Este documento describe un estudio que evalúa la capacidad de dos sesterterpenos marinos, scalaradial y cacospongionoloide, para inhibir la proliferación celular e inducir apoptosis en líneas celulares de carcinoma humano. Los resultados mostraron que estos compuestos reducen la viabilidad celular y causan fragmentación del ADN en las células cancerígenas. Actúan induciendo apoptosis a través de la activación de caspasas sin involucrar a p53, e inhibiendo la translocación nuclear de las proteínas NF-kB p50 y p

1. SCALARADIAL, DOS
SESTERTERPENOS MARINAS COMO
POTENTES FACTORES QUE INDUCEN
APOPTOSIS EN LÍNEAS CELULARES DE
CARCINOMA HUMANO
DANIELA DE STEFANO , JOSEFINA TOMMONARO , SHOAIB AHMAD MALIK, , CARMINE
IODICE , SALVATORE DE ROSA , MARIA CHIARA MAIURI , ROSA CARNUCCIO. 2011

2. INTRODUCCIÓN
• El cáncer es una
causa principal de
muerte en países
industrializados.
• Apoptosis: una forma
de muerte de célula
programada.
• Productos marítimos
naturales
(sesterterpenoides), i
mportantes en el
descubrimiento y el
desarrollo de nuevas

3. HIPÓTESIS
• El scalaradial y cacospongionoloide
inhiben la proliferación de células
cancerígenas e inducen apoptosis

4. OBJETIVOS
• Ver la capacidad del scalaradial y
cacospongionoloide para inhibir la
proliferación e inducir apoptosis en varias
líneas de célula de carcinoma humanas.
• Determinar apoptosis a través de diferentes
métodos empleando células cancerigenas
diferentes .
• Determinar la vía por la cual producen
apoptosis

5. MÉTODO EXPERIMENTAL
Scalaradial (SC) fue
aislado de la
esponja scalaris
Cacospongia
Cacospongionoloide
(CSP) se aisló de la
esponja Fasciospongia
cavernosa

6. CULTIVO CELULAR
Cultivo celular de
T74D, A431,HeLa
Cultivo celular de
HCT116
se sembraron en
placas durante 24
hrs
Incubación
Ensayo de MTT para viabilidad celular
Las células se
sembraron en 96
plocillos de cultivo
Las células fueron
incubadas con SC
,CSP o solos
Ensayo MTT
Incubación durante
3 h
Espectrofotómetro
de micro placas

7. ENSAYO COMETA
25 min
25 min
A un pH de 13
Células teñidas
con bromuro de
etidio
Cuantificación de la
fragmentación del ADN
Acido
tricloroacético
15 min
Cuantificación
(difenilamina)

8. CITOMETRÍA DE FLUJO
* Dihexyloxacarbocyanine
yoduro
* Yoduro de propidio
Clasificación de células
HeLa y células HCT116

9. APOPTÓSIS EN MATRIZ
Kit de apoptosis de
matriz humana
Células HeLa :
tratadas y no
tratadas
Quimioluminiscencia
Escaneo de
membrana
Cuantificació
n :
• Con
tratamiento
vs. Células
sin tratar.Relación
expresada:

10. ANÁLISIS POR WESTERN BLOT
Células
T47D
Electrofor
esis
Anti-p50
Anti-p65
GAPDH • Densitom
etria

11. ANÁLISIS ESTADÍSTICO
• La significancia estadística fue calculada por
one-way analysis de varianza ANOVA .
• El nivel de significancia es definido como
p<0.05

12. RESULTADOS
• Efecto de SC y CSP en viabilidad celular

13. EFECTO DE SC Y CSP EN
MORFOLOGÍA CELULAR

14. EFECTO DE SC Y CSP EN
FRAGMENTACIÓN DE DNA

15. EFECTO DE SC Y CSP EN
PROTEÍNAS SEÑALIZADORAS DE
APOPTOSIS

16. EFECTO DE INHIBIDORES DE
CASPSAS Y P53

17. EFECTO DE SC Y CSP EN
TRANSLOCACIÓN NUCLEAR P50 Y
P65

18. DISCUSIONES
T47D
HCT116
A431
HeLa
Reducen viabilidad
celular en de una
manera dependiente de
concentración.
Apoptosis
Reducción
m
Fragmentación
de DNA

19. Proteínas anti-
apoptoticas
son inhibidas
Survivin Bcl-2 IAPs
• Vía p53
• Vía
caspas
SC y
CPS
Reguladas a
nivel
transcripcional
por NF- B
SC y CSP son capaces de inhibir
translocación nuclear p50y p65.

20. CONCLUSIONES
• CS y CSP inducen muerte celular por
características como: reducción m y
fragmentación de DNA.
• SC y CSP no actúan vía p53; y la activación
de las caspasas son las moléculas clave de
su efecto.
• La significativa reducción de la expresión de
varias proteínas antiapoptóticas sugieren
propiedades anticancerígenas
prometedoras de SC y CSP.
• SC y CSP son capaces de inhibir
translocación nuclear p50y p65.
• Son necesarias posteriores investigaciones

21. REFERENCIAS
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