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ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO
CARRERA INGENIERÍA AGROPECUARIA
SANTO DOMINGO
Asignatura: Microbiología
Estudiante: Renato Andrade Cevallos
Fecha: Miércoles 27 de marzo del 2013
Práctica No.4

2. 1. Tema
Aislamiento de microorganismos.
2. Objetivo general
Adiestrarse en técnicas de aislamiento y purificación de microorganismos comunes del
ambiente suelo, agua y aire.
3. Objetivos específicos
Aprender a tomar muestras de microorganismos.
Conocer cuál es el medio de cultivo necesario para los diferentes microorganismos.
4. Revisión de literatura
(Ingraham, J. 1992) Los microorganismos son ubicuos, por lo que la preparación de un
cultivo puro implica no solo el aislamiento de un determinado microorganismo a partir
de una población microbiana natural mixta, sino también el mantenimiento del
individuo aislado y de su descendencia, en un ambiente artificial al que se impide el
acceso de otras. Los microorganismos no requieren mucho espacio para su desarrollo de
ahí que puede crearse un ambiente artificial dentro de los confines de un tubo de ensayo,
de un matraz o de una placa Petri.
(Gutiérrez, S. 2006) Es posible utilizar diferentes estrategias para el aislamiento e
identificación de las cepas del grupo mutans .Considerando los medios líquidos, es
posible recomendar el Caldo Todd Hewitt, que permite el desarrollo de la mayoría de
los microorganismos especialmente útil para el cultivo de estreptococos fastidiosos. Con
relación a las medidas de los sólidos, es recomendable el uso del Agar Mitis Salivarius,
adicionalmente 20% de sacarosa, 0,2 U/ml de bacitracina y solución de telurito de
potasio al 1% además este medio contiene otras sustancias inhibidoras, como azul tripán
y cristal violeta.
5. Equipos
Estufa de incubación
Estufa de esterilización
Cámara de flujo laminar
Autoclave
Cocineta eléctrica
6. Materiales
Fruta en descomposición
Pipetas volumetricas - automáticas
Probetas
Vasos de precipitados
Erlenmeyer
Matraces

3. Kit de disección
Mechero de alcohol
Platos petri conteniendo medio de cultivo
7. Reactivo e insumos
Alcohol antiséptico
Agua destilada
Hipoclorito de sodio
8. Procedimiento
Aislamiento de microorganismos de material vegetal enfermo.
Con un bisturí se corto cuatro pequeñas muestras de la muestra vegetal en donde se
hallaba la zona afectada por hongos, se la colocó primeramente en una caja petri que
contenía hipoclorito de sodio al 5% durante 1 minuto y medio, luego lo pasamos a una
caja petri con alcohol al 70% durante el mismo tiempo, y por último las lavamos en una
caja con agua destilada. Luego se puso en la placa petri conteniendo medio de cultivo
PDA, se selló el plato petri con papel parafilm.
Etiquetamos el aislamiento con la información de procedencia del material, fecha y
medio de cultivo utilizado.
Se colocó para la incubación de forma invertida en una estufa a 28°C por 48 horas
Aislamiento de microorganismos del suelo
Se tomó la muestra de suelo seca y tamizada y coloque en forma de grumos en el
interior de un plato petri conteniendo medio de cultivo. Se colocó a incubar la muestra
en el interior de una estufa a 28°C por 48 horas.
Aislamiento de microorganismos del aire
.
Se abrió la tapa y se expuso el medio de cultivo por cinco minutos al ambiente, en el
área de la cual quisimos obtener información, en el reposaran los microorganismos
existentes en esta área.
9. Resultados
Obtuvimos tres cajas con cultivos de diferente tipo, con bacterias gram positivas, gram
negativas y un cultivo de hongos.
Al momento de enjuagar en agua destilada las muestras de la materia vegetal afectada
por hongos se logró observar como se movían rápidamente en el agua.
10. Conclusiones
Depende de el tipo de microorganismo que queramos reproducir el tipo de
cultivo a utilizar, ya sea este PDA para hongos, manitol para reproducir gram
negativas y macconkey para las bacterias gram positivas.

4. El movimiento de las muestras de materia vegetal al introducirlas en el agua
destilada se debió al cambio de pH de las diferentes soluciones, lo que provocó
estrés en los microorganismo presentes en las muestras.
11. Recomendaciones
Al tomar muestras buscar elementos que contengan estos microorganismos.
Al momento de realizar la desinfección de las muestras vegetales tener mucha
precaución en que no se pase del tiempo previamente establecido, caso
contrario las muestras se verán afectadas y serán menos efectivas al momento
de cultivarlas.
12. Anexos
13. Bibliografía
Gutiérrez (2006) Fundamentos de ciencias básicas aplicadas a la odontología.
Bogotá: Pontificia Universidad Javeriana
Ingraha,J. (1992). Microbiología. En R. Ingraha,J, Microbiología. Barcelona:
Reverté.