Este documento describe varios experimentos realizados para identificar proteínas. Se utilizaron reacciones como Biuret y Xantoproteica para determinar la presencia de proteínas en muestras de pescado, espinaca, leche, huevo y levadura. También se describen procedimientos para aislar la caseína de la leche y coagular proteínas con calor. Al final, se incluyen preguntas sobre las propiedades y reacciones de las proteínas.
2. CETIS 62
PRACTICA No.3
IDENTIFICACION DE PROTEINAS
OBJETIVO: Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la
configuración y la identificación por el reactivo BIURET.
MARCO TEORICO:
Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por
aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones
vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta
inmunológica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes
principales de las células y que suponen más del 50% del peso seco de los
animales. El termino proteína deriva del griego proteico, que significa primero.
El plasma sanguíneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por 100al. Las
proteínas plasmáticas pueden dividirse en 3 grupos: a) fibrinógenos; b) globulinas;
c) albuminas. Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a
su solubilidad en soluciones salinas, y se logra una separación simple o burda
mediante precipitación salina de dichas proteínas o fuerzas iónicas diferentes.
La precipitación salina con sulfato de amonio es una etapa preliminar útil en
muchas técnicas de aislamiento de proteínas en particular de enzimas. Existen 2
tipos de lograr esta etapa de purificación o bien sea añadiendo sulfato de amonio
sólido, o bien sea con una solución saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el
primer caso, existe ventaja de mantener en un mínimo el aumento de volumen; en
cambio la solución saturada presenta la ventaja de una manipulación más
cómoda.
Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido
conectivo y el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles, capaces de atravesar
la membrana celular y desencadenar reacciones metabólicas. Tienen un peso
molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno de sus
órganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas, de
las que solo un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo
para construir y mantener las células, aunque su descomposición química también
proporciona energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo, similar al de
los hidratos de carbono.
Las enzimas son proteínas, al igual que la insulina y casi todas las demás
hormonas, los anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina…
3. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)
PROCEDIMIENTO
MATERIAL
1 GRADILLA
TUBOS DE ENSAYE
PROTEINAS
(pescado,espinaca,
levadura, albúmina,
grenetina y
caseína)
REACTIVOS
NaoH al 10 % Sulfato cúprico al 1% en gotero
4. 1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%).
2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.
3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1% hasta la aparición de
un color rosa o violeta (máximo 10 gotas).
4. Reportar a que gota aparece el color.
5. CONCLUSIONES
1. Se comprobó la reacción de BIURET en las diferentes proteínas que se
utilizaron en la práctica ya que se pudo lograr apreciar el cambio de
coloración violeta en cada uno, aunque con una cantidad diferente de gotas
del reactivo. Identificamos los enlaces peptídicos (- CO- NH -) que se
destruye al liberarse los aminoácidos, dándonos positiva esta reacción en
todos los compuestos que tengan dos o más enlaces peptídicos
consecutivos en sus moléculas.
REACCION XANTOPROTEICA
MATERIAL REACTIVOS
Tubos de ensaye Proteínas
Gradilla NaOH concentrado (gotero)
PROTEINA RESULTADO GOTA EN LA QUE
APARECE EL COLOR
Pescado Positivo 3
Espinaca Negativo 10
Leche (caseína) Positivo 4
Huevo (albúmina) Positivo 2
Levadura Positivo 5
Grenetina Positivo 4
6. Baño maría HNO3 concentrado
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína
7. 2. Añade con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado
3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.
4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10gotas) al
vire de color.
11. 2. Agregar en cada tubo 5 ml de solución de proteína
12. 3. Amarrarlos con una liga y calentar a hervir hasta que se forme un coagulo
4. Añadir 2 gotas de acido acético al 1%
5. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente
manera:
Tubo1= 1ml acetona
13. Tubo2= 1ml de éter
Tubo3= 1ml de butanol
Tubo4= 1ml tolueno
6. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo.
7. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH
concentrado, y agitar.
X=No se disolvió el coagulo =si se disolvió el coagulo
1 2 3 4
Prueba Acetona Éter Butanol Tolueno
Proteína
A Albumina X X X X
B Pescado X X X
C Espinaca X X
D Grenetina X X
E Leche
F Levadura X X
14. OBTENCION DE CASEINA DE LA LECHE
MATERIAL REACTIVOS
2 vasos de precipitados de 250ml Leche entera
1 probeta de 100ml HCl 0.2N
1 embudo Acetona
2 papel filtro Éter
15. PROCEDIMIENTO
1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado.
2. Agregar 100ml de agua destilada.
3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8
4. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.
16. 5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.
6. Repetir este lavado 4 veces.
17. 7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la
proteína.
8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar
y filtrar. Repetir 4 veces.
9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de
acetona, y filtrar.
10.Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el
polvo 24 horas después.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
La caseína de la leche se obtuvo excepto por que no pudimos tenerla de manera
en que esta estuviera seca para observar más claramente el resultado obtenido.
Una observación importante es que el embudo Buchner no servía como para
poder ser utilizado, así que la práctica terminó en el punto número 7 del
procedimiento.
Independientemente del percance que se tuvo con el embudo pudimos observar
que el resultado era un polvo blanco que si lo hubiéramos filtrado se pudiera
apreciar mejor, es similar al talco.
CONCLUSIONES
Como conclusión podemos decir que esta práctica es bastante interesante pues
se puede observar como la leche, especialmente la caseína la podemos ver
transformarse en polvo, y literalmente se siente con la textura de un talco.
A su vez es rápida y bastante entretenida para que nosotros los alumnos nos
demos cuenta de cómo es que reaccionan las diferentes proteínas y así podamos
obtenerlas.
CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEINAS?
Se llama desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras
de orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena
polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura
tridimensional fija.
18. Lográndose apreciar en la solidificación o la separación de la sustancia.
2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de
desnaturalización?
El ácido clorhídrico tiene mayor poder de desnaturalización ya que tiene mayor
pérdida de conformación nativa por ser éste un ácido fuerte y provocar cambios
en sus propiedades.
3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una
proteína?
Haciendo pruebas como la de BIURET que nos ayudan a determinar las
concentraciones proteicas de una sustancia.
Determinando la presencia del enlace peptídico --CONH2 unido a otro --
CONH2. También con ayuda de pruebas físicas sencillas como la
coagulación y precipitación en sales neutras.
4. ¿Qué coloración da la reacción del BIURET?
Provoca una coloración rosa o violeta cuya intensidad de color depende de
la concentración de proteínas.
5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del BIURET?
Si, puesto que el reactivo de Biuret reacciona con proteínas independientes
al ser liquidas o solidas
6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la
Glicina ¿es positiva o negativa? ¿Por qué?
Es negativa por que, al analizar un solo aminoácido, no hay ningún enlace
peptídico puesto que este enlace se da entre aminoácidos, y la reacción
dará positivo cuando existe este enlace coordinándose en el CU en medio
alcalino.
7. Explica la reacción Xantoproteica
19. Esta reacción se debe a la formación de nitroderivados aromáticos por
reacción del ácido nítrico sobre grupos bencénicos que poseen algunos
aminoácidos como la fenilalanina, la tirosina y el triptófano. Por lo tanto, la dan
positiva todas aquellas proteínas que tengan aminoácidos aromáticos e4n su
molécula.
