Molecular Biology Intro

2. El DNA o RNA información genética

3. 2. Es flexible

4. 3. Modificación de la información para generar nuevas
instrucciones
 Replicación, reparación
 Mutaciones

5. Información basada en el orden
Critico
Instrucciones

6. 4. Informacion pasa de
generacion en
generacion;
• cada cadena puede servir
como molde para fabricar
su complementaria;
ATGCCTTTAACCGATAG
TACGGAAATTGGCTATC

7. Las secuencias de ADN
son copiadas
exactamente durante
los procesos de
replicación
Errores= Mutaciones
Variabilidad Genética
o cambios evolutivos

8.  Secuenciar un ADN
equivale a descifrar
su mensaje genético.
•El Codigo
• Genético

9. Técnicas Moleculares Herramientas
de la Biologia Molecular
 Aloenzimas, Southern, Northern
 RFLP’s
 PCR- simples, multiples, cuantitativas
Microsatélites
AFLP’s
 SECUENCIACION

11. PRINCIPIOS EXTRACCION
ADN
¿Cómo podemos extraer el DNA de
cualquier tejido?

12. Selección de las muestras y
Extracción de DNA

13. Es Importante Diferenciar dos
Conceptos
 Extracción: sacar los componentes desde un
compartimento celular. Involucra:
 Lisis de las células que contienen a los AN
 Inactivación de nucleasas
 Clarificación: separación de los AN de los restos
celulares (debris).
 Purificación: Separación de AN:
 De proteínas solubles
 De otros AN no deseados
 De Lípidos, carbohidratos
 De sales y otros compuestos orgánicos

14. EL PROBLEMA
Para muchas aplicaciones que involucran manipulación
de AN es necesario disponer de éstos en estado puro.
 Por qué purificar?
• Nucleasas que se liberan al lisar las células degradan los ácidos
nucléicos.
• Interferentes que inhiben a las enzimas que se usan en ingeniería
genética.
•El desafío es separar los ácidos nucléicos deseados desde una mezcla
compleja, manteniendo la integridad de los AN
•Contaminantes: Proteínas, lípidos y carbohidratos, sales del
medio, iones, etc.

15. Etapas básicas de un procedimiento general para
Extracción y Purificación de AN
Disgregación o fragmentación del tejido
Lisis celular
Clarificación
Purificación
Cualitativo: Análisis
electroforesis
Cuantitativo:
espectrofotometría UV
Estas etapas
deben ir
acompañadas de
medidas o
agentes que
inactiven
nucleasas
celulares
Durante todo el
procedimiento se
debe usar
soluciones y
material estéril, ademas
de guantes

17. 1. Métodos de fragmentación y lisis
celular para la extracción de AN
El procedimiento ideal de lisis debe tener la fuerza necesaria para
romper el material de inicio (células o tejido) y la delicadeza requerida
para preservar las moléculas de interés (ADN o ARN).
 Métodos físicos
 Homogenización mecánica,
 Homogenización en solución
 Molienda manual en mortero
 Bolitas de vidrio
 Sonicación
•Métodos químicos
– Detergentes
•Métodos enzimáticos
– Lysozima: rompe enlaces -1.4- entre N-acetil murámico y N-acetil
glucosamina de peptidoglicán de la pared celular de
bacterias
– Lyticasa: rompe enlaces -1.3 de glucano de levaduras
– Proteasas: rompe enlaces peptídicos de prot. de pared y
membrana plasmática e interacciones célula-célula.

18. Procedimiento
 Seleccione un tejido bien preservado
 Destrucción química y mecánica de las
células del tejido
 Desnaturalización de las Proteínas con la
proteinasa K y precipitación con la
centrifugación.

20.  La funcion basica del aislamiento del DNA esla
ruptura de la estructura celular se produce un
lisado, se separa el DNA soluble de los
fragmentos de elementos y otros materiales
insolubles y purificar este DNA de las proteinas
solubles y otros acidos nucleicos.
 Historicamente esto se ha hecho con soluciones
organicas como el fenol-cloroformo seguidos de
un precipitacion con etanol; otros utlizan sales
y dialisis.
 Estos metodos emplean mucho tiempo y se
utilizan sustancias con peligro para la salud
humana

21. Heads
Tails
Grease Soap Grease and Soap

23. DNA Extraction Procedure - 2
 Obtain DNA from digestion
 Add ethanol
 Centrifuge
 Wash the pellet
 Resuspend

25. http://www.youtube.com/watch?v=JNl1kjw
9ZDQ&feature=related

26. ELECTROFORESIS

27. Visualización del DNA

28. Aloenzimas
 La técnica más ampliamente usada
en los inicios de la Biología
molecular, consiste en la detección
de las variantes electroforéticas de
enzimas.

29. Toma en cuenta el hecho de que diferentes fragmentos de
proteínas no desnaturalizadas migran a diferentes
velocidades a través de geles de agarosa o acrilamida (o
medios de soporte como las tiras de celulosa) a los cuales
se les ha aplicado una corriente electrica
Nimiadina Herrera- STRI

31. Automated Sequencing

32. Secuenciación
A T C G A T C G A T C G A T C G