1. Pemisahandanpemurniancardol,kardanol danasamanakardatdari mete (Anacardiumoccidentale L.)
cair kacang-shell menggunakankromatografi kolomdualangkahsederhana
Fenol rantai panjangyangterkandungdalamMente shell cairmemiliki aplikasi penting.Asamanakardat
dan cardolssecara luasdigunakandalamindustri farmasi,sementaracardanolsmenemukandigunakan
dalamresin,coatingdanindustri polimer.Dalamkaryaini,sebuahfase terbalikkromatografi kolom
silikagel dualangkahdipekerjakanuntukmemurnikanini fenol utamadalamcairanMente shell (CNSL).
6-Pentadecyl asamsalisilat(C22H36O3,98,8% dan 82,4% kemurnianrecovery),5-pentadecyl resorsinol
(C21H36O2, 99,3% kemurniandan80,7% recovery) dan3-pentadecyl fenol (C21H36O,99,2% kemurnian
dan 81,8% recovery) yangberhasil diperolehdandiidentifikasioleh1Hdan 13C NMR, FTIR,spektrometri
massa dananalisiselemental.
1. Perkenalan
Mete (AnacardiumoccidentaleL.) kulitbiji (CNS) adalahproduksampingandari produksi mete.Ini
adalahsumberdari jenuhfenol rantai panjang,sepertiasamanakardat,anacardols,cardolsdanisomer
mereka.Keduaasamanakardatdan cardolsdilaporkanmemilikiantitumor[1-3],antimikroba[2],urease
penghambatan[4],kegiatanlipoxy-genase[5] sertakemampuanuncoupling[6].Di sisi lain,cardanols
secara luasdigunakandalamlapisandanindustri resinkarenaketahananyangluarbiasauntuk
melembutkanaksi minyakmineral danresistensiyangtinggi terhadapasam, alkali,mikroba,rayapdan
serangga.Asamanakardat termal labil danmudahterdegradasi ke kardanol yangberhubungandengan
dekarboksilasi padasuhutinggi [7].
Beberapapenelitiantelahdilakukanpadaekstraksifenoldari SSP.MenurutTymanetal. [8],sekitar6,1
wt.%(BerdasarkanberatkeringCNS) cairanMente shell (CNSL) diekstraksi
Singkatan:CNS,Mente shell;CNSL,Mente shellcair;TLC,kromatografi lapistipis;HPLC,kromatografi
cair kinerjatinggi;RP,fase terbalik.
* Penulisyangsesuai.Tel .:+886 2 27376612; fax:886 alamat 2 2737 6644. E-mail:
yhju@mail.ntust.edu.tw(Y.-H.Ju).
denganmerendamSSPdalamminyakbumi cahayaselamaseminggudankemudianmenundukkanshell
setengahdiprosesuntukSoxhletekstraksi pada40-60 8C selama12 jamdenganminyakbumi cahaya
sebagai pelarut.Merekajugamelaporkanbahwahasil meningkatmenjadi 25,7% (berdasarkanberat
total kacang mete denganshell) ketikakerangyangdimaserasi dankembalidiekstraksi-lagiselama10
jam.CNSL yangdiperolehterdiri dari 19,72% cardols,58.14% asam anakardat,1,92% cardanolsdan

2. 20,22% bahan polimer.Yulianaetal.[9] melaporkanbahwaCNSLdiekstraksi selama30 jamdengan
menggunakanmetanol mengandung28,64% cardanols,19,06% asamanakardat, 45,27% cardols,1,86%
b-sitosterol,3,41%triacontene dansejumlahjejakbahanpolimer.
Karenapenggunaanyangberbedadari asamanakardat, anacardolsdancardols,pentinguntuk
memisahkandanmemurnikansenyawaini dalamrangkauntukmengidentifikasisifat-sifatmerekauntuk
aplikasi khusus.Mikroanalisisasamfenolikmerupakanaspekpentingdalambiokimiabanyakproduk
alami [10]. Tymanet al.[8] menunjukkanbahwapolaritassenyawayangterdeteksi di CNSLadalah
serupa.Olehkarenaitu,pemurniansenyawaindividusulitdicapai.Sampai saatini,isomerasam
anakardat hanya(15: 0) dan (15: 3) tersediadalambentukmurni.
Penelitianini mengusulkanmetode lancaruntukmemisahkan3senyawafenolikutamaini dari CNSL
menggunakankromatografi kolom
Metode ini telahdikenal sebagai andalankromatografi modernyang baikuntukpemisahananalitisdan
preparatif selamaempatdekade terakhir.Dibandingkandengankromatografi cairkinerjatinggi (HPLC),
kromatografi kolommemiliki beberapakeunggulansepertibiayarendah,sederhana,lebihfleksibel
dalamaplikasi,memiliki sensitivitasyanglebihtinggi dankemampuanuntukmendeteksico-elusi,
fenomenadi manaduasenyawadenganstrukturserupadanpolaritasbisakeluardari kolompada
waktuyang sama.Kromatografi kolommenawarkanfleksibilitasdalammenyesuaikanpanjang kolom,
ukuranpartikel dari manik-manik,dimensikolom(pengepakantinggi untukrasiodiameterpacking) dan
cappingkimiadigunakantanpamembeli kolomyangberbeda.
Fase terbalik(RP) kromatografi kolomadalahjauhteknikyangpalingbanyakdigunakankarenaini
berlakuuntuksebagianbesarsenyawadenganpolaritasrendahdansedang.Jurusan[11] menyatakan
bahwagel Octadecylsilane (C18) silikaadalahfase yangpalingumumdigunakandalammetodeini
karenastabilitaslebihionisasi yangmungkinterjadi dalamprosespemisahan.Karenasifatsenyawa
sasaran (fenol rantai panjang),pemisahanmenggunakankromatografi kolomsilikagel RP
Octadecylsilane dipekerjakandalampekerjaanini.Kondisiseperti dimensikolom,silikagel untuksampel
komposisi rasiodanfase gerakdiselidiki untukmendapatkanpemisahanyangoptimal dari tigafenol.
2. Bahan dan metode
2.1. Bahandan bahan kimia
CNSSdiperolehdari limbahmete (berbagai Venguria-4) produksikacangdi sebuahpabrikdi Solo,
Indonesia.Merekaberalasan,diayak,dandisimpanpada4 8C. CNSL diperolehdenganmenundukkan
CNSuntukSoxhletekstraksi selama10jam. Pelarutekstraksi adalahmetanol,petroleumeterataueter
dietil.
Semuapelarutyangdigunakandalampenelitianini adalahHPLCgrade.Petroleumeterdibeli dari Acros
Organics(NewJersey,USA) sedangkanmetanol (kemurnian99,5%),dietil eter(kemurnian99,0%) dan

3. aseton(kemurnian99,9%) diperolehdari EchoKimia(MiaoLi,Taiwan).Airdeionisasi diberikandari
MixedBedDeionizersModel MB18-PVN / m9060 (Pure AquaInc,Santa Ana,CA).Kloroform(kemurnian
99,9%) yang disediakanolehSigmaAldrich(StLouis,MO).
RP silikagel,SiliabondC18,diberikanolehSilicycle (Quebec,Kanada),sementarapra-dilapisitipis
kromatografi lapis(TLC) lembarALUGRAMRP-18 W / UV254 diperolehdari Macherey-Nagel (duren,
Jerman).CepatgaramBlue B sebagai reagenuntukanalisisTLCdibeli dari SigmaAldrich(StLouis,MO).
Keduatabungsampel NMR(Model 1000 5 mm400-500 MHz L7in) dan melarutkanpelarut,deuterated
kloroform(CDCl3),sertakaliumbromidadigunakanuntukmempersiapkanpeletkosongdalamanalisis
FTIR yangdibeli dari SigmaAldrich(StLouis,MO).
2.2. DewaxingdandegummingCNSL
Degummingdilakukandenganmencampurairsulingpanasdenganminyak mentahCNSL(1:1, v / v)
dalamgelas50 cm3. Gelasitu kemudianditempatkandalambakair(60 8C) dilengkapi denganpengaduk
magnetik(750 rpm) selama1 jam.Setelahdegumming,campurandidinginkansampai suhukamardan
disentrifugasi (2000g, 30 menit). The degummedCNSLdidekantasi,dikeringkandanditimbang.
Wax dipisahkandenganmenambahkanaseton(58C) ke degummedCNSL(1:1, v / v).Campuran
disimpanpada5 8C selama24 jam sebelummengalami sentrifugasi(4000 g, 30 menit).Lilinterbentuk
dipisahkanolehdekantasi,dikeringkandalamovendanditimbang.The DewaxeddandegummedCNSL
akan disebutsebagai CNSLakhirat.
2.3. Pemurnianfenol olehRPsilikagel kromatografikolom
RP silikagel SiliabondC18diaktifkansemalamdi 100 8C bawahvakum. Tiga kolomdengankolom
ketinggianyangberbedauntukrasiodiameterkolom(4:1,6: 1 dan8: 1) disusun.Silikagel yang
diaktifkanditempatkandi kolomdenganduaFritpolyethylene silinderditempatkandi keduaujungnya.
Bagianatas kolomkemudianlembut penuhdenganmetanol.Sekitar30 cm3 metanol melewati tidur
kolomuntukmembersihkankolomsebelumdigunakan.
Gambar. 1 menunjukkanprosedurumumdari kromatografi kolomfenol.Tigakolomdengansampel
rasiosilikagel dari 1:20, 1:50 dan 1: 100 (w / w) disusun.Setelahmenempatkansampel di bagianatas
kolom,tempattidurkolomdiisi denganmetanoldanitumembiarkanmelewati kolomolehgravitasi.
Sepuluhfraksi (0,5cm3 masing-masing)dikumpulkan.Setelahmenyelesaikanelusi,kolomdicuci dengan
kloroform.Semuafraksi dikumpulkankemudiandikenakananalisisTLC(Bagian2.4).Pecahanyangberisi
lebihdari satufenol menjadi sasarankromatografikolomlain.Prosesini diulangsampai senyawamurni
diperoleh.Senyawaterisolasi kemudiandenganhati-hati disimpandalambotol ketatdi 20 8C sebelum
analisislebihlanjut.

4. 2.4. AnalisisTLC
Sebuahreagenkhususdigunakanuntukmendeteksi fenol dalamanalisisTLC.Reagenini dibuatdengan
melarutkan300 mgCepat Blue B di 25 cm3 campuranaseton-air(9:1, v / v).Tempatyangdiinginkan
akan menunjukkanwarnamerah-violet.Metanol digunakansebagaifase gerak.Reagendisemprotkan
seragamsampai tempatyang diinginkanmuncul.
2.5. AnalisisHPLC
Kemurniandanpemulihanfenolyangdiperolehdari kromatografi kolomditentukandengan
menggunakan5mm kolomPhenomenex LunaC18(240 mm4,6 mm; Phenomenex,Torrance,CA),
denganlajualir1 cm3 / menitdanvolume injeksi dari 210 2 cm3 . Puncakterdeteksi denganJascoUV-
2077 detektormulti-panjanggelombangpada254, 278 dan 300 nm. The elutingpelarut(metanol)
disampaikandenganmenggunakanpompaJascoPU-2089 selama20 menit.Puncakdiidentifikasi dengan
menggunakananalisisunsur,resonansi magnetik(NMR) spektroskopi nuklir,FTIRdanspektrometri
massa.
2.6. Identifikasisenyawaanalisis
1H-NMR dan spektrum13C-NMR dicatatpada BrukerAvance III500 MHz Fourier-transform
spektrometerNMRmenggunakantetrametilsilan(TMS) sebagai bahanreferensi dandeuterat-ed
kloroformsebagai pelarut.PeningkatanDistortionlessmelalui transferpolarisasi(DEPT) spektrajuga
diukuruntukmengidentifikasi strukturfenol.SpektrumIRtercatatpadaBio-RadFTS-40 FTIR
SpektrofotometerdenganpeletKBrsebagai kosong.Rata-rata32 scan per sampel dibuat.Spektrum
massa diperolehdenganmenggunakanFinniganLCQMass Spectrometer.SebuahPerkinElmer240 C
unsuranalyzerdigunakanuntukanalisisunsur.
3. Hasil dan diskusi
3.1. Pemurniantigafenolatutama
AnalisisTLCawal CNSL(Gbr. 2) menunjukkanbahwapolaritasdari 3 fenol utamadi CNSLyang dekatsatu
sama lain.Hal ini menunjukkanbahwasulituntukmemisahkanini 3fenolatutama.Menurutpolaritas
mereka,senyawaA,B,dan C yangsementaradiidentifikasi sebagaikardanol,cardol danasam
anakardat,masing-masing.
Dalamkarya ini,tigatinggi kolomuntukrasiodiameter(4:1, 6: 1, 8: 1), tigaCNSL ke silikagel rasio(1:20,
1:50, 1: 100, w / w) dan tiga ponsel fase (metanol,metanol /asetonitril(1:1, v / v),asetonitril)yang
bekerjauntukmempelajariefekmerekapadapemisahan.Setiapfraksi yangdiperolehdari kromatografi
kolommenjadi sasaranTLCdan HPLC analisis.

5. 3.1.1. Pengaruhtinggi kolomuntukrasiodiameterpadapemisahan
Seperti tinggi kolomuntukrasiodiametermeningkatdari 4: 1 sampai 8: 1, peningkatanyangsignifikan
dalamkemurniansenyawaA,Bdan C diamati dalam3, 2 dan1 fraksi,masing-masing(Tabel 1).Di sisi
lain,pemulihandari merekafenolyangditemukan
sedikitmenurundenganmeningkatnyaketinggiankolomuntukrasiodiameter.Dalamkromatografi
kolomRP,lagi hasil kolompanjangtidurdalammempertahankansenyawayanglebihnon-polarlagi di
tempattidurgel RP-silikaketikakolomdielusi denganfase gerak.Hal ini padagilirannyamemperpanjang
keduawakturetensi masing-masingsenyawayangakandielusi danretensiinterval waktuantaradua
senyawaberturut-turutdielusi.Dengandemikian,padaprinsipnya,hanyasenyawayangpalingpolar
dalamcampuran akandikumpulkandalambeberapafraksi pertama.Liuetal.[12] bekerjadengan
pemisahanpeptidadanmelaporkanbahwadenganmenggunakankolomlagi adalahmungkinuntuk
memperpanjangrun-to-runwaktukarenakeduatertundawakturetensipeptidadanlagi kolomwaktu
re-ekuilibrium.Faktor-faktorini mempengaruhi waktuyangdibutuhkanuntuk
menyelesaikankromatografipenuhberjalan,bahkanhanyaadapeningkatan7% dalamwaktu
mengkonsumsibersihdengantinggi kolomduakali lipatuntukrasiodiameter.
Sebuahtinggi kolomuntukrasiodiameter8:1 dipilihuntukstudi lebihlanjut.Hal ini karenapadarasio
ini,kemurnianfenol yangdiperoleh
secara signifikanlebihtinggi dari yangdiperolehdenganmenggunakanrasioyanglebihrendah.Di sisi
lain,pengaruhketinggiankolomuntukrasiodiameterpadapemulihanfenoltidaksignifikan.
3.1.2. PengaruhCNSLke silikagel rasiopadapemisahan
Tabel 2 menunjukkanpengaruhsampel rasiosilikagel padakemurniandanpemulihanfenol.SenyawaC
digunakansebagai indikatoruntukmelihatpengaruhdari CNSLrasiosilikagel.Hal ini dapatdilihat
bahwaada perbedaandalamkemurnianasamanakardatantara tigaCNSL rasiosilikagel ditelitihanya
sedikit.Namun,pemulihansenyawaCmenurunsecarasignifikandari 88,3% menjadi 63,4% sebagai
CNSL ke silikagel rasiomenurundari 1:20 sampai 1: 100. Isi dan pemulihansenyawaBdalamfraksi 2
dan senyawaA di fraksi 3 mengikuti trenyangsamaseperti yangdari senyawaC(datatidak
ditampilkan).KemurnianberubahhanyasedikitsebagaiCNSLke silikagel rasiomenurun,namun
pemulihanmenurunsecarasubstansialdengan penurunanCNSLke silikagel rasio.SebuahCNSLke silika
gel rasiolebihbesardari 1:20 mengakibatkanpemisahanberhasil (datatidakditampilkan)karenalebih
besardari kapasitaslineardari kolom[13].Ini phenome-nonjugamungkinkarenakapasitaspengikatan
gel silikapadaCNSL.PadaCNSL menurunsilikagel rasio,CNSLakanmemilikilebihbanyakakseske ligan

6. hidrofobikbergerakdanterikatkuatdenganpermukaanyangtersediadari RP-silikagel yangakan
menghasilkanpemulihanyanglebihrendahketikajumlahyangsamadari fase gerak daneluenyang
digunakan.Gunawanetal.[14] juga melaporkanbahwalebihsilicagel memberidaerahadsorpsi lebih
tinggi perunitfraksi lipidnon-polar,yangmengakibatkanwaktuelusi lagi denganpemisahansebanding
karenajumlahyanglebihtinggi dari fase gerakyangdibutuhkanuntukmenggantikanasamlemakester
steryl.
Selainmenghasilkanpemulihanyanglebihtinggi,CNSLyanglebihtinggiuntuksilikagel rasiodiinginkan
karenakurang adsorbendanwaktuelusi pendekdiperlukan.Dengandemikian,CNSLuntuksilikagel
rasio1:20 (w/ w) terpilihdalamkromatografi kolomRP.
3.1.3. Pengaruhkomposisipelarutorganikpadapemisahan
Secara umum,kromatografi kolomRPmenggunakancampurankomponenpenyangga,pelarutorganik
(pengubah) danpasanganagenionsebagai fase gerakuntukmempengaruhi selektivitas.Komponen
penyanggadanionpasanganagen sebagianbesardigunakanuntukpeptidadanpemisahanprotein.
Dalampemisahanfenol,pelarutorganiktunggal biasanyadigunakan.Menggunakanpelaruttunggal
sebagai fase gerakdiinginkankarenalebihmudah pemulihandanpenggunaankembali pelarut.Dua
yang palingbanyakdigunakanpelarutorganikyangasetonitril danmetanol karenakemampuaneluting
kuat danUV transparan.
Dalamkarya ini,metanol murni,campuranmetanol danasetonitril (1:1,v / v) danasetonitril murni
digunakanuntukmengetahui pengaruhfase gerakpadakemurniandanpemulihanfenol.Dari Tabel 3,
dapat dilihatbahwakemurniansenyawaCdalamfraksi pertamamenurundari 87,3% menjadi 79,7%
pada saat fase gerakdiubahdari metanol ke asetonitril,denganpenurunannilai pemulihansenyawaC
dari 87,2% menjadi 79,9%.Fenomenaini mungkinkarenapengaruhpolaritasfase gerak.Semakin
rendahpolaritascampuranpelarut,semakintinggidayaelusi adalah.Selainpolaritas,Snyderdan
Kirkland[13] melaporkanbahwafase mobileviskositasrendah,seperti metanol,disukai dalamrangka
mempertahankanefisiensi kolomyangtinggi.Olehkarenaitu,metanol murni dipilihsebagai fase gerak
untukstudi lebihlanjut.
3.2. Dua-langkahkromatografi kolomgel silikaRP
Tabel 4 menunjukkanhasil fraksinasidari CNSLyangdiperolehkromatografi kolompertama-langkah
(tinggi kolomuntukdiameter
Rasio= 8: 1, CNSLke silikagel rasio=1:20, fase gerakmetanol = murni).SenyawaCdi fraksi 1 memiliki
kemurnian87,0%dan 87,0% pemulihan,sedangkansenyawaBdengankemurnian88,3% dan85,7%
pemulihandiperolehdalamfraksi-2.Dalamfraksi 3,senyawaA dikumpulkandengankemurnian87,9%
dan 86,1% pemulihan.Sebuahkromatografi kolomLangkah2 dilakukanuntukmencapai kemurnian
tinggi dari fenol.Kondisioperasi untukkromatografi kolomkedua-langkahyangsamadenganyangdari

7. langkahpertama.
Seperti ditunjukkanpadaTabel 5,kromatografi kolomdualangkahberhasil mendapatkansenyawaA,B
dan C dengankemurniantinggi danpemulihanyangmemuaskan.SenyawaCdengan98,8% kemurnian,
senyawaB dengankemurnian99,3%dansenyawaA dengankemurnian99,2% diperolehsetelah
kromatografi kolom 2.The pemulihankeseluruhansenyawaA,Bdan C adalahsemuatentang81% yang
hanyasedikitlebihkecil dari pemulihandicapai dengankromatografi kolomlangkah(85% sampai 87%).
Ini mungkinkarenaketikapecahandielusi menjadisasarankolomkeduachromatogra-phy,waktu
retensi antaradua fenol berturut-turutyanglagi diperpanjang,sehinggalebihmudahuntuk
memurnikansenyawatanpamengorbankanpemulihansubstansial.
SenyawaA 13C NMR (CDCl3,d): 13,779 (CH3),22.643- 31,977 ((-CH2-) 14),128,149 (C-4), 129,914 (C-6),
130,384 (C-3),135,423 (C-5),136,816 (C-2),147,768 (C-1).1H NMR (CDCl3,d):0.846 (3H, CH3), 1,243-
1,619 (28H, CH2), 6,675 (1H, H-5),6,767 (1H, H-4),6,882 (1H, H-6) , 7,240 (1H, OH),7,343 (2H, H-2).IR
(KBr):589, 712, 819, 904, 987, 1214, 1247, 1304, 1449, 1647, 2855, 2925, 3009 cm 1. Analisisunsuryang
ditemukan:C,82,67%, H, 11,90%, N, 0,22 %,O, 5.21%. m / z: 304,2.
SenyawaB 13C NMR (CDCl3,d):14,076 (CH3), 27.197- 31,959 ((-CH2-) 14), 126,802 (C-4),127,569 (C-6),
130,112 (C-5),136,810 (C-2),146,086 (C-3),147,655 (C-1).1H NMR (CDCl3,d):0,894 (3H, CH3), 1,245-
1,599 (28H, CH2), 6,223 (2H, OH),6,858 (1H, H-2),7,331 (2H, H-4, H- 6). IR (KBr):584, 716, 827, 910, 994,
1162, 1213, 1245, 1303, 1452, 1645, 2856, 2927, 3010 cm 1. Analisisunsuryangditemukan:C,78,68%,
H, 11,25%, N , 0,20%, O, 9,87%. m / z: 320,1.
SenyawaC13C NMR (CDCl3,d):14,105 (CH3),27.201- 32,754 ((-CH2-) 14), 96,113 (substitusi
heteroaromatik),126,824 (C6H5-),127,590 (C-5),129,293 (C-3), 130,381 (C-4),134,963 (C-1),136,837
(C-6),156,710 (C-2),163,567 (-C (5O) OH).1H NMR (CDCl3,d): 0,873 (3H, CH3), 1,263-1,781 (28H, CH2),
6,601 (1H, OH),7,240 (1H, C (5O) OH), 6,717 (1H, H-4) , 6,838 (1H, H-3),7.310 (1H, H-5). IR (KBr):763,
1038, 1210, 1351, 1449, 1614, 2928, 3368 cm 1. Analisisunsuryangditemukan:C,75,9%, H, 10,33%, N,
0,76%, O, 13.01%. m / z: 348,8.
Analisisunsur,NMRspektrum,spektrumIRdananalisisMSmenegaskanstrukturdari semuasenyawa
yang dilaporkan.KarakterisasisenyawaditentukanbahwasenyawaA,Bdan C memilikistrukturseperti
yang digambarkanpadaGambar. 3. A adalah3-pentadecyl fenol (C21H36O),isomerdari kardanol,danB
adalah5-pentadecyl resorsinol (C21H36O2),strukturisomerdari cardol,sedangkanCadalah6-
pentadecyl asamsalisilat(C22H36O3),asam anakardatisomer. Hasilnyadalamperjanjiandenganorang-
orang dari Kimet al.[15] danMaia etal. [16].
4. Kesimpulan
Sebuahkromatografi kolomgel silikaRPdualangkahsukses-benarditerapkanuntukmemurnikan
isomerdari asam anakardat,kardanol dancardol. Kondisi yangtepatyangdibutuhkanuntuk
mendapatkanhasil ini adalahsebagai berikut:CNSLke silikarasiomassagel 1:20, tinggi kolomrasio
diameter8:1 dan metanol sebagai fase gerak.Dengankondisi tersebut,asamsalisilat6-pentadecyl

8. (C22H36O3, isomerjenuhasamanakardat) dengankemurnian98,8% dan 82,4% recovery,5-pentadecyl
resorsinol (C21H36O2, isomerjenuhcardol)
dengan99,3% kemurniandan80,7% recovery,dan3-pentadecyl fenol(C21H34O,isomerjenuh
kardanol) dengankemurnian99,2%dan 81,8% recoverydiperoleh.
Ucapan TerimaKasih
Karya ini didukungolehDepartemenIlmudanTeknologi Taiwan(NSC98-2221-E-011-046-MY3) dan
National TaiwanUniversityof Science andTechnology(100H451403).