Dokumen tersebut membahas tentang teknik pewarnaan bakteri untuk mempelajari morfologi dan membedakan jenis bakteri. Terdapat beberapa jenis zat pewarna yang dapat digunakan seperti safranin, gentian violet, dan methylene blue. Teknik pewarnaan Gram dan BTA digunakan untuk membedakan bakteri menjadi Gram positif, Gram negatif, dan mengidentifikasi Mycobacterium tuberculosis.

1. PEMERIKSAAN BAKTERI
DENGAN PEWARNAAN
LA HAINO,S.Pd,M.Si
10/6/2008
1

2. Pewarnaan
• Suatu teknik untuk mempelajari morfologi
bakteri dengan cara pemberian zat warna
kepada sel bakteri.
• Bagian-bagian sel dapat diamati, karena
dapat menyerap zat warna yang berbeda
oleh masing-masing bagian sel.
10/6/2008
2

3. Kenapa perlu diwarna ?
• Bakteri ukurannya sangat kecil 05-1 u x 10 u
• Dibawah mikroskop tidak jelass bagianbagian nya.
• Untuk melihat dengan jelas perlu diberi zat
warna.
10/6/2008
3

4. Umumnya ada 2 macam zat warna
• Zat warna bersifat asam
 Komponen warnanya adalah anion
 Dalam bentuk garam natrium
• Zat warna bersifat basa
 Komponen warna kation.
 Dalam bentuk klorida
10/6/2008
4

5. Macam-Macam Zat Warna Bakteri
No
1
2
3
4
5
10/6/2008
Nama Zat Pewarnaan
Sapranin
Gentian violet
Methylen blue
Malachit green
Karbol fuchsin
Warna Bakteri
Merah
Ungu
Biru
Hijau
Merah
5

6. Struktur Sel
Sel terdiri dari :
• Dinding sel , terdiri dari :
- lapisan peptidoglikan
- asam teikoat
• Membran plasma, terdiri dari :
- membran protein
- lapisan fosfolipid
10/6/2008
6

7. Macam-Macam Pewarnaan
1. Pewarnaan Sederhana
- Menggunakan 1 macam zat warna.
- Warna bakteri hanya 1
- Tidak dapat membedakan sifatnya.
- Untuk melihat ukuran dan bentuknya.
10/6/2008
7

8. 2. Pewarnaan Differensial
- Menggunakan lebih dari 1 zat warna
- Membedakan sifat bakteri.
- Melihat bagian-bagian bakteri.
- Dapat digunakan untuk identifikasi
bakteri tahap awal.
10/6/2008
8

9. Macam-Macam Pewarnaan Differensial
1. Pewarnaan Gram
2. Pewarnaan BTA
3. Pewarnaan Spora
4. Pewarnaan Granul
10/6/2008
9

10. Fiksasi
• Proses melengketkan sediaan pada kaca
obyek.
• Bakteri mati, tetpai tidak lisis.
• Secara Kimia : metanol
• Secara Fisika : pemanasan diatas nyala api.
10/6/2008
10

11. Pewarnaan Gram
• Ditemukan Christian Gram (1884).
• Pewarnaan dasar dan rutin dalam
identifikasi bakteri lebih lanjut.
• Kuman dibagi dua :
- Gram positif berwarna ungu
- Gram negatif berwarna merah.
10/6/2008
11

12. Tahap pewarnaan Gram
Perlakuan
Warna Bakteri
Waktu
Gram +
Gram -
Pembuatan
preparat
Fiksasi
Gentian violet
30 detik
ungu
ungu
30 detik
-
-
Cuci dengan air
Larutan iodium
Cuci dengan air
dan keringkan
Dekolorisasi
dengan alkohol 20 detik
Cuci dengan air
dan keringkan

13. Pewarnaan BTA
• Untuk mengidentifikasi kuman M. tbc dan M.
leprae
• Kuman M.tbc dan M. leprae mempunyai
dinding sel yang banyak mengandung lipid.
• Sukar ditembusi zat warna biasa.
• Perlu pemanasan.
• Bakteri M tbc dan M leprae berwarna merah.
10/6/2008
13

14. Tahap Pewarnaan BTA
Buat preparat.
Fiksasi
Zat Warna Karbol Fuchsin sambil dipanaskan (tidak
mendidih) 3 menit.
Cuci dengan air
Pelunturan dengan asam alkohol hingga bersih.
Methylen blue 1 menit.
10/6/2008
14

15. Zat Warna Pewarnaan BTA
•
•
•
•
•
•
Karbol fuchsin = merah.
Methylen blue = biru.
Asam alkohol sebagai peluntur.
Kuman BTA positif : batang berwarna merah.
Kuman BTA negatif : batang berwarna biru.
Sensitifitas : 5000 BTA / ml sputum.
10/6/2008
15

16. Metoda Pewarnaan BTA
1. Ziehl Nellson
2. Kinyoun Gabbet
3. Tan Tiam Hook.
10/6/2008
16

17. 10/6/2008
17