Este documento trata sobre dos géneros de bacterias: Neisseria y Mycobacterium. Neisseria incluye especies que son parte de la flora normal del tracto respiratorio humano, pero N. gonorrhoeae y N. meningitidis son patógenos. M. tuberculosis causa tuberculosis, mientras que otras especies de Mycobacterium pueden causar infecciones. El documento describe factores de virulencia, patogénesis, diagnóstico y tratamiento de estas bacterias.

1. NEISSERIAS Y MICOBACTERIAS Blga. Jessie de la Cruz Lazo, 2010

2. NEISSERIAS Las neisserias son cocos gramnegativos generalmente presentes en pares.

3. La familia Neisseriaceae Neisseria Moraxella catarrhalis Cinetobacter kingella

6. Cápsula Lipooligosacáridos Pilis Membrana externa Proteínas de membrana citoplásmica Proteínas de membrana externa Fosfolípidos Membrana citoplásmica

7. Las neisserias es un diplococo gramnegativo carente de motilidad que mide 0.8 um de diametro aprox. Los cocos individuales poseen la forma de un riñon. Las colonias son transparentes, convexas, brillantes u opacas y elevadas, no pigmentadas y no hemolíticas. Crecen mejor en condiciones aerobias. Algunas crecen también en ambiente anaeróbico. Los gonococos y meningococos crecen mejor sobre medios que contengan sustancias orgánicas como sangre calentada, hemina y proteína de animales y con 5 - 10% de CO 2 .

8. Neisseria gonorrhoeae es un agente etiológico de una enfermedad de transmisión sexual Es un diplococo Gram negativo, oxidasa positivo, como todas las Neisserias. La denominación gonorrhoeae deriva del griego (gonos, que significa semilla y rhóia, que quiere decir descarga) debido a que, en los enfermos que la padecen, hay salida de semen sin erección. En los frotis teñidos con pus uretral, los gonococos se observan como diplococos Gram negativos intracelulares en forma de biscocho.

9. Estructura antigénicas pili Adherencia a las células huésped y la resistencia a la fagocitosis Proteína por Forma poros Opa (proteína II) Adherencia de los gonococos dentro de las colonias y en las células huésped. Proteína Rmp Relacionado con la proteína Por LOS Efectos de toxicidad de los gonococos Otras proteínas Lip(H8), Fbp, proteasa IgA1

11. Se puede utilizar medios no selectivos enriquecidos con factores de crecimiento o selectivos, con una mezcla de antibióticos, como el medio de Thayer-Martin con vancomicina, nistatina, colimicina y trimetoprim-sulfametoxazol (Bactrim®). Requiere una atmósfera con 5-10% de CO2. Se caracteriza por ser de difícil cultivo, siendo muy exigente a nivel nutricional y a la vez muy sensible a sustancias que se encuentran en los medios de cultivo corrientes: ácidos grasos y sales

12. Los medios tambien requieren de: arginina. Hipoxantina y uracilo (auxotipo Arg-, Hyx-, Ura-). Crecimiento en medio Agar Chocolate Medio Thayer – Martin Solo para Neisseria

14. La enfermedad es altamente contagiosa, tiene un período de incubación de 3-5 días, su único reservorio es la especie humana y adopta con mucha frecuencia un curso asintomático lo que aunado a la ausencia de inmunidad ayuda a que la transmisión sea fácil y el diagnóstico difícil. PATOLOGIA

16. Los síntomas de la gonorrea van de ausentes a severos. Si se presentan síntomas, normalmente aparecen entre 2 -10 días después de haber tenido contacto sexual con una pareja infectada.. Sin embargo, en algunos casos, los síntomas no se presentan hasta después de un mes de haber estado expuesto.

18. Comparación en las tinciones

20. Morbilidad

23. Presenta 13 serogrupos definidos por el polisacárido capsular; A, B, C, D, E29, H, I, K, L, X, Y, Z, W135. Los A, B, C y W135 son responsables del 90% de las enfermedades meningocóccicas a nivel global Los serogrupos A y C son los principales responsables de las epidemias. El serogrupo B está generalmente asociado a casos esporádicos, aunque puede causar algunos brotes.

24. Factores de virulencia en Neisseria meningitidis Estructuras de superficie: IgA proteasa , degradación de IgA secretoria Vesículas de membrana externa , aumento de la invasividad, de regulación y desviación de los mecanismos de defensa. Pili , unión a las células no ciliadas de nasofaringe. Polisacárido capsular , antifagocítico, inmunogenicidad reducida en niños pequeños, no inducción de memoria, enmascaramiento de epítopos. Desregulación de la vía alternativa de activación del complemento (grupo B). Mimetismo antigénico OMPs , variación antigénica, variación de fase. IROMPs , captación de hierro para el crecimiento LOS , variación de fase/enmascaramiento de epítopos bactericidas,. Mimetismo antigénico. Sialización variable del LPS/enmascaramiento de epítopos. Utilización de factores de IgA , bloqueo de la acción lítica de otras subclases de anticuerpos.

26. La meningitis es la complicación más grave y más frecuente como consecuencia de una diseminación sanguínea. Las meninges presentan inflamación aguda con trombosis de vasos sanguíneos y exudado de leucocitos PMN (exudado purulento espeso en cerebro) Neisseria meningitidis Coloniza a través de la nasofaringe. Esta bacteria tiene la capacidad de adherirse a las células de la faringe y, de ahí, pueden pasar a la sangre y producir desde fiebre transitoria y bacteriemia hasta meningitis.

27. El Meningococo puede afectar diversos órganos Cuando la bacteria ataca las meninges (membranas que envuelven el cerebro), produciendo inflamación del líquido cerebro espinal, hablamos de Meningitis meningocócica. si la infección se disemina por vía sanguínea, produce un cuadro llamado Meningococcemia, que consiste en una septicemia que puede presentarse con o sin meningitis y cuya evolución puede ser aguda o fulminante. Se caracteriza por un rápido colapso circulatorio con rash hemorrágico.

28. Cuadro Clínico Meningitis meningocócica se caracteriza por un comienzo repentino y cuyos síntomas más frecuentes son: - fiebre, - decaimiento, - dolor de cabeza intenso. - náuseas y a menudo vómitos, - el signo más característico es la existencia de MANCHAS DE COLOR ROJO VINOSO EN LA PIEL. Las enfermedades meningocócicas se transmiten por contacto directo con personas infectadas o portadores sanos asintomáticos, a través de gotitas y secreciones de las vías nasales y faringe (por ejemplo, al toser, estornudar, besar). El diagnóstico se realiza a través de la evaluación clínica de los síntomas y se confirma en laboratorio por detección de la bacteria N. meningitidis en muestras de líquido cefalorraquídeo (LCR).

30. Luego del diagnóstico Posteriormente, se realiza la tipificación de la Neisseria meningitidis para determinar el serogrupo (A, B, C u otro) y la sensibilidad a antibióticos. EPIDEMIOLOGIA La meningitis afecta principalmente a niños menores de 5 años. Para evitar secuelas, como sordera total o parcial, es fundamental tratar a tiempo la enfermedad, Por otra parte, con tratamiento adecuado, la enfermedad tiene actualmente alrededor de un 6% de letalidad.

33. Pruebas para el diagnóstico de laboratorio Test de la catalasa Test de la oxidasa Utilización de azúcares

36. MYCOBACTERIUM

41. vacuolas y su contenido de polifosfato

42. Constituyentes del bacilo tuberculoso CARBOHIDRATOS : Arabino-galactanos Pueden inducir hipersensibilidad de tipo inmediato y como antígeno en reacciones con el suero de personas infectadas PROTEÍNAS : Lipoproteínas o Glicoproteínas Inducen la reacción de la Tuberculina y a la formación de anticuerpos. LÍPIDOS : Ácidos micólicos (Ac grasos de cadena larga C78 – C90), Ceras y Fosfátidos . PEPTIDOGLUCANO FOSFOLÍPIDOS Generan formación de granulomas Inducen necrosis caseosa Causantes de la resistencia al ácido Cord Factor Trealosa-6,6´-dimicolato Inhibe la migración de leucocitos Sirve con “adyuvac¡nte” inmunológico

43. Tuberculosis miliar

44. Enlace fosfodiéster Arabino-galactano Peptidoglucano Los lípidos son responsables de alrededor del 60% del peso seco de la pared

46. Metabolismo Satisfacen sus requerimientos energéticos por la oxidación completa de la glucosa o del glicerol a dióxido de carbono y agua Aerobios estrictos Son catalasa y peroxidasa positiva Para eliminar el peróxido de hidrógeno generado como producto de la cadena respiratoria terminal.

47. MICOBACTERIOFAGOS son fagos ADN bicatenarios que poseen una cabeza hexagonal u oval y una cola larga no contráctil. Pueden multiplicarse dentro de sus huéspedes y de este modo causar muerte celular por lisis, o establecer una relación lisogénica no lítica con el huésped La tipificación por fagos puede proporcionar información epidemiológica útil sobre la diseminación de los bacilos tuberculosos de persona a persona. El establecimiento de la lisogenia induce alteraciones en varias propiedades biológicas de las micobacterias: morfología de la colonia, velocidad de crecimiento, actividad enzimática y composición antigénica

50. PATOLOGÍA Producción y desarrollo de las lesiones, cicatrización y evolución Número de micobacterias en el inóculo y su multiplicación subsecuentes La resistencia y la Hipersensibilidad del huésped

51. PATOLOGÍA Lesiones principales: 1. Tipo exudativo 2. Tipo productivo Diseminación de los Microorganismos en el huésped Sitio de crecimiento intracelular 1. En tejido pulmonar: Reacción inflamatoria con líquido de edema, leucocitos PMN y monocitos que rodean a los bacilos tuberculosos TB+ 2. Lesión desarrollada: granuloma crónico: células gigantes y multinucleadas (zona central), células epitelioides pálidas (zona media - radial), fibroblastos linfocitos y monocitos (zona periferica) TUBÉRCULO Propagación de los bacilos por extensión directa: Por conductos linfáticos y corriente sanguínea, por bronquios y ap. gastrointestinal Localización intracelular en monocitos Cel. reticuloendoteliales, cel. gigantes

52. 1.Tipo exudativo En tejido pulmonar: Reacción inflamatoria con líquido de edema, leucocitos PMN y monocitos que rodean a los bacilos tuberculosos Puede cicatrizar por resolución 2. Tipo productivo Lesión desarrollada: granuloma crónico: células gigantes y multinucleadas (zona central), células epitelioides pálidas (zona media - radial), fibroblastos linfocitos y monocitos (zona periferica) REACTIVACIÓN

53. TBC miliar Diseminación desde el sitio inicial a los ganglios linfáticos regionales a través de vía linfática. Torrente sanguíneo Órganos Infección Secundaria (forma cavernas) Erosión Tuberculosis extrapulmonar huesos y las articulaciones, el aparato genitourinario, las meninges, los ganglios linfáticos y el peritoneo

54. Los bacilos tuberculosos son muy resistentes a la desecación. En cultivos podrían estar viables y virulentos durante 12 años a 37°C. RESISTENCIA Ante exposición solar directa los microorganismos * en cultivos son destruidos en 2 horas * en esputo requieren una exposición de 20 a 30 horas para ser destruidos. * en esputo desecado protegido de la luz solar directa permanecen viables hasta durante 6 a 8 meses.

55. PRUEBA DE TUBERCULINA Tuberculina antigua (OT): es un filtrado concentrado del caldo en el cual han crecido bacilos tuberculosos durante 6 semanas. PPD (derivado purificado de la proteína) se obtiene por fraccionamiento de la tuberculina antigua. Se estandariza por reactividad biológica (UT) o magnitud de reacción (humanos): Tuberculina * 1° potencia 1 UT * Potencia intermedia 5 UT * 2° potencia 250 UT Dosis de tuberculina: 0.1 ml intradérmica (5 UT) en huésped hipersensible. PPD se estabiliza con polisorbato 80 para evitar adservacion al vidrio Reacciones de tuberculina: Sin contacto con micobacterias PPD-S no hay reacción Con contacto con micobacterias: Induración, edema y eritema (24-48 h) y con reacciones muy intensa necrosis central. PPD-S + = 10mm a más

57. Pruebas diagnósticas de laboratorio Muestras Descontaminación y concentración de muestras Frotis Cultivo, Identificación y pruebas de susceptibilidad Detección de ADN, serología y detección de antígenos Esputo y otros líquidos no esteriles deben licuarse con N acetil-L-cisteína, descontaminarse con NaOH, neutralizarse y concentrarse por centrifugación. El esputo, los exudados u otro material se examina en busca de BAAR. Microscopía por fluorescencia (auramina-rodamina) tiene mayor sensibilidad. Cultivo en medios selectivos y no selectivos. Caract. Bioquimicas: Prueba niacina+, reducción del nitrato, ureasa y catalasa +, arilsulfatasa+. Sondas moleculares, rápido y sensible (hibridización). Cromatografía de fase líquida de alta resolución, para especiación (perfiles de ac. Micólicos). Cultivo radiometrico, para susceptibilidad a los fármaco de 1° línea. Esputo fresco, lavado gástrico, orina, liquido Pleural, LCR, líquido pleural, material de biopsias,, sangre u otros. PCR 55 – 90% de sensibilidad. Inmunoanálisis enzimático, para detección de antígenos micobacterianos con poca sensibilidad.

58. Tuberculosis pulmonar

60. Nódulo pulmonar; vista frontal en placa de rayos X de tórax

67. Mycobacterium leprae Lepra lepromatosa Lepra tubercuolide Evolución progresiva y maligna con lesiones nodulares cutáneas. Evolución benigna y no progresiva con lesiones cutáneas maculares. Afección simétrica lenta de los nervios Afección nerviosa asimétrica grave. Bacteriemia continua, imnunidad celular deficiente. Imnunidad celular intacta. Piel infiltrada por células T supresoras. Piel infiltrada por células T colaboradoras.