboradores Internos
•Fernando Sepulveda
•Magdalena Cuevas
•Gretchen Wandersleben
•Dr. Marcelo Kogan
•Dr. Bob Peoples
•Dr. Jorge Roa
34. ….Gracias a la Fundación Parodi por todo su cariño y amor.
Viejo, ya te extraño mucho!!!
35.
36. Control
Tratadas
Agregados amilodes
1
5
10
25
50
100
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
*
*
*
*
Etanol (mM)
Frecuencia (Hz)
Actividad Sináptica Espontánea
Control
Agregados Ab 0.5 M (24 h)
Agregados Ab 0.5 M + 10 mM Etanol (24 h)
Agregados Ab 0.5 M + 50 mM Etanol (24 h)
50 mM Etanol (24 h)
0.2 s
20 pA
0.2 s
20 pA
0.2 s
20 pA
0.2 s
20 pA
0.2 s
20 pA
Sv2
Abaggregates 0.5 M
Aguayo Lab. Parodi tesis 2007
37. ¿… y el mecanismo Parodi???
..Posiblemente efectos agudos, como el de 4-AP o LTX
¿… y lo demostró Parodi???
38.
39.
40. Los agregados Aβ aumentan la liberación de
vesículas sinápticas en la presencia de calcio
0 500 1000 1500
1,1
1,0
0,9
0,8
0,7
0,6
0,0
Control
Agregados Ab
Agregados Ab/Sin calcio
Agregados Ab/Cadmio
*
Fluorescencia Normalizada
)
i
(F/F
Tiempo (Seg)
41. El efecto agudo de los agregados Aβ sobre la
actividad sináptica es bloqueado por cadmio
Control
Cadmio
Agregados Aβ
Agregados Aβ / cadmio
Agregados Aß / cadmio
Control
Agregados Aß
5
4
3
2
1
0
30 min
*
*
Frecuencia (Hz)
Corriente en miniatura
A B
200 pA
10 seg
42. 2,0
1,5
1,0
0,5
Control
Agregados Aß
Control
Agregados Aß
0,0
*
Sin Calcio
Frecuencia (Hz)
Corriente en miniatura
Control
Agregados Aß
Control
Agregados Aß
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
Frecuencia (Hz)
Corriente en miniatura
*
Cadmio
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
Control
Agregados Aß
Bicuculina
CNQX
Bicuculina
CNQX
0,0
*
*
*
Agregados Ab
Frecuencia (Hz)
Corriente en miniatura
43. Abramov et al, 2004 BBA
Mattson et al, 1992 J. Neuroscience
4 dias, 2 μM
5 μM
NADH inhibición
Evidencia Stress
44. 2 dias, de incubación
100-300 pM por IP
Shankar et al., 2007 J of Neuroscience.
45. 10 a 15 dias
¿Cómo aislaron?
Bicu, TTX, Picrotoxina y
Nimodipino.
Shankar et al., 2007 J of Neuroscience.
46. Presencia del péptido amiloide genera muerte, por cambio en
calcio
Abramov et al, 2004 BBA
5 μM
48. Péptido amiloide, induce cambios en los
Receptores del tipo AMPA.
Todos efectos post sinápticos interesantes
Permite explicar efectos en el LTP
Hsieh et al., 2006 Neuron.
57. Test Placebo Ginko
Memory 0,15 0,14
Executive test 3,27 3,47
Conclusion Compared with placebo, the use of G biloba, 120 mg twice daily, did
not result in less cognitive decline in older adults with normal cognition or with mild
cognitive impairment.
Snitz et al 2009 JAMA
59. Danitz and Parsons 2008 IJNP
Donepezil and Memantine for Moderate-to-
Severe Alzheimer's Disease
Conclusions
In patients with moderate or severe Alzheimer's
disease, continued treatment with donepezil was
associated with cognitive benefits that exceeded the
minimum clinically important difference and with
significant functional benefits over the course of 12
months
JAMA 2012