Fitoquimica-MOLLE

1. UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA
FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEÚTICAS Y BIOQUÍMICA
Tamizaje Fitoquímico de ‘‘schinus molle”
Presentado por:
Asesora:
Dra. Nora Herrera
Lima-Perú
2016

3. INTRODUCCIÓN:
 La flora silvestre de Perú ha sido poco estudiada
químicamente, lo que ha limitado la explotación y
aprovechamiento racional de este recurso natural
ampliamente distribuido, particularmente en zonas
donde las especies endémicas alcanzan un porcentaje
elevado.
 Conocer el contenido de metabolitos secundarios de las
plantas y, en especial, de las especies endémicas, permite
contar con una fuente natural renovable de éstos. Dichos
compuestos poseen gran valor económico por sus
variadas acciones fisiológicas y aplicaciones industriales.
Fuente: Rafols W. Aprovechamiento industrial de los
productos agrícolas. Barcelona: Salvat, 1964:20.

4. APLICACIONES GENERALES DE FITOCOSTITUYENTES

5. Fuente: Rafols W. Aprovechamiento
industrial de los productos agrícolas.
Barcelona: Salvat, 1964:20.

6. OBJETIVOS GENERALES:
 Conocer los procesos de tratamiento involucrados en la preparación
de la muestra (Lavado, desinfección, blanqueo, secado).
 Identificación y determinación cualitativa de los diferentes grupos
constituyentes químicos de la planta como son: carbohidratos,
taninos, aminoácidos y proteínas, flavonoides, terpenoides,
quinonas, antocianinas, saponinas, glicósidos.
 Aprender sobre el análisis cualitativo y el Tamizaje Fitoquímico en
Schinus Molle para determinar los diversos metabolitos secundarios
presentes .
Fuente: Robinson T. The organic constituents of
higher plants. 2 ed. Londres.

7. OBJETIVO ESPECÍFICO
 Identificar Los metabolitos secundarios Mayoritarios del
‘schinus molle’.

8. TAMIZAJE FITOQUÍMICO DEL
‘‘schinus molle’’
FUENTE: MOLLE.
http://www.meiqe.com/10/el-molle/

9. ASPECTOS GENERALES
Pirul, pirú, árbol del Perú; molle, cuyash, huaribay; aymara,
muelle, falso pimiento, pimiento; mullí; aguaribay, árbol de la
pimienta, Gualeguay; pimentero.
NOMBRES COMUNES:
Schinus es el nombre latino, de origen griego para designar al
lentisco; fue aplicado al pimentero falso, porque produce una
resina olorosa muy similar a la del lentisco. Molle fue un
antiguo nombre genérico para esta planta, utilizado por
Tournefort, y deriva del nombre quechua mulli, no del latín
molle (flojo).
ETIOLOGÍA:
Fuente: Pretell, J. 1985. Apuntes sobre algunas especies forestales
nativas de la sierra peruana. Lima. Proyecto

10. TAXONOMÍA
REINO: Plantae
DIVISIÓN: Magnoliophyta
CLASE: Magnoliopsida
ORDEN: Sapindales
FAMILIA: Anacardiaceae
GÉNERO: Schinus
ESPECIE S. Molle
Fuente: Taxonomía de las fanerógamas útiles del Perú. Vol I
Autor: José Mostacero León, Freddy Mejía Coico, Oscar Gamarra Torres
Editorial(es): Concytec
Lugar de publicación: Trujillo
Año de edición: 2002

11. COMPOSICIÓN QUÍMICA
Hojas: Contienen flavonoides (quercetina, rutina, quercitrina e
isoquercitrina), pigmentos antocianídicos, triterpenos, β-sitosterol,
taninos, ácido gálico, ácido protocatéquico, glucosa, fructosa y aceite
esencial (0,5%). Además los ácidos linolénico, linoleico, lignocérico y
esteárico (presente también en corteza y semillas).
Frutos: Se han aislado aceites esenciales (2,4%) conteniendo: α-
bergamontranseno, bourboneno, α y δ- cadineno, α y γ-calacoreno,
calameneno, canfeno, carvacrol, β-cariofileno, γ-copaeno, croweacina,
γ-cubebeno, p-cimeno, butirato de geraniol, hexanoato de nerol, α y β-
felandreno, α y β-pineno, α –terpineol, γ-terpineno, α y γ-muuroleno,
etc. Además: cianidina-3-galactósido, cianidina-3-rutinósido y
peonidina-3-glucósido.
Fuente: Golstein D. & R. C. Colemann 2004. Schinus molle L. (Anacardiaceae)
chicha production in Central Andes. Economic Botany 58(4): 523-529

12. Son las propiedades curativas que se le asignan a las distintas partes de
la planta.
• Hojas: Antirreumático, cicatrizante, en la limpieza de los dientes,
digestivo, antimicrobiano.
• Fruto: Antirreumático, en la retención urinaria, emenagogo,
expectorante, antiparasitario.
• Corteza y resina: Antirreumático, cicatrizante, en dientes
careados.
• Aceites esenciales: Antimicrobiano, antiséptico, antiespasmódico
y sedantes, estimulan la secreción gástrica por lo que son digestivos
y estomáquicos; estimulación uterina, antiinflamatorio en casos de
cervicitis y vaginitis.
PROPIEDADES TERAPEÚTICAS
Fuente: Golstein D. & R. C. Colemann 2004. Schinus molle L. (Anacardiaceae)
chicha production in Central Andes. Economic Botany 58(4): 523-529

14. MATERIALES Y EQUIPOS
MATERIALES:
PIPETAS
PROPIPETA
GRADILLA CON
TUBOS DE ENSAYO PROBETA

15. BEACKER
EMBUDO
BAGUETA
ERLENMEYER
ESPATULA

16. EQUIPOS:
BOMBA DE VACIO PRO-SET
HORNILLA ELÉCTRICA BAÑO MARÍA

17. LAMPARA UV
ESTUFA BINDER

18. ESPECTROFOTÓMETRO
COCINILLA
ELÉCTRICA

19. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
PARA TAMIZAJE FITOQUÍMICO

20. En la medicina natural la cosecha está muy íntimamente
relacionada con el órgano de la planta que contiene el
principio activo pero también hay que considerar la
etapa fenológica de la planta, época del año, hora de la
cosecha, etc. Con dicho conocimiento podremos
adquirir una planta medicinal que sea rica en el
principio activo y poder extraer los principios activos.
Para la preparación de la muestra del cual extraeremos
dichos principios activos debemos aplicar una serie de
procesos como son:
Lavado, desinfección, blanqueo, secado.

21. Lavado: Consiste en eliminar tierras, agentes contaminantes y otros
materiales extraños mediante la aplicación de agua potable a la parte de la
planta que se va a deshidratar, del cual se obtendrá la droga.
Desinfección: Consiste en la eliminación de microorganismos
patógenos, Existe Eliminación Química y Física:
 Química: con inmersiones en sales cloradas (Hipoclorito de sodio o
calcio)
 Física: Deshidratar y desinfectar el material con radiaciones gamma,
este método se emplea cuando no es efectiva la desinfección química.
Blanqueo: Choque térmico por inmersión en agua caliente o con vapor
para inhibir la acción de las enzimas responsables de la oxidación.
Secado: Consiste en someter la muestra húmeda a temperaturas
adecuadas para su secado sin perder sus propiedades curativas. En general
30 a 60ºC para cortezas, raíces y rizomas, 20 a 40ºC para hojas y flores.

22. RECOLECCIÓN
Llegamos a identificar el árbol de molle y comenzamos a
recolectar la planta desde su hábitat, por lo tanto tuvimos
que ir al distrito de los olivos donde crecía dicha planta.
Uno de los integrantes del grupo comenzó a cortar
cuidadosamente las ramas del molle.

23. SELECCIÓN E IDENTIFICACIÓN:
Comenzamos a deshojar las ramas de molle, solo
utilizaremos las hojas identificamos las hojas buenas
porque algunas hojas se encontraban marchitas o con
rastros de haber sido afectada por cualquier agente
desconocido.
Seguimos deshojando la planta de molle ya que la droga
vegetal que se usara de la planta son las hojas.

24. Después de haber sido pesada las hojas
del molle se lavaron con mucho
cuidado con el agua destilada para
eliminar los retos de suciedad que
podría tener.
Por ultimo colocamos todas las
hojas del molle en una caja de
papel Kraft para llevarlo a
sequedad en el horno a una
determinada temperatura.

25. SECADO Y MOLIENDA
Después que las hojas de molle
fueron lavadas para quitar
cualquier resto de suciedad y
posteriormente colocarnos en la
caja de papel kraft se procedió a
colocar a la estufa para su secado.
Se colocó a la estufa a una
temperatura de 40°C no mayor ni
menor para evitar quemar las
hojas del molle y no perder sus
metabolitos.

26. El tiempo de secado fue aproximado
de 6 días después observamos que
las hojas estaban completamente
secas y comenzamos a pulverizarlo y
obtuvimos un peso se 500g en hojas
seca.
Colocamos la muestra en un frasco de vidrio ámbar y adicionamos
alcohol de 70°. Se deja reposar al extracto por aproximadamente por
5-7 días, cada 2 horas se realiza una agitación.

27. PREPARACIÓN DEL EXTRACTO SECO
A partir del macerado se procedió a
filtrar la muestra, comenzamos a filtrar
la muestra, porque solo queremos
obtener el extracto líquido para eso
utilizamos un embudo, algodón y
después papel filtro para que no caiga
restos del molle.
Una vez terminado el proceso de
filtrado llevaremos el Extracto
líquido a una placa Petri para
llevarlo a la estufa a una
temperatura de ≤ 40°C.

28. ANÁLISIS DEL EXTRACTO SECO Y
MARCHA DE SOLUBILIDAD
El objetivo es determinar la solubilidad del extracto seco con solventes
polares y apolares, para ello se debe probar con diferentes reactivos como
son: éter de petróleo, diclorometano, benceno, acetona, metanol, etanol,
butanol, agua destilada. Pesamos del extracto seco 0.05g y vamos agregando
los solventes de ml en ml.

29. RESULTADOS
SOLVENTE CANT SOLVENTE
USADO
CONCLUSIÓN
ETER DE PETROLEO 3 ml POCO SOLUBLE
BENCENO 2 ml SOLUBLE
DICLOROMETANO 1 ml MUY SOLUBLE
ACETONA 1 ml MUY SOLUBLE
METANOL 2 ml SOLUBLE
ETANOL 2 ml SOLUBLE
BUTANOL 2 ml SOLUBLE
AGUA DESTILADA 3 ml POCO SOLUBLE
Se concluye que los mejores solventes a utilizar
son la acetona, el diclorometano.

30. Se realiza análisis organoléptico de la muestra seca del molle.
CARACTERÍSTICAS OBSERVACIONES
• Color Caramelo-Café
• Olor Caramelo
• Sabor Agrio
• Textura Viscosa

31. RECONOCIMIENTO DE ALCALOIDES
El procedimiento previo consiste en pesar 0.05g del extracto seco y
mezcla con 15 ml de Etanol, luego se separa 1 ml en 14 tubos de
ensayo y se agita. Para los alcaloides se le adicionó 0.5ml de reactivo
a 5 tubos que contenían 1ml de la solución. Los reactivos utilizados
fueron Dragendorff, Wagner, Mayer, Popoff, Sonenschein.

32. RESULTADOS
REACTIVO COLOR OBSERVADO CONCLUSIÓN
DRAGENDORFF LADRILLO CLARO ++
WAGNER LADRILLO OSCURO +
MAYER AMARILLO AGUA -
POPOFF AMARILLO INTENSO ++
SONENSCHEIN VERDE OSCURO +++
ALCALOIDES: metabolitos secundarios de las plantas
sintetizados, generalmente, a partir de aminoácidos, que
tienen en común su hidrosolubilidad a pH ácido y su
solubilidad en solventes orgánicos a pH alcalino. Los alcaloides
verdaderos derivan de un aminoácido, son por lo tanto
nitrogenados. Todos los que presentan el grupo funcional
amina o iminas son básicos.

33. DRAGENDORFF

34. MAYER

35. RECONOCIMIENTO DE TANINOS
Para los taninos se le adicionó 0.5ml de reactivo a 3
tubos que contenían 1 ml de la solución. Los reactivos
utilizados fueron: Gelatina, Gelatina-Sal y FeCl3 al 10%

36. RESULTADOS
REACTIVO COLOR OBSERVADO CONCLUSIÓN
GELATINA PP BLANQUECINO ++
GELATINA SAL PP BLANQUECINO +++
FeCl3 ROJO PARDO +++
TANINOS: Químicamente son metabolitos secundarios de las
plantas, fenólicos, no nitrogenados, solubles en agua y no
solubles en alcohol ni solventes orgánicos. Abundan en las
cortezas de los robles (donde están especialmente
concentrados en las agallas) y los castaños, entre otros árboles.

37. TANINOS

38. RECONOCIMIENTO DE
LEUCOANTOCIANIDINAS
Procedimiento: a un tubo que contenía 1 ml de
la solución se le agregó 0.5 mL de HCl al 1%+ V
gtas de HCl conc y se lleva a baño maría por 10
min, luego dejar enfriar y agregar XX gtas de
alcohol.

39. Las antocianinas son pigmentos hidrosolubles que se hallan en
las vacuolas de las células vegetales y que otorgan el color rojo,
púrpura o azul a las hojas, flores y frutos. Las antocianinas
pertenecen al grupo de los flavonoides y son glucósidos de las
antocianidinas, es decir, están constituidas por una molécula de
antocianidina, que es la aglicona, a la que se le une un azúcar
por medio de un enlace glucosídico.
Reacción de Rosenheim: la presencia de color rojo oscuro (+)
sirve para identificar antocianinas y flavonoides catéquicos.

40. RECONOCIMIENTO DE FLAVONOIDES
Procedimiento de R. Shinoda: a un tubo que contenía 1
mL de solución se le agrega 1 viruta de Mg+2, mas III gotas de
HCl conc. El color rojo (+) se da en presencia de flavonoides,
chalconas, auronas. Las catequinas e isoflavonas no dan color
rojo.

41. RECONOCIMIENTO DE GLICÓSIDOS
CIANOGENÉTICOS
 Reactivo de Baljet: a 1 ml
de la solución se le adiciona
V gotas de acido plénico.
 Reactivo de Legal: a 1 mL
de solución se le adiciona X
gotas de nitroprusiato de
sodio mas III gotas de KOH.

42. Los Glucósidos cianogénicos son metabolitos secundarios de las
plantas que cumplen funciones de defensa, ya que al ser
hidrolizados por algunas enzimas liberan cianuro de hidrógeno,
proceso llamado cianogénesis.
 los glucósidos cianogénicos derivados de los aminoácidos
ramificados son comunes en las subfamilias Amygdaloideae y
Maloideae de las rosáceas; y otros similares son encontrados en
las Fabaceae y Sapindaceae.
 los glucósidos cianogénicos derivados de la tirosina son
comunes en muchas familias de Magnoliales y Laurales.
GLICÓSIDOS CIANOGENÉTICOS

43. Procedimiento: a 1 mL de la muestra problema se le
tapo con papel de filtro humedecido en NaOH al 10%+
D, se calienta a 80°C x5 min y se observa a luz UV a
365nm.
RECONOCIMIENTO DE CUMARINAS
WARFARINA
DICUMAROL
PSORALENO

44. Procedimiento: Se mezcla 0.5 ml de la muestra problema con V gotas de
acido acético glacial+ 1ml de reactivo Lieberman- Buchard (Ac2O +
H2SO4 con en proporción 50:1), El color verde, azul, naranja, rojo es
positivo y verifica la presencia de esteroides y triterpenoides.
RECONOCIMIENTO DE
TRITERPENOS Y ESTEROIDES
El resultado sale positivo a la prueba de Lieberman-Buchard.

45. RECONOCIMIENTO DE ANTRAQUINONAS
Procedimiento: Se Mezcla X gotas de MP con V
reactivo SR Borntrager (V gotas de Hidróxido de Sodio
al 5%). El color rojo es positivo y comprueba la presencia
de antraquinonas.
La antraquinona o 9,10-dioxoantraceno es un
compuesto orgánico aromático, derivado del
antraceno.

46. RECONOCIMIENTO DE SAPONINAS
Reacción de Saponinas: 1 g de MP + 10 mL de Agua
destilada. Agitar fuertemente por 1 min, la presencia de
espuma de 0.5 a 1cm (+) sirve para identificar saponinas.

47. RECONOCIMIENTO DE AZUCARES
REDUCTORES
Reacción de Fehling: se usa una mezcla de reactivos Fehling A (Sulfato
de cobre) y Fehling B (tartrato de sodio y potasio)+ calor + MP. Sirve para
la identificación de Azucares Reductores, lo cual se evidencia por la
aparición de un color rojo ladrillo.
Un ejemplo de esto es la glucosa:

48. RECONOCIMIENTO DE
AZUCARES REDUCTORES

49. RECONOCIMIENTO DE AZUCARES
Reacción de Molisch: Es un indicador bioquímico de la
presencia de carbohidratos en una solución, si los
carbohidratos están presentes se formara un anillo violeta por
la reacción del alfa naftol en presencia de ácido sulfúrico. La
reacción se basa en la acción deshidrantante del ácido
sulfúrico sobre los carbohidratos. En dicha reacción el ácido
sulfúrico cataliza la hidrolisis de los enlaces glucosídicos de
la muestra y la deshidratación a furfural en pentosas o
hidroximetilfurfural en las hexosas. Estos furfurales se
condensan con el alfa naftol del reactivo de molisch dando un
producto coloreado.

50. RECONOCIMIENTO DE AZUCARES

51. RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS
Reacción de Ninhidrina: La ninhidrina sirve para probar la
presencia de aminoácidos, en presencia de aminoácido alfa, se
torna azul a azul violeta. En la reacción la Ninhidrina está presente
como 2,2-dihidroxi-1,3-indandiona. Los aminoácidos son
decarboxilados, por una acción un inestable ácido iminocarbónico
es oxidado a un aldehído menor en un átomo de Carbono. A
continuación un ejemplo de la reacción de la Ninhidrina con la
Glicina.

52. RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS

54. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (CCD)
El objetivo es determinar la corrida cromatografía y observar que tipo de
metabolitos se pueden reconocer. Para esto trabajamos con 04 fracciones
y usando cromatofolios.
PROCEDIMIENTO (1ERA FRACCIÓN):
 Fase estacionaria se uso Sílica Gel.
 Fase móvil: bencina-cloroformo (8:2).
 Revelador: vainillina en acido sulfúrico.
Se sembró en los cromatofolios a 1cm
aproximadamente a 03 toques usando un
capilar.
ETER DE PETRÓLEO

56. Dejamos sature la cámara por 5 minutos, colocamos la placa dentro de la
cámara y no mover. Dejamos que corra la muestra hasta 1cm antes del final
de la placa, se retira y se observa a la luz UV.
El Rf pone de manifiesto la presencia de terpenos

57. PROCEDIMIENTO (2 DA FRACCIÓN):
 Fase estacionaria se uso Sílica Gel.
 Fase móvil 1: Cloroformo.
 Fase móvil 2: Cloroformo- Acetona (8:2)
 Revelador 1: Ácido Perclórico (HClO4)
 Revelador 2: vainillina en acido sulfúrico.
Se sembró en los cromatofolios a 1cm
aproximadamente a 03 toques usando un
capilar.
DICLOROMETANO

59. Dejamos sature la cámara por 5 minutos, colocamos la placa dentro de la
cámara y no mover. Dejamos que corra la muestra hasta 1cm antes del final
de la placa, se retira y se observa a la luz UV.

60. PROCEDIMIENTO (3ra FRACCIÓN):
 Fase estacionaria se uso Sílica Gel.
 Fase móvil: Cloroformo- Metanol (9:1)
 Revelador : FeCl3 tricloruro férrico.
Se sembró en los cromatofolios a 1cm
aproximadamente a 03 toques usando un
capilar.
METANOL

61. Dejamos sature la cámara por 5 minutos, colocamos la placa dentro de la
cámara y no mover. Dejamos que corra la muestra hasta 1cm antes del final
de la placa, se retira y se observa a la luz UV.

62. PROCEDIMIENTO (4ta FRACCIÓN):
 Fase estacionaria se uso Sílica Gel.
 Fase móvil 1: Cloroformo- Metanol (6:4)
 Revelador 1: FeCl3 al 1%.
 Revelador 2: Dragendorff.
Se sembró en los cromatofolios a 1cm
aproximadamente a 03 toques usando un
capilar.
AGUA

63. Dejamos sature la cámara por 5 minutos, colocamos la placa dentro de la
cámara y no mover. Dejamos que corra la muestra hasta 1cm antes del final
de la placa, se retira y se observa a la luz UV.

64. RESULTADOS FINALES

65. Con la experiencia previa realizada en cromatofolios se realiza la
cromatografía en grande para lo cual se siembra a lo largo de la placa y
se usa como solvente la fracción diclorometano.

66. Dejamos sature la cámara por 5 minutos, colocamos la placa dentro de la
cámara y no mover. Dejamos que corra la muestra hasta 1cm antes del final
de la placa, se retira y se observa a la luz UV.
La cubeta contenía como mezcla de solventes 40 mL de cloroformo y 10 ml de acetona

67. ESPECTROFOTOMETRÍA
Se raspa la ultima cromatoplaca , el raspado se coloca en un
vaso de precipitado y luego se agrega de 5ml en 5ml
cloroformo hasta observar reacción.

68. Luego se cuela y el resultado colado se lleva al espectrofotómetro

69. FINALMENTE:
No se pudo ver bien los
resultados debido a
contaminación cruzada
debido al mal uso de los
instrumentos.

71. CONCLUSIONES:
 El molle presenta compuestos fenólicos especialmente taninos ya
que da (+3) a la prueba con tricloruro férrico.
 La reacción de Brown también da positivo por lo que concluimos
que el molle presenta azucares reductores, es decir azucares con
un grupo carbonilo libre o potencialmente libre como son la
glucosa y la fructuosa..
 La presencia de taninos son expuestos ya que dan (+3) con la
reacción de agua de bromo. El tanino presente en el molle es el
elagitanino.
 Con la Ninhidrina da (+3) por lo que podemos concluir que el
molle presenta aminoácidos. El aminoácido que presenta el
molle es el triptófano.
 El Schinus molle L. tiene gran actividad cicatrizante por
contener aceite esencial de diferentes concentraciones. Se
encontró que el aceite esencial del Schinus molle L.“molle”, está
constituido principalmente por monoterpenos y sesquiterpenos.

72.  Se comprueba con los experimentos realizados en clase que el
molle tiene esteroles.
 Se comprueba que el molle tiene alcaloides porque da (+3) con el
reactivo de Dragendorff y con el reactivo de Sonnenschein.
 Se comprueba la presencia de antocianinas ya que el molle da
positivo a la prueba de Rosenheim.
 Se comprueba la presencia de glicósidos ya que da positivo a la
reacción con el vainillín sulfúrico.
 Los aceites esenciales se presentan en un 2% en las hojas del S.
molle y contienen terpenoides, siendo el cis-menth-2-en-1-ol y el
trans-piperitol los que han sido involucrados con esta planta. Por
otro lado Ruffinengo (2005) han encontrado que el canfene,
mircene, beta-felandrene y alfa-felandrene son los principales
compuestos de los aceites esenciales de las hojas de S.molle.
 Se comprueba que si bien el molle no tiene antraquinonas si
tienen flavonoides y otros compuestos fenólicos especialmente
en el fruto.
 Los ensayos en el laboratorio muestran que el molle tiene gomas
y mucílagos.