about chromatography, a presentation in Greek
Από τα επιστημονικά μαθήματα για ειδικευόμενους Βιοπαθολόγους,Βιοχημικούς,Τεχνολόγους Ιατρικών Εργαστηρίων & Παρασκευαστές.
10. Τι ακριβώς είναι η Χ;
• Σύνολο μεθόδων,ΔΙΑΧΩΡΙΣΜΟΥ,απομόνωσης και
ταυτοποίησης ουσιών σε μίγματα (βιολογικά υγρά).
• Οι ουσίες διαχωρίζονται καθώς «τρέχουν» σε ένα
διαχωριστικό μέσο με διαφορετικές ταχύτητες,αφού
ακολουθούν διαφορετικά μονοπάτια, συνδέονται με
διαφορετική ένταση στο διαχωριστικό μέσο, είτε
προσροφώνται λιγότερο,περισσότερο ή καθόλου στο
δ.μ.
• Αποτελει βασικό εργαλείο για απομόνωση-ταυτοποίηση
και μελέτη
πρωτεϊνών,πεπτιδίων,αμινοξέων,γλυκοπρωτεϊνών,ορμο
νών και ορμονικών μεταβολιτών.
• Με φασματοφωτομετρικές και άλλες μεθόδους μπορεί να
προσδιοριστούν ποσοτικά.
14. Χρωματογραφία προσρόφησης
• Ο Διαχωρισμός των ουσιών τελείται με την
προσρόφησή τους σε ουσίες κοκκώδους
υφής (Αl2O3),oι οποίες τοποθετούνται
καθέτως σε γυάλινους σωλήνες (σιφώνια-
προχοϊδες ).
20. Χρωματογραφία Λεπτής Στιβάδας
TLC
• To προσροφητικό μέσο (στατική φάση )
επιστρώνεται ως λεπτή στιβάδα σε γυάλινη
πλάκα.
• Τοποθετείται το δείγμα στο άκρο της,
σημειώνεται η θέση του, η πλάκα εμβαπτίζεται
σε διαλύτη αναπτύξεως της χρωματογραφίας και
το σύστημα τοποθετείται σε γυάλινο θάλαμο.
• Ο Διαλύτης ανερχόμενος συμπαρασύρει και
διαχωρίζει σε κλάσματα ,το μίγμα ουσιών.
• Κατόπιν εμφανίζεται το χρωματογράφημα και
υπολογίζεται ο συντελεστής κατακράτησης RF
(retention factor).
24. Επιστρωμένες (στη μία πλευρά)
αντικειμενοφόρες πλάκες
• Προσροφητικό μέσο Silica gel 10% σε
CH3OH-CHCl3.Βυθίζουμε τις πλάκες
(πλάτη με πλάτη,ανά δύο, με συνδετήρα.
51. HPLC για Ηb S
• Δρεπανοκυτταρα (ερυθρά με αλλοιωμένο
σχήμα και λειτουργία εξ αιτίας της
παθολογικής αιμοσφαιρίνης s
(πολυμερισμός αιμοσφαιρινης Α )
οφειλόμενη σε μιά μετάλλαξη (Val αντι
Glu)
64. Και η ηλεκτροφόρηση εντάσσεται
στο πεδίο της χρωματογραφίας
• Αφού διαχωρίζουμε πρωτεΐνες,βάφουμε
με χρωστικές,υπολογίζουμε
συγκεντρώσεις (έστω έμμεσα με
φωτόμετρο και ντενσιτόμετρο)
66. Τύποι Αιμοσφαιρίνης που συνήθως
απουσιάζουν από τον οργανισμό
• Τύποι Αιμοσφαιρίνης που συνήθως απουσιάζουν από τον οργανισμό
• Αιμοσφαιρίνη C: Αυτή η αιμοσφαιρίνη προκαλεί τα ερυθρά αιμοσφαίρια
• να λύονται ευκολότερα από το κανονικό.
• Αυτά τα ερυθρά αιμοσφαίρια έχουν μειωμένη διάρκεια ζωής.
• Αιμοσφαιρίνες D/E: Όταν υπάρχουν αυτοί οι τύποι αιμοσφαιρινών σε έναν ασθενή με δρεπανοκυτταρική αναιμία
ή θαλασσαιμία, η ασθένεια τείνει να είναι πιο σοβαρή.
• Αιμοσφαιρίνη Η: Αυτός ο τύπος αιμοσφαιρίνης διαταράσσει την κανονική μεταφορά οξυγόνου στους ιστούς του
σώματος. Η Αιμοσφαιρίνη Η δεσμεύει το οξυγόνο με τέτοιο τρόπο που το εμποδίζει από το να είναι διαθέσιμο
στους ιστούς.
• Αιμοσφαιρίνη S: Αυτός ο τύπος αιμοσφαιρίνης αναγκάζει τα ερυθρά αιμοσφαίρια να πάρουν σχήμα δρεπανιού
(δρεπανοκύτταρα), ως απόκριση στα μειωμένα επίπεδα οξυγόνου. Η παρουσία της αποτελεί τη βάση για τη
διάγνωση του στίγματος της δρεπανοκυτταρικής αναιμίας και της δρεπανοκυτταρικής αναιμίας.
• Τιμές Αναφοράς
• Ενήλικες
• o Αιμοσφαιρίνη Α1: > 95.0%
• o Αιμοσφαιρίνη Α2: 1.5 - 3.3%
• o Αιμοσφαιρίνη F: < 1.8%
• o Αιμοσφαιρίνη C: Απουσία
• o Αιμοσφαιρίνη D: Απουσία
• o Αιμοσφαιρίνη E: Απουσία
• o Αιμοσφαιρίνη H: Απουσία
• o Αιμοσφαιρίνη S: Απουσία
67. Hb A2
• Β-Θαλασσαιμία
• Προκαλείται από μεταλλάξεις στο γονίδιο HBB
στο χρωμόσωμα 11. Η σοβαρότητα της νόσου
εξαρτάται από τη φύση της μετάλλαξης. Οι
μεταλλάξεις αυτές έχουν ως συνέπεια τη
μειωμένη παραγωγή (ή την αναστολή σύνθεσης)
β-αλυσίδων, με αποτέλεσμα η περίσσεια των α-
αλυσίδων να σχηματίζει τετραμερή με σφαιρίνες
δ ή γ, σχηματίζοντας αντίστοιχα τις
αιμοσφαιρίνες Α2( σπουδαία διαγνωστική αξία)
και F.
68. Β-Μεσογειακή Αναιμία
• Στην ομόζυγη μορφή οι πάσχοντες
• κληρονομούν και από τους δύο γονείς τα
• υπεύθυνα για την διαταραχή γονίδια και
• υπάρχει διαταραχή της σύνθεσης των
• β
• αλυσίδων με αποτέλεσμα την ελάττωση του
• συνολικού ποσού της αιμοσφαιρίνης που
• περιέχεται στο ερυθροκύτταρο και επομένως
• την δημιουργία βαριάς υποχρωμίας. Εξαιτίας
• της μειωμένης παραγωγής των β αλυσίδων
• επέρχεται, κατά κανόνα σχεδόν, αύξηση της
• παραγωγής
• των γ ή δ αλυσίδων, με
• αποτέλεσμα την αύξηση των ποσοτήτων
• των F και Α αιμοσφαιρινών που περιέχονται
• στα ερυθροκύτταρα.
74. Η παρουσίαση αυτή έγινε στα
πλαίσια των μαθημάτων
• Των ειδικευόμενων
Βιοπαθολόγων,Βιοχημικών,Τεχνολόγων
Ιατρικών Εργαστηρίων&Παρασκευαστών,τον
Μάρτιο του 2012, στο Νοσοκομείο Παναγία-
Άγιος Παύλος στη Θεσσαλονίκη.
και αποτελεί βάση για περεταίρω προσέγγιση
θεμάτων που ενδιαφέρουν το προσωπικό του
Εργαστηρίου.
Κ.Φλωρίδης Βιολόγος ,μέλος του
Επιστημονικού Συμβουλίου.
Στον τελευταίο σωλήνα εκλούεται και προσλαμβάνεται η δεύτερη ουσία.Τα κλάσματα μπορεί να επεξεργασθούν περεταίρω με βιοχημικές μεθόδους (πχ φασματοφωτομετρικά) για τον υπολογισμό της συγκέντρωσής τους κλπ. Η χρωματογραφία στήλης είναι μια εφαρμογή που αναλόγως του βιολογικού υλικού και του διαχωριστικού μέσου μπορεί να ανήκει στις κατηγορίες χρωματογραφία προσροφήσεως,ιοντοανταλλακτική χρωματογραφία,στερεοδομικής συγγένειας (affinity),μοριακού κόσκινου κλπ.
Το RF υπολογίζεται διαιρώντας την απόσταση που διανύουν τα διαχωριζόμενα κλάσματα του δείγματος προς την απόσταση που διανύει ο Διαλύτης. Ο λόγος είναι χαρακτηριστικός για τις διαχωριζόμενες ουσίες του δείγματος.
Στο εμπόριο πωλούνται έτοιμες κάρτες με μια ασημένια επίστρωση από sillica gel με δείκτη φλουοροσκεϊνης
Ετεροζυγοι β-Μ δεν αποκλείονται ως αιμοδοτες αν τηρούν τα γενικά κριτηρια.Ετεροζυγοι δρεπανοκυτταρικης αποκλείονται