2. REPUBLIQUE ALGERIENNE DE DEMOCRATIQUE ET POPULAIARE
MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE MOUHEMED KHIDER- BISKRA
FACULTE DES SCIENCES EXACTE ET DES SCIENCES DE LA NATURE
ET DE LA VIE
DEPARTEMENTDE DE SCIENCE DE LA NATURE
ET DE LA VIE
Option: biochimie et biologie moléculaire - Master 1
Module : culture cellulaire
Présenté par: - Hattouche Nour el-houda.
- Hiouani Samia.
*ANNEE UNIVERSITAIRE 2011/2012*

3. Sommaire
*Introduction *Mecanisme du clonage
-clonage par plasmide.
-clonage par phage.
*Definition du clonage *Example clonage phagique
*Principe du clonage *A quoi sert le clonage
*Quelque definitions * l’utilisation du clonage
*Conclusion

4. Introduction
La biotechnologie moderne, fondée sur la manipulation de
l’ADN ,permet de modifier et /ou d’analyser des gènes de manière
spécifique .
Elle permet aussi de les transférer entre des organismes
aussi distincts que des bactéries ,les plantes et les animaux.
Elle se base sur le génie génétique ,qui regroupe les
techniques permettant de manipuler l’ADN in vitro ,on peut ainsi
fabriquer de l’ADN recombinant, une molécules d’ADN contenant
des séquences nucléotidiques provenant d’au moins deux sources
différentes.
Parmi ces techniques , on a la technique de clonage
moléculaire .à quoi sert cette technique ?

5. Définition
Terme issu du grec klôn : rejeton. Le terme clonage est
l'opération qui à partir de cellules isolées, permet d'obtenir une
lignée (plusieurs cellules similaires appelées clones) dérivant
d'un seul ancêtre.
Lorsque les scientifiques parlent de clonage génétique, ils ne
pensent pas à la reproduction d'un organisme mais plutôt à
celle d'un gènes spécifique. Le clonage génétique est un
élément du génie génétique.

6. Le principe du clonage:
Le principe du clonage est simple. Il consiste à insérer
un segment d'ADN étranger dans une petite molécule capable
de se répliquer de façon autonome. Ce type de molécule
d'ADN est appelé un vecteur de clonage. Un vecteur de
clonage courant est le plasmide bactérien.
L'ADN du plasmide est coupé par une enzyme de
restriction et lié in vitro au fragment d'ADN étranger coupé
par la même enzyme de restriction ou une enzyme qui donne
des extrémités compatibles. Lorsqu'un transformant stable a
été obtenu, la séquence est dite clonée.

8. quelques definitions :
• Les enzymes de restriction :
Sont une sorte de ciseaux moléculaires
servant à couper l'ADN en des sites bien
précis, Ces enzymes sont des
endonucléases ; elles possèdent donc un
site actif d’hydrolyse de l’ADN, mais aussi
un site de reconnaissance de la séquence
cible, aussi appelée site de restriction

9. • Notion d’ADN recombinant:
Il s’agit d’un ADN hybride obtenu au
laboratoire par la combinaison de deux ADN
appartenant àdeux espèces diffèrentes.
• Notion de vecteurs :
On appelle vecteur l’ADN dans lequel on
insère le fragement d’ADN à ètudier.l’ADN
insère est appelè insert ou ADN ètranger ou
ADN exogène.cette sèquence nuclèotidique est
capable de s’auto-rèpliquer.

10. • Notion de clone
Le clone correspend à un grand nombre de molècules ou
de cellules identiques provenant d’un seul ancètre(cellule
ou molècule).l’opèration qui consiste à obtenir ce grand
nombre de cellules ou de molècules s’appele le clonage.
• Les banques d’ADN complèmentaire (CADN)
Les ADN complementaires(ou CADN)proviennent des
mARN et donc ne possèdent pas d’intron.Apartir d’un même
type de cellules.on prèpare les mARN totaux de ces cellules
puis les CADN correspondants.ces derniers insèrès dans des
vecteurs constituent une banque de CADN.

11. • L’ADN ligase :
Sont des enzymes qui sont
capables de reconstituer la liaison
phosphoester.

12. Mecanisme du clonage:
• Isolement de l’ADN à partir des plasmides des
bactéries et de l’ADN de cellules humaines.
• Action de l’enzyme de restriction.
• Action de la ligase.
• Réintroduction des plasmides dans les
bactéries.
• Identification des plasmides recombinés.

16. A quoi sert le clonage?
L’utilisation du clonage
Production des vaccins
Déterminant antigénique introduction du gène
correspondant dans les cellules procaryotes ou
eucaryotes protéines vaccinantes.
Exemple: protéine vaccinante contre la rage et
l’hépatite B.
Le gène recombiné provient de l’agent pathogène et
code l’antigène responsable de l’immunisation
protectrice.

17. Production d’hormones
La synthèse chimique de l’insuline humaine étant
trop chère et classiquement extraite de pancréas de
bovins et porcins.
A partir de 1983, de l’insuline humaine produite
par culture d’Escherichia coli a commencé à être
vendue en pharmacie d’autres hormones ont été
également produit par génie génétique tel que :
l’hormone de croissance, GRF (Growth hormon
Releasing Factor) des expériences ouvrent des
perspectives intéressantes pour l’augmentation de
production laitière bovine en utilisant ce facteur.

18. Applications :
Par exemple on peut utiliser le
clonage bactérien pour préparer une
sonde moléculaire dans la méthode de
Southern, pour produire certaines
protéines (médicaments, polymérases)
ou encore pour rechercher un gène dans
le génome (clonage positionnel).

19. Conclusion
Le clonage est un mode de reproduction
permettant la copie d'une cellule ou d'un
individu (son clone) à partir de son ADN.
Sauf erreur ou mutation lors du recopiage,
le clone est génétiquement identique à
l'original: il a même ADN.
Dans la nature, certaines espèces non
sexuées comme les bactéries utilise le
clonage pour se reproduire. En laboratoire,
on l'expérimente sur des espèces sexuées.