1. RESISTENCIA A LA ACCION DE LA INSULINA EN CULTIVOS PRIMARIOS DE MUSCULO ESQUELETICO DE HUMANOS Dr. Jesús Alberto Olivares Reyes Departamento de Bioquímica Centro de Investigación y de Estudios Avanzados del IPN.

3. Músculo Esquelético

4. TejidoAdiposoPromueveprocesosanabolicos Inhibeprocesoscatabolicos

5. Mecanismos de Acción de la Insulina

6. Vía de señalización de insulina Ins Glucosa IR Membrana plasmática PI(3,4,5)P3 PI(4,5)P2 PDK1 PDK1 IRS IRS PKCζ/λ Complejo APS/CAP/ Cbl p85 Akt T308 S473 p110 Crk P P PY PY PY PY PY PY PY PY PY PY PY C3G p85 p85 TC10 P p110 p110 Rab-GTP act Cbl PDK2 Citoplasma PKC ζ/λ P P AS160 GLUT4 Par 6/3 PI(3,4,5)P3 Rab-GDP inh PI3K Olivares-Reyes, 2008

7. Regulación de la Señal de Insulina

8. Mecanismos de regulación de la señal de insulina.

11. Infertilidad

12. HiperandrogenismoHIPERANDROGENISMO

14. SHBG (globulina Transp. De esteroides sexuales)

15. Subunidad 2 de FSH

16. Receptor de insulinaDisminución del # de receptores Inhibición del sitio de unión por autoanticuerpos Degradación del receptor Disminución de la fosforilación en tirosina del receptor Correlato de incremento de TNF-α e IL-1 con IR pSer Etiopatología (SOP)

18. No hay diferencias en la abundancia proteómica de IR, IRS-1 y la subunidad regulatoria p85 de PI3K de controles y SOP.

19. Existe un incremento significativo en IRS-2Dunaif et al. Am J Physiol Endocrinol Metab 281: E392–E399, 2001.

20. Justificación. La prevalencia global de HA en la consulta de endocrinología del Hospital Infantil de México es de 9.5%. Objetivo General El objetivo general del presente proyecto es estudiar las características genéticas, moleculares y fenotípicas en niñas y adolescentes que cursan con estados hiperandrogénicos relacionados con el síndrome de resistencia a la insulina.

23. Criterios de inclusión para pacientes prepúberes con hiperandrogenismo: • Hirsutismo definido por una escala de Ferriman >8 • Aparición de vello púbico antes de los 8 años de edad • Adrenarquia caracterizada por presencia de acné o actividad apócrina antes de los 8 años de edad. • Niveles de andrógenos elevados para la edad (elevación de uno de los siguientes andrógenos: androstenediona, testosterona libre, testosterona total, dehidroepiandrosterona o dehidroepiandrosterona sulfato) Criterios de inclusión para pacientes púberes con hiperandrogenismo: • Hirsutismo definido por una escala de Ferriman >8 • Pacientes en etapa postmenárquica que manifiesten irregularidades menstruales caracterizadas por oligomenorrea o amenorrea • Niveles de andrógenos elevados para la estadio puberal de tanner ((elevación de uno de los siguientes andrógenos: androstenediona, testosterona libre, testosterona total, dehidroepiandrosterona o dehidroepiandrosterona sulfato) Criterios de exclusión para ambos grupos: • Pubertad precoz verdadera • Hiperprolactinemia • Tumores secretores de andrógenos (ovario o suprarrenal) • Síndrome o enfermedad de Cushing • Variedades clásicas de hiperplasia adrenal congénita diagnosticadas en el período neonatal y que cursen con ambigüedad genital • Disgenesias Gonadales • Trastornos de la diferenciación sexual

26. algunas pacientes indiscutiblemente tienen SOP y no tienen ovarios aumentados ni presencia de quistes.

28. no hay una buena correlación entre las mediciones de las hormonas androgénicas y las mediciones del hirsutismo.Conclusion: La variabilidad de signos y síntomas son la regla en la mayoría de estudios de casos de SOP, con una baja correlación entre la morfología y los aspectos endocrinos.

29. Grupos de Estudio para el presente proyecto: Sujetos Control Pacientes HA con SOP sin Resistencia a la Insulina Pacientes HA con SOP con Resistencia a la Insulina

30. BIOPSIAS DE MÚSCULO DE VASTO IZQ. SUJETOS SANOS Y PACIENTES CON HIPERANDROGENISMO DIGESTIÒN CULTIVOS PRIMARIOS HASTA DIFERENCIACIÒN A MIOTUBOS ADMINISTRACIÓN DEL TRATAMIENTO DOSIS-RESPUESTA CURSO TEMPORAL EVALUAR LA VÍA DE INSULINA DETECCIÒN DE pAkt Ser473 pAkt thr 308

31. RESULTADOS

32. Expresión de actina sarcomérica como control de carga de proteína.

33. Expresión de actina sarcomérica como marcador de diferenciación y como control de carga de proteína. 0 5 10 30 60 2 -9 -8 -10 0 -7 -6 Insulin log M minutes

35. Fosforilación de Akt en el residuo de Ser 473 por acción de la insulina pAkt Ser473 control pAkt Ser473 IR + SOP No-IR + SOP pAkt Ser473

36. control pAkt Ser473 pAkt Ser473 IR + SOP pAkt Ser473 No-IR + SOP

37. Fosforilación de Akt en el residuo de Thr 308 por acción de la insulina control pAkt thr308 IR + SOP pAkt thr308 No-IR + SOP pAkt thr308

38. Fosforilación de Akt en el residuo de Thr 308 por acción de la insulina control pAkt thr308 IR + SOP pAkt thr308 No-IR + SOP pAkt thr308

39. Sakamoto K and Holman DG. Am J Physiol Endocrinol Metab 295: E29-E37, 2008

40. Fosforilación de AS160 por acción de la insulina

41. Fosforilación de AS160 por acción de la insulina

42. Fosforilación de AS160 por acción de la insulina

43. Incorporación de Glucosa inducida por la insulina

44. Ins IR MP PIP3 PIP2 Citoplasma IRS Akt Ras S473 GTP P p85 Grb2 SOS GDP P Raf-1 p110 PDK1 PDK2 GSK3 P PY PY PY PY PY PY mTOR Transporte de Glucosa FOXO MEK ERK1/2 Síntesis de Proteínas Adipogénesis T308 Síntesis de Glucógeno P P AS160 Regulación de la Transcripción Genética, Proliferación y Crecimiento Celular Olivares-Reyes JA, 2010

47. El estudio de incorporación de glucosa marcada evidenció una menor captación en todos los grupos de hiperandrogenismo comparados con el control y esto se encuentra asociado con una mayor fosforilación de AS160