presentación sobre biología molecular :The respiratory syncytial virus polymerase can perform RNA synthesis with modified primers and nucleotide analogs.
2. Introduction
Respiratory syncytial
virus (RSV)
Upper respiratory infection
mild flu-like symptoms
Serious lower respiratory tract
diseases
Who does it affect? Everyone but mostly: Infants and
Young children,the elderly,and
immunocompromised individuals
Resulting in life-long
respiratory
problems
Possible treatment
Palivizumab (antibody)
Only Works
prophylactically
Ribavirin (effect against
RSV)
But has poor efficacy
and serious side effects
3. Introduction
• The RSV belongs to the
Pneumovirus gender, from the
family Paramyxoviridae.
• It has a single-stranded genome of
negative sense RNA.
RNA polymerase
Large
polymerase
protein
Phosphoprotein
(P)
• RNA
polymerization.
• mRNA cap
addition.
• Cap methylation.
Taken from: https://www.bmj.com/content/366/bmj.l5021
4. General objective
• “The aim of this study was to
investigate what primer
modifications and nucleotide
analogs could be accepted by
the RSV RNA polymerase”
5. Materiales y métodos: RNA recombinante del
RSV
Definición
• Es una molécula de RNA artificial
creada in vitro al unirle un
fragmento de RNA exógeno.
Para qué se usó
• Para lograr formar el complejo de la
RSV polimerasa para potenciar su
acción y poderla evaluar.
Tomado de :
https://www.google.com.co/search?q=rna+recombination&tbm=isch&ved=2ahUKEwj3vamr1tPnAhWLnlMKHbouBqEQ2-
cCegQIABAA&oq=RNA+rec&gs_l=img.1.0.0i19l2j0i8i30i19.278570.280273..282644...1.0..0.346.1312.0j5j1j1......0....1..gws-
wiz-img.....10..35i362i39j35i39j0j0i67j0i10j0i30.LrledQ94WRg&ei=pPNHXvfbBIu9zgK63ZiICg&bih=751&biw=1536&hl=es-
419#imgrc=4PYAYYpuuYXSfM
6. Materiales y métodos: Elongación
Definición
Proceso dentro de la transcripción
en el cual después de ubicarse la
RNA polimerasa en el sitio
promotor se inicia la
incorporación de rNTP y se forman
enlaces fosfodiester.
Para qué se realizó
Para cuantificar la habilidad de los
nucleótidos análogos y los primer
para realizar este proceso. Se
utilizó: el molde de RNA, el primer,
el NTP nativo o análogo y un
nucleótido marcador.
7. Materiales y métodos:Autorradiografía
Definición
• Proceso por el cual se sustituyen
átomos por complejos
radioactivos como el H3 o I, de
esta manera se interrumpe los
procesos biológicos y se fija, así
la partícula queda con el isótopo
radioactivo y se puede leer con
una película de fotografía.
Tomado de :https://campus.usal.es/~histologia/histotec/especial/espe17/espe17.htm
¿Para qué se uso?
• Para observar los productos de
las reacciones de elongación.
https://www.google.com.co/search?q=au
torradiograf%C3%ADa+biologia+molecula
r&tbm=isch&ved=2ahUKEwiR7OWjldTnA
hUH0FMKHddzBgMQ2-
cCegQIABAA&oq=autor+biologia+molecul
ar&gs_l=img.1.0.0i7i30.1012770.1017280.
.1019220...3.0..0.169.1046.0j7......0....1..g
ws-wiz-
img.......0i7i5i30j0i8i7i30.jwygWvvulJA&ei
=ozVIXtGOLIegzwLX55kY&bih=751&biw=1
536#imgrc=ZNERHz17nf3USM&imgdii=ujd
MQu1qF84N0M
8. Materiales y métodos: Oligonucleótidos
Definición
• Es un fragamento de DNA o RNA
que presenta una alta densidad
en una superficie pequeña. Son
solo de 13 a 25 nucleótidos.
Tomado de:https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-an-
Oligonucleotide-(Spanish).aspx
¿Para qué se usó?
Ya que resultaba imposible purificar
un molde de N-RNA, los
oligonucleótidos sirvieron como
molde donde se incubó el complejo
RSV L-P para llevar a cabo la síntesis
del RSV RNA.
https://www.google.com.co/search?q=oligonucleotido&hl=es-
419&sxsrf=ACYBGNQHSKd886WfyUQKsbptquRS_WDsdg:15817929216
59&source=lnms&tbm=isch&sa=X&ved=2ahUKEwiIptDpndTnAhXws1k
KHTCPC2YQ_AUoAnoECBMQBA&biw=1536&bih=751#imgrc=Ir8wbVHB
KG9qfM
9. Resultados: Figura 1 B
Mutante
Salvaje
Se muestra la presencia de un marcador
del peso molecular en la primera columna
y las siguientes son dos formas de RSV en
los que ambos muestran la presencia de
banda L y P
10. Resultados: figura 2 A y B
4
5
8
Capacidad de elongar sin necesidad de
un promotor
La polimerasa elonga con primers de
corta longitud un molde artificial de
RNA.
11. Resultados: figura 3 B y 4 B
Adición al primer de moléculas con peso.
Hay que tener en cuenta lo hidrofílicas y
la estructura.
ALS-8112: inhibidor de la RSV polimerasa.
12. Resultados: Figura 5 B y C
Sin primer no hay
elongación
La polimerasa no actúa
como promotor inherente.
El UTP ethynyl fue la
modificación de
nucleótido que mejor
tolerancia mostró.
13. Discussion
Author Mencioned by the author Yes or No
Cressey et al., 2018; Noton et al.,
2012; Tremaglioetal.,2013
“In its native state, the RSV
polymerase does not use a primer
to initiate RNA synthesis”
Tchesnokov et al., 2018
“It was recently reported that a
5′phosphate group on the ACGC
primer was essential for templated
primer elongation on an 11-mer
template derived from the RSV
genomic promoter”
RehaKrantzetal.,2011
The polymerase could incorporate
the intrinsically fluorescent purine
analog 2-aminoPTP in place of ATP
but not in place of GTP even though
research with DNA polymerases has
shown that 2-aminopurine is able
to pair with cytidine
14. Conclusions
The study of the functioning of the
polymerase of the RSV shows a
development in the
understanding of the ways that
this virus Works, this is an
essencial point for posible future
treatments.
The RSV´s polymerase
elongation process study
demonstrated that primers are
requiered (even the ones that
have bulky chains), also a
polymerase without mutation
and that this protein
(polymerase)can accept
different nucleotide analogs, but
always conserving the law about
the complementary bases.
