EVALUACIÓN DE POBLACIONES DE PERONOSPORA VARIABILIS EN LOS VALLES DE BOLIVIA PLATA, G.1; TESTEN, A. 2 & BACKMAN, P. 2 (1) Laboratorio de Fitopatología, Fundación PROINPA – Promoción e Investigación de Productos Andinos. Cochabamba-Bolivia (2) The Pennsylvania State University Department of Plant Pathology, University Park, PA, USA Contacto del Autor: g.plata@proinpa.org Trabajo realizado en el marco del proyecto SANREM-CRSP administrado por Virginia Tech La quinua (Chenopodium quinoa) es una Chenopodiacea que se cultiva en la región Andina de Sudamérica. Es un cultivo muy nutritivo y se cultiva bajo condiciones adversas de clima y de suelo. En estos últimos años, la producción de este grano ha adquirido mayor demanda por mercados internacionales (Norte América y Europa). Gracias a este incremento y por problemas del cambio climático (retraso de lluvias, concentración de períodos lluviosos alternados con períodos muy soleados), los productores buscan otros lugares como los valles para sembrar y satisfacer estas demandas. Al igual que otros cultivos la quinua es afectada por diversas plagas, entre las enfermedades se destaca el mildiu de la quinua cuyo agente causal es Peronospora variabilis, este problema es ocasional en la región tradicional de cultivo pero no así en la región de los Valles que es muy severa, ocasionando pérdidas hasta del 50%, si las plantas son afectadas antes de la formación de panoja. Con el propósito de desarrollar estrategias de manejo integrado para estas nuevas zonas, se ha realizado un estudio de las diferentes poblaciones de Peronospora variabilis con el objeto de comparar su similitud o su diferencia y además seleccionar el mejor sitio para la evaluación de material resistente. La metodología empleada fue la recolección de foliolos enfermos y su posterior envió a la Universidad de Penn State para su caracterización molecular. Se recolectó muestras de 3 departamentos: Cochabamba, Oruro y Sucre, haciendo un total de 16 aislamientos para su estudio. De cada sitio se evaluaron cinco hojas (A-E) procediéndose a la extracción de ADN y la amplificación utilizando los arrancadores ITS4 y DC6. El método utilizado fue una PCR semianidada. Las secuencias obtenidas para los análisis filogenéticos fueron procesadas mediante ChromasLite (Technelysium Pty Ltd) y alineadas con el programa MUSCLE (Edgar, 2004) en MEGA5 y revisada manualmente. Analizados los datos, estos nos confirman que el agente causal es Peronospora variabilis, además que las poblaciones presentes en los diferentes sitios son y no son iguales. Por lo tanto, las variedades resistentes procedentes del programa de mejoramiento genético deberán ser evaluadas en diferentes regiones y deben satisfacer la demanda del mercado de una quinua orgánica. Palabras clave: Quinua, Peronospora variabilis, aislamientos

1. EVALUACIÓN DE POBLACIONES
DE Peronospora variabilis EN LOS
VALLES DE BOLIVIA
Giovanna Plata Rosales, Anna Testen,
Paul Backman
Ibarra, 2013

2. Importancia
del problema
Uyuni

3. Síntomas

4. Objetivo
v Caracterizar las diferentes
poblaciones de Peronospora variabilis
con el propósito de comparar su
similitud o su diferencia para
seleccionar el sitio ideal para la
evaluación de material resistente.

5. Materiales y Métodos

6. Materiales y Métodos
v Recolección de foliolos
e n f e r m o s d e t r e s
departamentos.
v E n v i ó d e m u e s t r a s
deshidratadas.
v 17 muestras (5 replicas
codificadas con las letras A-E)

7. Datos de los 17 aislamientos de Peronospora
variabilis
Código de Muestra
Lugar
1
BDM2
Cochabamba
2
BDM3
Cochabamba
3
BDM4
Cochabamba
4
BDM5
Cochabamba
5
BDM6
Cochabamba
6
BDM8
Cochabamba
7
BDM9
Cochabamba
8
BDM10
Cochabamba
9
BDM11
Chuquisaca
10
BDM12
Chuquisaca
11
BDM13
Oruro
12
BDM14
Oruro
13
BDM15
Chuquisaca
14
BDM16
Chuquisaca
15
BDM17
Chuquisaca
16
BDM18
Chuquisaca

8. Materiales y Métodos
v Extracción de ADN
(DNeasy Plant Mini Kit )
v PCR semianidada
v Arrancadores ITS4, ITS6 y
el DC6

9. Materiales y Métodos
Condiciones de reacción de la PCR:
Reactivos Volumen
Master Mix 12.5 µl
Primer DC6/ITS4
(5µM)
ITS6/ITS4
1 µl
Agua libre de
nucleasas
5.5 µl
ADN 5.0 µl
Volumen total 24.0 µl

10. Materiales y Métodos
Condiciones de ciclaje de la PCR:
Pasos Condiciones
Denaturación inicial 95° C por 2 minutos
30 ciclos de:
Denaturación 95° C por 20 segundos
Hibridación 55° C por 20 segundos
Extensión 72° C por 50 segundos
Extensión final 72° C por 10 minutos
v Las secuencias obtenidas para los análisis filogéneticos fueron
procesadas mediante el ChromasLite (Technelsyum Pty Ltda.
v Alineadas con el programa MUSCLE en MEGA5 y revisada
manualmente

11. Resultados

12. Reconstrucción filogenética de
aislamientos bolivianos de
Peronospora variabilis utilizando
la región intergénica de los
genes ribosomales mediante el
método de Maximun Likehood
utilizando el programa MEGA 5
utilizando el modelo de
sustitución Kimura 2 con
distribución gama y un bootstrap
de 1000 repeticiones.

13. Reconstrucción filogenética de
aislamientos bolivianos de
Peronospora variabilis utilizando
el gen citocromo c-oxidasa
subunidad 2

14. Mildiu de la Quinua en Bolivia
Caracollo, Oruro
Uyuni, Potosí
Tiraque, Cbba

15. Tiraque, Cbba
Caracollo, Oruro

16. Conclusiones

17. v Todos los aislamientos bolivianos corresponden a
Peronospora variabilis y reflejan una sola población.
v A pesar de que no se ha detectado diferencia alguna a
nivel molecular, bajo condiciones de campo se observan
diferencias en la sintomatología las cuales podrían
atribuirse a las condiciones ambientales.
v Los materiales generados por el programa de
Mejoramiento pueden ser evaluados y seleccionados en
cualquiera de los sitios de producción donde se presente
el problema.
Conclusiones