1. Silenciamiento de genes mediante
RNA de interferencia
17 | 06 | 2011
Nicole Salgado | Silvia Lazzarino

2. CONTENIDOS
.1.
Introducción
.2.
Mecanismo
.3.
Función
.4.
Aplicación
.5.
Análisis

3. Un poco de historia sobre los RNA de interferencia..
INTRODUCCIÓN
Trabajo de botánicos con petunias. Se descubre un fenómeno
1990 de silenciamiento que fue llamado “co-supresión”.
Trabajos el hongo Neurospora crassa. Se descubre un
1992 fenómeno equivalente al de co-supresion que fue llamado
“quelling”.
Andrew Fire y Craig Mello trabajaron el silenciamiento de
1998 genes en C.elegans, definiendo el rol del RNA de interferencia
(iRNA).
Tomas Tuschl descubre el uso directo de los siRNA, lo que
2000 permite su aplicación en mamíferos.
Andrew Fire y Craig Mello ganan el premio Nobel de medicina
2006 por descubrir el silenciamiento de genes por iRNA.

4. INTRODUCCIÓN
Este mecanismo fue
Caenorhabditis elegans
observado por
primera vez en 1990,
en plantas (Petunias).
Más tarde se observó en:
- Caenorhabditis elegans
-Neurospora crassa
-- Drosophila Melanogaster
Drosophila Melanogaster
Luego se observó en mamíferos
Neurospora crassa

5. MECANISMO

6. MECANISMO ¿Qué es el RNA de interferencia y cuál es su mecanismo de acción?
Video Nature Reviews:
http://www.nature.com/focus/rnai/animations/index.html

7. MECANISMO RNA de interferencia
A B C D
A B C D
siRNA se siRNA se acopla RISC iRNA se une al RNAm Se evita
introduce (RNA induced silencing complex) Slicer Ago 2 corta el traducción y se
en la célula y se le remueve la hebra RNAm silencia el gen
sentido

8. ¿Cuál es el rol natural del iRNA en la célula?
Este mecanismo actúa como un sistema inmune
PROTECCIÓN
FUNCIÓN
a nivel celular.
Este sistema regula la expresión de genes,
REGULACIÓN especialmente en el desarrollo.

9. Usos del iRNA como metodología experimental…
APLICACIÓN

10. Usos del iRNA como metodología experimental…
APLICACIÓN
FIGURA 1 FIGURA 2
Análisis de la expresión de b- Efecto de la supresión de niveles de
arrestina en células HEK293 B-arrestina mediada por siRNA en la
transfectadas con siRNA. internalización del receptor 7MS.

11. Aspectos a considerar sobre la metodología experimental…
Técnica de fácil uso.
VENTAJAS Gran variedad de mecanismos efectores.
ANÁLISIS
Existen programas gratuitos para el diseño de iRNA.
Producción de siRNA ampliamente extendida.
DESVENTAJAS
El silenciamiento no es 100% completo.
Puede haber silenciamiento inespecífico.
Es necesario utilizar un mecanismo para que el iRNA
ingrese a la célula blanco.

12. Otras proyecciones al uso de los iRNA…
APLICACIÓN
Eliminar de la célula Anular la función Interferir en la
los elementos de proteínas que expresión de
esenciales para un estén involucradas genes
patógeno. en enfermedades. patógenos.

13. FIN

14. BIBLIOGRAFÍA
• Maria Fernanda Correa, Haroution Adjounian, Sarkis Horacio,
“Silenciamiento de genes mediante RNA de interferencia,
consideraciones del mecanismo y diseño de los sistemas efectores”,
Archivos de farmacología y terapéutica, 2007.
• www.nature.com - RNA interference
• “Biotecnología, RNA de interferencia: el silencio de los genes”,
Tomás López, Daniela Silva, Susana López y Carlos Arias.
• Seungkirl Ahn, Christopher D. Nelson, Tiffany Runyan Garrison,
William E. Miller, and Robert J., “Desensitization, internalization, and
signaling functions of !-arrestins demonstrated by RNA interference”
PNAS, 2002.

15. Sistemas efectores
ANEXO
shRNA