4. Degradación protéica
• Adición de una
enzima proteasa
(y/o RNAsa).
• Adición de una sal
(acetato de sodio
ó amonio) para
ayudar a la
precipitación de la
fracción protéica de
la solución.
La enzima proteasa conduce la proteólisis que
comienza el catabolismo protéico por la hidrólisis
de los enlaces peptídicos que unen a los
aminoácidos.
5. Separación de fases
Método fenol-cloroformo
• Añadir solución
de fenol-
cloroformo en
la solución
previamente
lisada.
• Centrifugar.
• Aislar fase
acuosa
completa.
Luego de la centrifugación, los
ácidos nucléicos se posicionan en la
interfase de la mezcla.
6. Purificación
• Precipitación del ADN
mediante etanol frío
ó isopropanol.
• Centrifugación.
• Repetir procedimiento
(purificación del
pellet).
Dado que el ADN es
insoluble en alcohol, se
agrega en un pellet
luego de la
centrifugación.
*Este paso también remueve
las sales solubles en alcohol.