corregida

1. Centro de estudios tecnológicos del mar No.11
Determinación de coliformes
totales y fecales por el método del
número más probable
Materia: Análisis bilógicos del agua
Maestro: José Luis Peña Majarrez
Alumna: Sonia del Carmen Camarena Navarro
Especialidad: Laboratorista Ambiental
Grupo: 3ro A

2. Introducción:
En esta práctica determinaremos los organismos coliformes que son un grupo de
especies de bacterias que tienen una gran iimportancia relevante como indicadores de
contaminación del agua y los alimentos. Las bacterias de este género se encuentran
principalmente en el intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es
decir, homeotermos, pero también ampliamente distribuidas en la naturaleza,
especialmente en suelos, semillas y vegetales, estas son Bacterias tipo Escherichia
coli capaces de crecer en medio aeróbico. Se desarrollan en temperaturas de 35° C a
37°C (+/- 1°C), Fermentan la lactosa, produciendo gas y ácido láctico. También
determinaremos los coliformes fecales que poseen las mismas propiedades que los
coliformes, pero son termotolerantes y pueden fermentar la lactosa a 44°C.
Objetivo:
El objetivo de esta práctica es determinar por el método del numero más probable
descrito en la norma oficial mexicana 112-SSA1-1994 las abundancias de coliformes
totales y fecales en el agua del arroyo del cañón de Doña Petra, de Maneadero, del
invernadero del CETMAR, del mar del Sauzal, de Pedregal-Playitas y de las peceras de
los nemos y acumios de acuicultura del CETMAR.
Método:
*Importante: que toda la práctica se realice en un ambiente estéril, lo que quiere decir
que es necesario realizarlo en el laboratorio y con dos mecheros prendidos.
1-Preparar tubos: Tomar 9 tubos de ensaye y dentro de cada uno colocar un tubo
Durham.
2-Preparar caldo lactosado:(para coliformes totales)
a) sacar la cuenta de cuanta solución ocuparemos
b) pesar 6.5 gramos del medio de cultivo en la balanza granataria y colocarlo en el
matráz para luego disolver.
c) En un matráz de 500 ml aforar con agua destilada (en este caso el agua de garrafón)
d) Agitar hasta que quede todo disuelto.
e) Agregar la solución de caldo lactosado a los tubos de cada serie que tienen los tubos
Durham adentro, hasta que los cubra a aproximadamente 1cm arriba de los tubos
Durham y sacar el aire que quede dentro de estos.
d) esterilizar por 15 minutos, a 121°C y 15 libras de presión
3-sembrar
a) tomar los 9 tubos anteriores y a 3 tubos de ensaye con una pipeta agregar 0.1ml de
la muestra de agua a cada uno
b) a otros 3 con otra pipeta agregarles 1 ml de la muestra de agua c/u

3. c) a los últimos 3 agregar 10 ml
4-Incubar por 24-48 hrs a 36° C
5- checar positivos viendo la producción de gas (burbujitas en tubos Durham), los que
tienen gas son los positivos.
6- resembrar en EC (para coliformes fecales) repetir el paso 1y 2 pero esta vez no
serán 9 tubos, ahora serán los que hayan salido positivos y además en vez de ser caldo
lactosado ahora será en medio EC del cual serán 18.5gramos en 500 ml de agua
destilada
7-poner muestra de agua
a) tomar los tubos con EC y ponerles una aza a cada uno
8- Reincubar a 44°C de 24- 48 horas.
9-checar positivos viendo la producción de gas
10-Calcular el número más probable de coliformes totales y fecales Calcularlo
utilizando la tabla #6 que se muestra en el diagrama de flujo.
Diagrama de Flujo:
1) acomodar los tubos
2) preparar caldo lactosado (para coliformes totales)
6.5gr 500ml
Agitar
esterilizar
Echar caldo lactosado y sacar burbujas

4. 3) sembrar
4) incubar
24-48hrs
5) checar burbujas

5. 6) resembrar positivos en EC (para coliformes fecales)
500ml
18.5 gramos
Echar EC y sacar burbujas
7) poner muestra de agua

6. 8) reincubar
9) checar positivos

7. 10) Calcular

8. Resultados
En la siguiente tabla se muestran los resultados de los tubos que dieron positivo en
cada medio de cultivo y el cálculo de el numero más probable de coliformes totales y
fecales según la tabla anterior de la NOM 112-SSA1-1994.
Caldo lactosado Medio EC
Muestra 10ml 1ml 0.1ml NMP 10ml 1ml 0.1 NMP
de agua coliformes coliformes
totales fecales
Acuicultura 3 3 2 1,100 3 3 0 240
(Acumios)
Maneadero 3 3 3 >/= 2,400 3 3 3 >/=4800
Acuicultura 3 3 3 >/= 2,400 3 3 3 >/=4800
(nemos)
Pedregal-playitas 3 3 3 >/= 2,400 3 2 1 30-440
Cañón de Doña 3 3 3 >/= 2,400 1 2 3 No
Petra determinado
Invernadero 3 3 3 >/= 2,400 3 3 3 >4800
Sauzal(mar) 3 3 0 240 3 0 0 23
Discusión
El agua más contaminada es la de el invernadero, esto probablemente sea porque se
desarrollan en altas temperaturas, tal y como está el invernadero. La menos
contaminada es la del Sauzal y probablemente sea porque está más fría , limpia y
principalmente por el efecto bactericida que es la muerte de bacterias por sustancias
que sueltan los organismos para defenderse de estos. El numero más probable de
coliformes fecales en el cañón de Doña Petra no está determinado, sin embargo
investigue y ha habido varias enfermedades gastrointestinales en los habitantes de
esta zona lo cual probablemente sea por coliformes fecales.
Conclusión
El agua más contaminada es la que se encuentra en el invernadero con el NMP >4800
de coliformes fecales y la menos contaminada fue la del mar del Sauzal por lo cual te
puedes meter a nadar agusto sin que te pase nada malo.
Bibliografía
-http://es.wikipedia.org/wiki/Coliforme el día 17/ octubre
-Apuntes en clase 13/septiembre- 14/octubre
-http://es.wikipedia.org/wiki/Bactericida - 20/octubre
-http://www.elvigia.net/noticia/solicitan-no-tocar-arroyo-en-ca-n -1/noviembre