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BIOINSECTICIDAS FUNGICOS PARA
 CONTROL DE PLAGAS AGRÍCOLAS




Dra. Claudia C. López Lastra (Centro de Estudios
Parasitológicos y de Vectores, CONICET-UNLP)
La Plata, Argentina
Relevamiento de hongos en
             insectos plagas
   La prospección de los hongos patógenos se realizó mediante las
    técnicas específicas para cada grupo de insectos y otros artrópodos.
    El relevamiento fue realizado en distintos hospedadores en cultivos
    hortícolas bajo cubierta y a campo tanto en orgánicos como en
    convencionales del Gran La Plata.

   Se obtuvieron aislamientos en medios de cultivo (SDYA, ESMYA).
    En los casos en que no se pudo obtener cultivos, el material fue
    depositado como material de herbario (seco o preparados
    microscópicos) en las colecciones de referencia (CEPAVE e Instituto
    Spegazzini en Argentina y ARSEF en EEUU).
Hongos entomopatógenos (CEPAVE)
• Aislamiento, identificación y preservación de nuevos patógenos.
Establecimiento de colección de cultivos micológicos.

•Estudios de los ciclos biológicos de los hongos identificados y de su
modo de acción.

• Epizootiología: prevalencia y estacionalidad.

• Evaluación de la patogenicidad y virulencia, a través de bioensayos en
laboratorio.

• Evaluación del espectro hospedador y susceptibilidad de la fauna
asociada y enemigos naturales de los insectos blanco.

• Producción masiva a pequeña escala de los patógenos seleccionados.

• Ensayos a campo en pequeña escala bajo condiciones controladas.
Ciclo de infección de un hongo
      entomopatógeno (generalizado)
   Adhesión de la espora.
   Germinación / formación de apresorios.
   Penetración de las hifas (intervienen enzimas)
   Multiplicación del hongo en el hemocele del insecto
    (cuerpos hifales/ blastosporas).
   Liberación de toxinas /otros metabolitos/ antimicrobianos
   Invasión de tejidos, lisis y muerte del insecto.
   Esporulación externa del hongo a través de la cutícula del
    insecto hospedante.
Resultados
   Se han identificado 21 especies fúngicas
    entomopatogénicas a partir de distintos ordenes de
    artrópodos hospedantes (principalmente insectos y
    ácaros) en cultivos agrícolas.

   Las especies de hongos corresponden
    mayoritariamente al Phylum Ascomycota y al
    SubPhylum Entomophthoromycotina.
Colección de hongos entomopatógenos
              (cultivos) del Cepave


                                      Aislamientos de
                   a                    Zoophthora
                                                                          Cultivos
                                                                        fúngicos en
                                          radicans,
                                                                         gradilla de
                                     Nomuraea rileyi e
                                                                         colección
        b                     c           Isaria sp


                    d
Insectos infectados con hongos
patógenos: a: larva de Aedes
aegypti infectada con Leptolegnia                      Repique de
chapmanii ; b: hembra adulta de                     aislamientos bajo
Sonesimia grossa infectada con                       cámara de flujo
Clonostachys rosea; c: Áfido                             laminar.
infectado con Zoophthora radicans;
d: Larva de Anticarsia gemmatalis
infectada con Nomuraea rileyi.
Objetivos Argentina Laboratorio de hongos
         entomopatógenos CEPAVE (UNLP/ CONICET)

   Profundizar en el relevamiento, identificación, caracterización y estudio
    de nuevas especies y aislamientos fúngicos nativos.
   Estudios moleculares para contribuir al conocimiento de la
    biodiversidad y filogenia.
   Establecer a través de bioensayos y caracterización morfológica cuales
    podrían ser las especies (y aislamientos) de hongos entomopatógenos
    con mayor potencial para la preparación de un insecticida microbiano.
   Estudio de las esporas de resistencia de hongos Entomophtorales en
    campo y laboratorio. Profundizar el estudio de la diversidad de hongos
    Entomophthorales en pulgones y su posible aplicación mediante
    control microbiano conservativo.
   Estudio de toxinas y antimicrobianos de hongos entomopatógenos
   Estudio de la interacción de hongos entomopatógenos con enemigos
    naturales y con agroquímicos.
    Trabajos de extensión con productores hortícolas de la región del gran
    La Plata a través de proyectos de la UNLP .
Insectos  plaga de   cultivos  hortícolas en
pulgones, mosca blanca, polilla del tomate y
otros.
Hongos Entomophthorales: Pandora neoaphidis en
  pulgones (cultivos hortícolas Gran La Plata)
Zoopthora radicans (Entomophthorales) en Tuta
      absoluta (Lepidoptera) en tomate
Cultivo de Lechuga




T. vaporariorum
 en Cultivo de
    Lechuga
Cultivo de Chaucha con T. vaporariorum
infectada con Isaria sp. (relevamiento 2007-2009)
    (datos no publicados D Alessandro, et al. )
Entomopthorales

Conidiobolus obscurus____________________   Hem. Aphididae

Batkoa sp ______________________________    Hem. Aphididae
Neozygites sp ___________________________   Hem. Aphididae
N. fresenii______________________________   Acari Tetranychidae
Entomophthora planchoniana______________    Hem. Aphididae

P. neoaphidis ___________________________   Hem. Aphididae
Zoophthora sp __________________________    Lepidoptera
Z. radicans_____________________________    Hemiptera
                                            Aphididae
Ascomycota

   Especie fúngica                  Hospedante

   Lecanicillium lecanii    Hemiptera Aphididae
   L. muscarium            Hemiptera Aleyrodidae
   L. longisporum           Hemiptera Aphididae
   Isaria javanica         Hemiptera Aleyrodidae
   Isaria fumosorosea       Hemiptera Aleyrodidae
   Isaria farinosa          Hemiptera: Aleyrodidae
Hongos
         entomopatógenos
     Control microbiano de insectos
Ventajas:
   Presentan especificidad y no afectan organismos “no
    blanco”, en general.
   Tienen posibilidad de mantener un efecto de “reciclaje”
    en condiciones naturales.
   Una gran diversidad de especies son cultivables In vitro
    en medios artificiales y naturales -
   Se puede preservar su viabilidad y virulencia de
    acuerdo a sus características específicas con
    metodologías de alta tecnología así como con bajos
    insumos.
   Se pueden formular en medios sólidos o líquidos , como
    granulados, polvos mojables etc.
Etapas del control
              microbiano
   Rango hospedador .
   Evaluación de la acción sobre organismos “no blanco”
    (fauna asociada, enemigos naturales, insectos benéficos,
    vertebrados también mamíferos. Importante detección de
    posibles toxinas o metabolitos.
   Producción masiva de esporos
   Control de calidad.
   Elaboración de formulados (estimación y selección de
    coadyuvantes, pruebas con los coadyuvantes usados).
   Bioensayos con los formulados obtenidos.
   Presentación de los resultados y bibliografía pertinentes
    junto con solicitud de permisos a SENASA
Etapas de transferencia tecnológica
 Producción masiva
 Formulación
 Estandarización
 Control de calidad . Evaluación de toxinas
 Ensayos a pequeña y mediana escala. Permisos de
  Senasa - Cosave
 Elaboración del producto /patentes
 Venta aplicación
 Extensión
Adulto de T. vaporariorum infectado con Isaria fumosorosea en plantaciones de
 chaucha ubicadas en Colonia Urquiza, partido de La Plata, Buenos Aires (sitio 4).
A: Cultivo de chaucha bajo cubierta con manejo convencional. B : Adultos infectados sobre su planta
   hospedera. C : Adulto de T. vaporariorum sano. D : Adulto de T. vaporariorum infectado. E y F:
    Preparados microscópicos de las estructuras fúngicas de I. fumosorosea en azul de algodón-
               lactofenol Amann (0,01 p/v). Conidioforos ( cf ), fiálides (f ) y conidios (c ).
                   A                                B




                  C                             D




                  E                                 F
A           B




C       D




    E
Relevamiento de Mosca Blanca en cultivos orgánicas y convencionales

Tipo de        Sitio de   Ubicación    Fecha del   Temperatura    Humedad     Cultivos       Especie de "Mosca           Hongos
producción     Muestreo                muestreo      media*       relativa*   hortícolas+         blanca"               patógeno



Orgánica       Sitio 3    Abasto,      04/06/200      10,7°C           60%       Apio       Trialeurodes           Isaria fumosorosea
                          Partido de   7                                                    vaporariorum
                          La Plata,
                          Buenos
                          Aires

Convencional   Sitio 4    Colonia      22/05/200      10,1°C           77%     Chaucha      Trialeurodes           Isaria fumosorosea
                          Urquiza,     7              10,7°C           60%                  vaporariorum
                          Partido de   04/06/200      10,9°C           89%
                          La Plata,    7
                          Buenos       13/06/200
                          Aires        7

                                       06/06/200       8,6°C           79%     Acelga       Trialeurodes         Isaria fumosorosea
                                       7              10,9°C           89%    Berenjena     vaporariorum         Isaria fumosorosea
                                       13/06/200                                            Trialeurodes
                                       7                                                    vaporariorum

                                       03/10/200      18,2°C     86%           Tomate       Trialeurodes           Isaria fumosorosea
                                       7              14,4°C     83%                        vaporariorum
                                       10/10/200      17,7°C     82%
                                       7
                                       16/10/200
                                       7
Colección   Colección      Colección                             Insecto          Planta                                  Fecha de
                                       Hongo identificado                                      Localidad/Provincia
  CEPAVEa      ARSEFb       EMBRAPAc                              Hospedador        Sustrato                                 muestreo

CEP 302      8716       CNPSo-585      I. fumosorosea       T. vaporarium      Chaucha         Colonia Urquiza,        22/05/2007
                                                                                                     Partido de La
                                                                                                     Plata, Buenos
                                                                                                     Aires (Sitio 4)

CEP 303      8717       CNPSo-563      I. fumosorosea       T. vaporarium      Apio            Abasto, Partido de La   04/06/2007
                                                                                                     Plata, Buenos
                                                                                                     Aires (Sitio 3)

CEP 304      8718       CNPSo-570      I. fumosorosea       T. vaporarium      Tomate          Colonia Urquiza,        03/10/2007
                                                                                                     Partido de La
                                                                                                     Plata, Buenos
                                                                                                     Aires (Sitio 4)

CEP 305      8719       CNPSo-564      I. fumosorosea       T. vaporarium      Tomate          Colonia Urquiza,        03/10/2007
                                                                                                     Partido de La
                                                                                                     Plata, Buenos
                                                                                                     Aires (Sitio 4)

CEP 306      8720       CNPSo-580      I. fumosorosea       T. vaporarium      Tomate          Colonia Urquiza,        10/10/2007
                                                                                                     Partido de La
                                                                                                     Plata, Buenos
                                                                                                     Aires (Sitio 4)

CEP 307      8721       CNPSo-567      I. fumosorosea       T. vaporarium      Tomate          Colonia Urquiza,        16/10/2007
                                                                                                     Partido de La
                                                                                                     Plata, Buenos
                                                                                                     Aires (Sitio 4)

CEP 308      8723       CNPSo-568      I. fumosorosea       T. vaporarium      Chaucha         Colonia Urquiza,        04/06/2007
                                                                                                     Partido de La
                                                                                                     Plata, Buenos
                                                                                                     Aires (Sitio 4)

CEP 309      8724       CNPSo-581      I. fumosorosea       T. vaporarium      Acelga          Colonia Urquiza,        06/06/2007
                                                                                                     Partido de La
                                                                                                     Plata, Buenos
                                                                                                     Aires (Sitio 4)

CEP 310      8725       CNPSo-566      I. fumosorosea       T. vaporarium      Acelga          Colonia Urquiza,        06/06/2007
                                                                                                     Partido de La
                                                                                                     Plata, Buenos
                                                                                                     Aires (Sitio 4)
CEP 311   8726   CNPSo-571   I. fumosorosea   T. vaporarium   Acelga      Colonia Urquiza, Partido    06/06/2007
                                                                                de La Plata, Buenos
                                                                                Aires (Sitio 4)

CEP 312   8727   CNPSo-574   I. fumosorosea   T. vaporarium   Chaucha     Colonia Urquiza, Partido    13/06/2007
                                                                                de La Plata, Buenos
                                                                                Aires (Sitio 4)

CEP 313   8728   CNPSo-569   I. fumosorosea   T. vaporarium   Berenjena   Colonia Urquiza, Partido    13/06/2007
                                                                                de La Plata, Buenos
                                                                                Aires (Sitio 4)

CEP 314   8729   CNPSo-573   I. fumosorosea   T. vaporarium   Chaucha     Colonia Urquiza, Partido    22/05/2007
                                                                                de La Plata, Buenos
                                                                                Aires (Sitio 4)

CEP 315   8730   CNPSo-584   I. fumosorosea   T. vaporarium   Chaucha     Colonia Urquiza, Partido    22/05/2007
                                                                                de La Plata, Buenos
                                                                                Aires (Sitio 4)

CEP 316   8928   CNPSo-562   I. fumosorosea   T. vaporarium   Chaucha     Colonia Urquiza, Partido    22/05/2007
                                                                                de La Plata, Buenos
                                                                                Aires (Sitio 4)


a Número de referencia para la colección del Centro de Estudios Parasitológicos y de
Vectores (CEPAVE) (CCT-La Plata-UNLP), La Plata, Argentina.
b Número de acceso de la colección de USDA-ARS, Plant Protection Research Unit, US
Plant, Soil & Nutrition Laboratory (ARSEF), Ithaca, Nueva York., EE.UU.
c Número de acceso de la colección de Empresa Brasilera de Pesquisa Agropecuaria,
Centro Nacional de Pesquisa Soja (EMBRAPA Soja), Londrina, Brasil.
Evaluación del uso de hongos
     entomopatógenos en cultivos hortícolas


   Se realizó la producción artesanal en granos
    de arroz parvolizado a partirdel hongo Isaria
    fumosorosea bajo condiciones de laboratorio.


   La aplicación se efectúo “a campo” en
    cultivos de berenjena y bajo invernáculo en
    cultivos de chaucha en la quinta de un
    productor de Villa Elisa, Pdo La Plata. El
    efecto del hongo sobre individuos de “mosca
    blanca” se evaluó con monitoreos semanales
    y los resultados obtenidos fueron expuestos
    en una reunión final con los productores.
Producción en granos de arroz del hongo
  entomopatógeno Isaria fumosorosea
Figura 50: Porcentaje de individuos infectados de “mosca blanca” en plantaciones de tomate y berenjena bajo cubierta.
    El día 14/05/09 se pulverizó dos concentraciones de S.C.P.M de I. fumosorosea (1x107 o 1x108 conidios/ml) en
     plantaciones de tomate y berejena. En los días subsiguientes, se cuantificó el número total de adultos y ninfas
infectadas en cada parcela y se estimó el porcentaje de individuos con infección de I. fumosorosea. A: Plantaciones de
 tomate variedad Elphida. B: Plantaciones de berenjena variedad Barcelona. 10*7: concentración de 1x107 conidios/ml
               A          de la S.C.P.M. 10*8: concentración de 1x108 conidios/ml de la susp,
                                             10%


                   Porcentaje de infección
                                             8%



                                             6%



                                             4%



                                             2%



                                             0%
                                                    18/05/2009       20/05/2009      22/05/2009          27/05/2009       29/05/2009


                                                          10*7 Adultos       10*7 Ninfas          10*8 Adultos        10*8 Ninfas


                                             B
                                             14%
          Porcentaje de infección




                                             12%

                                             10%

                                             8%

                                             6%

                                             4%

                                             2%

                                             0%
                                                   18/05/2009      20/05/2009       22/05/2009          27/05/2009       29/05/2009

                                                           10*7 Adultos       10*7 Ninfas         10*8 Adultos        10*8 Ninfas
Figure 2: Effect of fungicides on growth rate of CEP 315 strain of Isaria
                                      fumosorosea .
 Columns show mean + standard error growth rate of CEP 315 strain. The letters above
treatments indicates significant differences among means after Tukey’s test (p<0.05). C :
    control. Prop : Propamocarb (0.15%). Fen : Fenarimol (0.05%). Tria : Triadimefon
  (0.05%). Proc : Procimidone (0.1%). Azo : Azoxystrobin (0.04%). Carb : Carbendazim
   (0.15%). C.O : Cooper oxychloride (0.15%). T.har : Trichoderma harzianum (0.5%).

           Interaction of fungicides with the entomopathogenic fungus isaria fumosorosea
                                     Bioc, Sci, and technol. 2011
                       D’Alessandro1 C.P., Padin2 S., Urrutia3 M.I, López Lastra1 C.C.




                                    5   a    a     ab     a      a                  a      ab
             Growth Rate (mm/day)




                                                                       b
                                    4



                                    3



                                    2

                                                                              c
                                    1



                                    0

                                        C   Prop   Fen   Tria   Proc   Azo   Carb   C.O   T. har
Talleres participativos con los productores
Recolección de insectos infectados a campo
Cartilla explicativa sobre la detección de los
  hongos entomopatógenos en el campo
Folleto explicativo sobre la producción y aplicación de
             los hongos entomopatógenos
Aplicación del hongo entomopatógeno Isaria fumosorosea en
               la quinta de Osvaldo Petronari
Aplicación del hongo entomopatógeno en cultivos hortícolas
                  a campo y bajo cubierta
Porcentaje de individuos infectados en BERENJENA y CHAUCHA

                           100%
                           90%
Porcentaje de infectados




                           80%
                           70%
                           60%
                           50%
                           40%
                           30%
                           20%
                           10%
                            0%
                                         31/03/2010           07/04/2010           19/04/2010

                                                      BEREJENA        CHAUCHA
Resultados esperados

   Transferencia de tecnología a empresas nacionales para la
    producción y registro de un formulado biológico en base a
    hongos entomopatógenos, esto está aun en proceso.
   En el área de extensión:
   Desarrollar talleres de producción artesanal de hongos
    entomopatógenos.
   Establecer quintas de referencia con la participación de los
    productores y sus familias.
   Demostración con aplicaciones a campo en esas quintas de
    referencia y elaboración de nuevas cartillas con la
    explicación de este proceso para la incorporación del uso de
    estrategias de control biológico.
Líneas actuales de investigación
   Relevamiento y aislamiento de Hongos patógenos de
    mosca blanca en cultivos hortícolas.
   Diversidad de hongos entomopatógenos de insectos plaga
    de la yerba mate.
   Hongos patógenos de mosca de la fruta en la región del
    NOA.
   Entomophthorales de pulgones de cereales y cultivos
    hortícolas de Santa Fé. Prevalencia variación estacional ,
    dispersión y distribución.
   Relevamiento y caracterización de compuestos
    antimicrobianos y toxinas a partir de hongos
    entomopatógenos.
   Estudios de producción de oosporas de L. chapmanii y
    posibles producción in vitro para la elaboración de futuros
    formulados y aplicación a campo contra mosquitos .
Avances y Perspectivas futuras
   Continuar con la realización de Estudios
    moleculares para contribuir al conocimiento de la
    biodiversidad y filogenia de hongos
    entomopatógenos
   Caracterización morfológica y molecular de los
    aislamientos de hongos entomopatógenos con
    mayor potencial para la preparación de un
    insecticida microbiano.
   Producción masiva de esporas fúngicas para la
    produccion de un formulado en combinación con
    empresas para el escalado comercial. Registro .
   Realizar ensayos en parcelas controladas, a
    campo a pequeña y mediana escala.
Dr Richard Humber
                          Agradecimientos
Dr.Miguel Angel Delfino
Dr. Justin Hatting

Grupo de hongos entomopatogenos -agricolas :
Dra. Ana C. Scorsetti
Dra. Andrea Toledo
Dra. Vanesa Dikgolz                            Productores del PPIraola y otros productores
Lic. Alejandra Gutiérrez                       horticolas del Gran la Plata
Srta. María Belén Cabrera
Srta. Silvana Tongiani                         Grupo de trabajo de extension FCNyM-UNLP_
Sra Marisol Martinez Borda                     IPAF
Lic. Maria Elena Schapovaloff                  . Tito G., Cap G., Glenza F., Padín S.B.,
Lic. Alejandra Gutiérrez                       Dalbello G., Ungaro P., Gutiérrez A.C., Martínez
Dra Celeste DÁlessandro                        Borda A.M., Maltese N., Tongiani S., Urrutia M.I.
Lic. Romina Manfrino                            UNLP-CONICET. ANPCyT, CONICET, MINCyT
Sr. Nicolas Maltese
Lic. Juan Aguilera
Lic. Patricia Albornoz Medina
Srta . Marcela Hipperdinger
Srta. Julieta Tornesello
Grupo de Hongos Entomopatógenos
                                Andrea   Ana
                                Toledo Scorsetti     Claudia
            Augusto                                                           Vanesa
                                                   López Lastra               Dikgolz
              Siri




                                                                                   Celeste
                                                                  Alejandra     D’Alessandro
                                                                  Gutierrez
                                          Belén Cabrera
Sebastian Pelizza     Patricia Albornoz
Lopez lastra. bioinsecticidas

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  • 1. BIOINSECTICIDAS FUNGICOS PARA CONTROL DE PLAGAS AGRÍCOLAS Dra. Claudia C. López Lastra (Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores, CONICET-UNLP) La Plata, Argentina
  • 2. Relevamiento de hongos en insectos plagas  La prospección de los hongos patógenos se realizó mediante las técnicas específicas para cada grupo de insectos y otros artrópodos. El relevamiento fue realizado en distintos hospedadores en cultivos hortícolas bajo cubierta y a campo tanto en orgánicos como en convencionales del Gran La Plata.  Se obtuvieron aislamientos en medios de cultivo (SDYA, ESMYA). En los casos en que no se pudo obtener cultivos, el material fue depositado como material de herbario (seco o preparados microscópicos) en las colecciones de referencia (CEPAVE e Instituto Spegazzini en Argentina y ARSEF en EEUU).
  • 3. Hongos entomopatógenos (CEPAVE) • Aislamiento, identificación y preservación de nuevos patógenos. Establecimiento de colección de cultivos micológicos. •Estudios de los ciclos biológicos de los hongos identificados y de su modo de acción. • Epizootiología: prevalencia y estacionalidad. • Evaluación de la patogenicidad y virulencia, a través de bioensayos en laboratorio. • Evaluación del espectro hospedador y susceptibilidad de la fauna asociada y enemigos naturales de los insectos blanco. • Producción masiva a pequeña escala de los patógenos seleccionados. • Ensayos a campo en pequeña escala bajo condiciones controladas.
  • 4. Ciclo de infección de un hongo entomopatógeno (generalizado)  Adhesión de la espora.  Germinación / formación de apresorios.  Penetración de las hifas (intervienen enzimas)  Multiplicación del hongo en el hemocele del insecto (cuerpos hifales/ blastosporas).  Liberación de toxinas /otros metabolitos/ antimicrobianos  Invasión de tejidos, lisis y muerte del insecto.  Esporulación externa del hongo a través de la cutícula del insecto hospedante.
  • 5. Resultados  Se han identificado 21 especies fúngicas entomopatogénicas a partir de distintos ordenes de artrópodos hospedantes (principalmente insectos y ácaros) en cultivos agrícolas.  Las especies de hongos corresponden mayoritariamente al Phylum Ascomycota y al SubPhylum Entomophthoromycotina.
  • 6. Colección de hongos entomopatógenos (cultivos) del Cepave Aislamientos de a Zoophthora Cultivos fúngicos en radicans, gradilla de Nomuraea rileyi e colección b c Isaria sp d Insectos infectados con hongos patógenos: a: larva de Aedes aegypti infectada con Leptolegnia Repique de chapmanii ; b: hembra adulta de aislamientos bajo Sonesimia grossa infectada con cámara de flujo Clonostachys rosea; c: Áfido laminar. infectado con Zoophthora radicans; d: Larva de Anticarsia gemmatalis infectada con Nomuraea rileyi.
  • 7. Objetivos Argentina Laboratorio de hongos entomopatógenos CEPAVE (UNLP/ CONICET)  Profundizar en el relevamiento, identificación, caracterización y estudio de nuevas especies y aislamientos fúngicos nativos.  Estudios moleculares para contribuir al conocimiento de la biodiversidad y filogenia.  Establecer a través de bioensayos y caracterización morfológica cuales podrían ser las especies (y aislamientos) de hongos entomopatógenos con mayor potencial para la preparación de un insecticida microbiano.  Estudio de las esporas de resistencia de hongos Entomophtorales en campo y laboratorio. Profundizar el estudio de la diversidad de hongos Entomophthorales en pulgones y su posible aplicación mediante control microbiano conservativo.  Estudio de toxinas y antimicrobianos de hongos entomopatógenos  Estudio de la interacción de hongos entomopatógenos con enemigos naturales y con agroquímicos. Trabajos de extensión con productores hortícolas de la región del gran La Plata a través de proyectos de la UNLP .
  • 8. Insectos plaga de cultivos hortícolas en pulgones, mosca blanca, polilla del tomate y otros.
  • 9. Hongos Entomophthorales: Pandora neoaphidis en pulgones (cultivos hortícolas Gran La Plata)
  • 10. Zoopthora radicans (Entomophthorales) en Tuta absoluta (Lepidoptera) en tomate
  • 11. Cultivo de Lechuga T. vaporariorum en Cultivo de Lechuga
  • 12. Cultivo de Chaucha con T. vaporariorum infectada con Isaria sp. (relevamiento 2007-2009) (datos no publicados D Alessandro, et al. )
  • 13. Entomopthorales Conidiobolus obscurus____________________ Hem. Aphididae Batkoa sp ______________________________ Hem. Aphididae Neozygites sp ___________________________ Hem. Aphididae N. fresenii______________________________ Acari Tetranychidae Entomophthora planchoniana______________ Hem. Aphididae P. neoaphidis ___________________________ Hem. Aphididae Zoophthora sp __________________________ Lepidoptera Z. radicans_____________________________ Hemiptera Aphididae
  • 14.
  • 15. Ascomycota  Especie fúngica Hospedante  Lecanicillium lecanii Hemiptera Aphididae  L. muscarium Hemiptera Aleyrodidae  L. longisporum Hemiptera Aphididae  Isaria javanica Hemiptera Aleyrodidae  Isaria fumosorosea Hemiptera Aleyrodidae  Isaria farinosa Hemiptera: Aleyrodidae
  • 16. Hongos entomopatógenos Control microbiano de insectos Ventajas:  Presentan especificidad y no afectan organismos “no blanco”, en general.  Tienen posibilidad de mantener un efecto de “reciclaje” en condiciones naturales.  Una gran diversidad de especies son cultivables In vitro en medios artificiales y naturales -  Se puede preservar su viabilidad y virulencia de acuerdo a sus características específicas con metodologías de alta tecnología así como con bajos insumos.  Se pueden formular en medios sólidos o líquidos , como granulados, polvos mojables etc.
  • 17. Etapas del control microbiano  Rango hospedador .  Evaluación de la acción sobre organismos “no blanco” (fauna asociada, enemigos naturales, insectos benéficos, vertebrados también mamíferos. Importante detección de posibles toxinas o metabolitos.  Producción masiva de esporos  Control de calidad.  Elaboración de formulados (estimación y selección de coadyuvantes, pruebas con los coadyuvantes usados).  Bioensayos con los formulados obtenidos.  Presentación de los resultados y bibliografía pertinentes junto con solicitud de permisos a SENASA
  • 18. Etapas de transferencia tecnológica  Producción masiva  Formulación  Estandarización  Control de calidad . Evaluación de toxinas  Ensayos a pequeña y mediana escala. Permisos de Senasa - Cosave  Elaboración del producto /patentes  Venta aplicación  Extensión
  • 19.
  • 20.
  • 21.
  • 22.
  • 23.
  • 24.
  • 25.
  • 26.
  • 27.
  • 28.
  • 29.
  • 30. Adulto de T. vaporariorum infectado con Isaria fumosorosea en plantaciones de chaucha ubicadas en Colonia Urquiza, partido de La Plata, Buenos Aires (sitio 4). A: Cultivo de chaucha bajo cubierta con manejo convencional. B : Adultos infectados sobre su planta hospedera. C : Adulto de T. vaporariorum sano. D : Adulto de T. vaporariorum infectado. E y F: Preparados microscópicos de las estructuras fúngicas de I. fumosorosea en azul de algodón- lactofenol Amann (0,01 p/v). Conidioforos ( cf ), fiálides (f ) y conidios (c ). A B C D E F
  • 31. A B C D E
  • 32. Relevamiento de Mosca Blanca en cultivos orgánicas y convencionales Tipo de Sitio de Ubicación Fecha del Temperatura Humedad Cultivos Especie de "Mosca Hongos producción Muestreo muestreo media* relativa* hortícolas+ blanca" patógeno Orgánica Sitio 3 Abasto, 04/06/200 10,7°C 60% Apio Trialeurodes Isaria fumosorosea Partido de 7 vaporariorum La Plata, Buenos Aires Convencional Sitio 4 Colonia 22/05/200 10,1°C 77% Chaucha Trialeurodes Isaria fumosorosea Urquiza, 7 10,7°C 60% vaporariorum Partido de 04/06/200 10,9°C 89% La Plata, 7 Buenos 13/06/200 Aires 7 06/06/200 8,6°C 79% Acelga Trialeurodes Isaria fumosorosea 7 10,9°C 89% Berenjena vaporariorum Isaria fumosorosea 13/06/200 Trialeurodes 7 vaporariorum 03/10/200 18,2°C 86% Tomate Trialeurodes Isaria fumosorosea 7 14,4°C 83% vaporariorum 10/10/200 17,7°C 82% 7 16/10/200 7
  • 33. Colección Colección Colección Insecto Planta Fecha de Hongo identificado Localidad/Provincia CEPAVEa ARSEFb EMBRAPAc Hospedador Sustrato muestreo CEP 302 8716 CNPSo-585 I. fumosorosea T. vaporarium Chaucha Colonia Urquiza, 22/05/2007 Partido de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 303 8717 CNPSo-563 I. fumosorosea T. vaporarium Apio Abasto, Partido de La 04/06/2007 Plata, Buenos Aires (Sitio 3) CEP 304 8718 CNPSo-570 I. fumosorosea T. vaporarium Tomate Colonia Urquiza, 03/10/2007 Partido de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 305 8719 CNPSo-564 I. fumosorosea T. vaporarium Tomate Colonia Urquiza, 03/10/2007 Partido de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 306 8720 CNPSo-580 I. fumosorosea T. vaporarium Tomate Colonia Urquiza, 10/10/2007 Partido de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 307 8721 CNPSo-567 I. fumosorosea T. vaporarium Tomate Colonia Urquiza, 16/10/2007 Partido de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 308 8723 CNPSo-568 I. fumosorosea T. vaporarium Chaucha Colonia Urquiza, 04/06/2007 Partido de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 309 8724 CNPSo-581 I. fumosorosea T. vaporarium Acelga Colonia Urquiza, 06/06/2007 Partido de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 310 8725 CNPSo-566 I. fumosorosea T. vaporarium Acelga Colonia Urquiza, 06/06/2007 Partido de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4)
  • 34. CEP 311 8726 CNPSo-571 I. fumosorosea T. vaporarium Acelga Colonia Urquiza, Partido 06/06/2007 de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 312 8727 CNPSo-574 I. fumosorosea T. vaporarium Chaucha Colonia Urquiza, Partido 13/06/2007 de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 313 8728 CNPSo-569 I. fumosorosea T. vaporarium Berenjena Colonia Urquiza, Partido 13/06/2007 de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 314 8729 CNPSo-573 I. fumosorosea T. vaporarium Chaucha Colonia Urquiza, Partido 22/05/2007 de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 315 8730 CNPSo-584 I. fumosorosea T. vaporarium Chaucha Colonia Urquiza, Partido 22/05/2007 de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) CEP 316 8928 CNPSo-562 I. fumosorosea T. vaporarium Chaucha Colonia Urquiza, Partido 22/05/2007 de La Plata, Buenos Aires (Sitio 4) a Número de referencia para la colección del Centro de Estudios Parasitológicos y de Vectores (CEPAVE) (CCT-La Plata-UNLP), La Plata, Argentina. b Número de acceso de la colección de USDA-ARS, Plant Protection Research Unit, US Plant, Soil & Nutrition Laboratory (ARSEF), Ithaca, Nueva York., EE.UU. c Número de acceso de la colección de Empresa Brasilera de Pesquisa Agropecuaria, Centro Nacional de Pesquisa Soja (EMBRAPA Soja), Londrina, Brasil.
  • 35. Evaluación del uso de hongos entomopatógenos en cultivos hortícolas  Se realizó la producción artesanal en granos de arroz parvolizado a partirdel hongo Isaria fumosorosea bajo condiciones de laboratorio.  La aplicación se efectúo “a campo” en cultivos de berenjena y bajo invernáculo en cultivos de chaucha en la quinta de un productor de Villa Elisa, Pdo La Plata. El efecto del hongo sobre individuos de “mosca blanca” se evaluó con monitoreos semanales y los resultados obtenidos fueron expuestos en una reunión final con los productores.
  • 36. Producción en granos de arroz del hongo entomopatógeno Isaria fumosorosea
  • 37.
  • 38. Figura 50: Porcentaje de individuos infectados de “mosca blanca” en plantaciones de tomate y berenjena bajo cubierta. El día 14/05/09 se pulverizó dos concentraciones de S.C.P.M de I. fumosorosea (1x107 o 1x108 conidios/ml) en plantaciones de tomate y berejena. En los días subsiguientes, se cuantificó el número total de adultos y ninfas infectadas en cada parcela y se estimó el porcentaje de individuos con infección de I. fumosorosea. A: Plantaciones de tomate variedad Elphida. B: Plantaciones de berenjena variedad Barcelona. 10*7: concentración de 1x107 conidios/ml A de la S.C.P.M. 10*8: concentración de 1x108 conidios/ml de la susp, 10% Porcentaje de infección 8% 6% 4% 2% 0% 18/05/2009 20/05/2009 22/05/2009 27/05/2009 29/05/2009 10*7 Adultos 10*7 Ninfas 10*8 Adultos 10*8 Ninfas B 14% Porcentaje de infección 12% 10% 8% 6% 4% 2% 0% 18/05/2009 20/05/2009 22/05/2009 27/05/2009 29/05/2009 10*7 Adultos 10*7 Ninfas 10*8 Adultos 10*8 Ninfas
  • 39. Figure 2: Effect of fungicides on growth rate of CEP 315 strain of Isaria fumosorosea . Columns show mean + standard error growth rate of CEP 315 strain. The letters above treatments indicates significant differences among means after Tukey’s test (p<0.05). C : control. Prop : Propamocarb (0.15%). Fen : Fenarimol (0.05%). Tria : Triadimefon (0.05%). Proc : Procimidone (0.1%). Azo : Azoxystrobin (0.04%). Carb : Carbendazim (0.15%). C.O : Cooper oxychloride (0.15%). T.har : Trichoderma harzianum (0.5%). Interaction of fungicides with the entomopathogenic fungus isaria fumosorosea Bioc, Sci, and technol. 2011 D’Alessandro1 C.P., Padin2 S., Urrutia3 M.I, López Lastra1 C.C. 5 a a ab a a a ab Growth Rate (mm/day) b 4 3 2 c 1 0 C Prop Fen Tria Proc Azo Carb C.O T. har
  • 40. Talleres participativos con los productores
  • 41. Recolección de insectos infectados a campo
  • 42.
  • 43. Cartilla explicativa sobre la detección de los hongos entomopatógenos en el campo
  • 44. Folleto explicativo sobre la producción y aplicación de los hongos entomopatógenos
  • 45. Aplicación del hongo entomopatógeno Isaria fumosorosea en la quinta de Osvaldo Petronari
  • 46. Aplicación del hongo entomopatógeno en cultivos hortícolas a campo y bajo cubierta
  • 47.
  • 48. Porcentaje de individuos infectados en BERENJENA y CHAUCHA 100% 90% Porcentaje de infectados 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10% 0% 31/03/2010 07/04/2010 19/04/2010 BEREJENA CHAUCHA
  • 49. Resultados esperados  Transferencia de tecnología a empresas nacionales para la producción y registro de un formulado biológico en base a hongos entomopatógenos, esto está aun en proceso.  En el área de extensión:  Desarrollar talleres de producción artesanal de hongos entomopatógenos.  Establecer quintas de referencia con la participación de los productores y sus familias.  Demostración con aplicaciones a campo en esas quintas de referencia y elaboración de nuevas cartillas con la explicación de este proceso para la incorporación del uso de estrategias de control biológico.
  • 50. Líneas actuales de investigación  Relevamiento y aislamiento de Hongos patógenos de mosca blanca en cultivos hortícolas.  Diversidad de hongos entomopatógenos de insectos plaga de la yerba mate.  Hongos patógenos de mosca de la fruta en la región del NOA.  Entomophthorales de pulgones de cereales y cultivos hortícolas de Santa Fé. Prevalencia variación estacional , dispersión y distribución.  Relevamiento y caracterización de compuestos antimicrobianos y toxinas a partir de hongos entomopatógenos.  Estudios de producción de oosporas de L. chapmanii y posibles producción in vitro para la elaboración de futuros formulados y aplicación a campo contra mosquitos .
  • 51. Avances y Perspectivas futuras  Continuar con la realización de Estudios moleculares para contribuir al conocimiento de la biodiversidad y filogenia de hongos entomopatógenos  Caracterización morfológica y molecular de los aislamientos de hongos entomopatógenos con mayor potencial para la preparación de un insecticida microbiano.  Producción masiva de esporas fúngicas para la produccion de un formulado en combinación con empresas para el escalado comercial. Registro .  Realizar ensayos en parcelas controladas, a campo a pequeña y mediana escala.
  • 52. Dr Richard Humber Agradecimientos Dr.Miguel Angel Delfino Dr. Justin Hatting Grupo de hongos entomopatogenos -agricolas : Dra. Ana C. Scorsetti Dra. Andrea Toledo Dra. Vanesa Dikgolz Productores del PPIraola y otros productores Lic. Alejandra Gutiérrez horticolas del Gran la Plata Srta. María Belén Cabrera Srta. Silvana Tongiani Grupo de trabajo de extension FCNyM-UNLP_ Sra Marisol Martinez Borda IPAF Lic. Maria Elena Schapovaloff . Tito G., Cap G., Glenza F., Padín S.B., Lic. Alejandra Gutiérrez Dalbello G., Ungaro P., Gutiérrez A.C., Martínez Dra Celeste DÁlessandro Borda A.M., Maltese N., Tongiani S., Urrutia M.I. Lic. Romina Manfrino UNLP-CONICET. ANPCyT, CONICET, MINCyT Sr. Nicolas Maltese Lic. Juan Aguilera Lic. Patricia Albornoz Medina Srta . Marcela Hipperdinger Srta. Julieta Tornesello
  • 53.
  • 54. Grupo de Hongos Entomopatógenos Andrea Ana Toledo Scorsetti Claudia Augusto Vanesa López Lastra Dikgolz Siri Celeste Alejandra D’Alessandro Gutierrez Belén Cabrera Sebastian Pelizza Patricia Albornoz