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SECUENCIACIÓN  IT´S A LITLE BITE COMPLICATED TO SEQUENCE ME 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
5’ 3’ ||||||||||||||| 3’ ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Las Cadenas  Polinucleotídicas crecen por Adición de nucleótidos al  Extremo 3´ OH FUNDAMENTO  29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Dideoxy Sequencing Fred Sanger - 1977 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
5’ 3’ ||||||||||||||| ddATP DNA dNTPs ddTTP DNA dNTPs ddGTP DNA dNTPs ddCTP DNA dNTPs A T C A T G T C A T C A A G T C T A G C A C  T  A T A G T  A T A G T A C  A T A G T A C A G T  A T A G T A C A G T A G T T C  A T A G T A C A G T A G T T C A G  A ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
SECUENCIACION DEL DNA METODO ENZIMATICO   29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
5’ 3’ ||||||||||||||| A T C A T G T C A T C A A G T C T A G C A C  A T G C TAGTACAGTAGTTCAGATCGTG  fragmentos largos fragmentos cortos 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
graphics taken from Cold Spring Harbor Laboratory web site: darwin.cshl.org/shockan.html migración 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
González,2007 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
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SORPRESA No. 1 S ó lo 2% del genoma son genes.  Gen 1 Gen 2 98% del genoma 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Somos casi idénticos (2% de  diferencia) a los chimpancés.  SORPRESA No. 2 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Hay sólo 0,1% de variación genética entre todos los seres humanos.  SORPRESA No. 3 Pero 0,1% de 3.000.000.000 bases = 3.000.000 bases 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
La propiedad mas importante del DNA es su secuencia de nucleótidos. La secuenciación es la determinación del orden de los nucleótidos. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Secuenciación por el método de Maxam-Gilbert ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Métodos de terminación de la cadena (sanger) ,[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
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29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
DNA SEQUENCING..IDEOS DE BIOMOLNA Sequencing  Animation.rm  ANIMATION 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Secuenciación por terminador fluorescente   ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Automatización y preparación de las muestras ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Tutorial  sequencing 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
TECNOLOGíA DE MICROARRAYS DE cDNAS CHIPs de DNA ,[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Tipos de arrays ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Confección del array 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Confección de arrays MICROARRAYS Siembra 0,25-1 nL/spot generando spots de 100-150   m de diametro. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Confección de arrays 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Figure 3: Atomic force microscopy of DNA on a microarray. This is a micrograph of a portion of a hybridization probe from a yeast microarray, taken after the array was subjected to hybridization. The DNA is clearly deposited at a sufficient density to allow many kinds of strand–to–strand interactions. The width of the picture represents a scanned distance of 2 m. Image kindly provided by J. DeRisi (Stanford) and E. Carr (Hewlett–Packard).  Confección de arrays 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Robot sembrador Siembra 7 nL/spot generando spots de 400-800   m de diametro. Confección de arrays Macroarrays 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 Colección de genes blanco: DNA’s o  Productos de PCR Membrana de nylon
Hibridación en microarrays Cy5 Cy3 Cy5 = 633 nm Cy3 = 532 nm Expresión de 1 > 2 2 1 Expresión de 1 = 2 Expresión de 1 < 2 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Microarray de levadura 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
El nivel de expresión de cada gen es representado por la intensidad de la señal asociada a un color: Rojo (Cy5) = > expresión en la muestra experimental Verde (Cy3) = < expresión en la muestra experimental  Por convención el RNA de referencia es marcado con Cy3 . 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
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HIBRIDACIÓN DEL DNA ,[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
¿Cómo se mantienen unidas las dos hebras? ,[object Object],[object Object],[object Object],HIBRIDACION DE ACIDOS NUCLEICOS 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
FACTORES QUE AFECTAN LA ESTABILIDAD DE LA HIBRIDACION ENTRE ACIDOS NUCLEICOS ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],FACTORES QUE AFECTAN LA ESTABILIDAD DE LA HIBRIDACION ENTRE ACIDOS NUCLEICOS 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],FACTORES QUE AFECTAN LA ESTABILIDAD DE LA HIBRIDACION ENTRE ACIDOS NUCLEICOS 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],FACTORES QUE AFECTAN LA ESTABILIDAD DE LA HIBRIDACION ENTRE ACIDOS NUCLEICOS 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
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[object Object],[object Object],[object Object],FACTORES QUE AFECTAN LA ESTABILIDAD DE LA HIBRIDACION ENTRE ACIDOS NUCLEICOS 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],FACTORES QUE AFECTAN LA ESTABILIDAD DE LA HIBRIDACION ENTRE ACIDOS NUCLEICOS 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
El efecto combinado de estos factores puede ser expresado en una ecuación para el calculo de la Tm ,[object Object],[object Object],[object Object],50% 5’ - - - - - - - - - - -3’ 3’ - - - - - - - - - -  5’ 50% 5’  - - - - - - - - - - 3’ 3’ - - - - - - - - - - -5’ 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
El efecto combinado de estos factores puede ser expresado en una ecuación para el calculo de la Tm Tm = 81,5 ºC + 16,6log[Na] + 41(%G+C) - 0,63(%formamida) - (500/L) Tm = 79,8 ºC + 18,5log[Na] + 58,4(%G+C) + 11,8(%G+C) 2  - 0,5(%formamida) - (820/L) Para DNA:DNA  Para DNA:RNA  Para oligonucleotidos en 1 M Na+  Tm ( o C) = 4 (G+C) + 2 (A+T) IMPORTANTE 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],ESPECIE BACTERIANA   ,[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 ,[object Object],[object Object],[object Object]
T m : punto medio del perfil de desnaturalización térmica de ADN-ADN o de ADN-ARN Aumento de absorbancia del ADN a 260nm por desnaturalizacion 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 Longitud de onda (nm) ADN  simple hebra ADN doble hebra Absorbancia 220 260 300 Abs. relativa 260 nm 80 90 100 temperatura (ºC) T m  = 86ºC ADN doble hebra ADN simple hebra desnaturalización
Ensayo de reasociación de ADN-ADN para cepas a y b 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
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Experimento Meselson y Stahl DUPLICACIÓN  DEL ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Experimento Meselson y Stahl DUPLICACIÓN  DEL ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Hebra molde Hebra líder Hebra retardada EL ADN es la molécula que permite perpetuar la vida: REPLICACIÓN DEL ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Replicación ,[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
ADN polimerasas, ligasas…. ,[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Proteinas principales replicación ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
La ADN polimerasa  29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Síntesis del primer de ARN por una primasa 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
En eucariontes los fragmentos  de Okasaki tienen 200 nucleótidos,  los primers unos 10. Los iniciadores de ARN se  eliminan mediante una ARNasa específica que reconoce dobles  hélices híbridas ARN-ADN La laguna es llenada por una  polimerasa y la unión finalmente  es realizada por una ligasa 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
La ligasa acopla la hidrólisis de un ATP para hacer  más favorable la reacción de unión entre el fosfato y el hidroxilo libre, liberando al final un AMP. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Efecto de las proteínas de enlace con la hebra sencilla del ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Estructura de las proteinas de enlace a la hebra sencilla Modelo de la proteína humana 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
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MECANISMO DE REPLICACIÓN DEL ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
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3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ La replicación en un ojo de replicación primer ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
A  T  C  G  A  A  C  C  G  T  T  G  C  A  C  C  G  T  T  G  C  A  C  Síntesis continua de la cadena 5’ -3’ Síntesis continua de la cadena en dirección 5'  3'.  La síntesis de esta cadena no plantea ningún problema. Así, una vez separadas ambas cadenas, se sintetiza el  primer  y la ADN pol. III (una de las enzimas que unen los nucleótidos) va a elongar la cadena en dirección 5'  3'. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 U A G C T T G G C A A C G T G
A  T  C  G  A  A  C  C  G  T  T  G  C  A  C  C  G  T  T  G  C  Síntesis discontinua de la cadena 3’ -5’ Síntesis discontinua.  La cadena complementaria no se va a replicar en sentido 3'  5' sino que se replica  discontinuamente  en dirección 5'  3'. Primero se sintetiza el  primer ( ARN) y posteriormente este se elonga con ADN. El ARN es posteriormente eliminado y los diferentes fragmentos sintetizados, llamados fragmentos de  Okazaki , son unidos entre sí. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 T A G C T U G G C A A C G T G A A C C C G G T
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Tipos de daño al ADN ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Agentes extracelulares ,[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
11_21_2.jpg 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Mecanismos de detección y reparación de daños al ADN ,[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Agentes genotóxicos y Mecanismos de reparación del DNA 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Sistemas de Reparaci ón del DNA 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
PHOTOLYASE ,[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 Esto explica porqué los humanos, los ratones, y otros mamíferos son particularmente vulnerables al cáncer causado por la luz UV de los rayos solares, pero los demás miembros del reino animal, incluyendo insectos, peces, aves, anfibios, marsupiales, e incluso bacterias, virus y levaduras, poseen una capacidad mucho mayor de enmendar el daño.
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Reparaci ón de dímeros de pirimidinas mediante fotoreactivación 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Reparaci ón del DNA: remoción de grupos metilo 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Reparaci ón del DNA: bases mal apareadas 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Metilaci ó n del DNA Metilaci ó n del DNA 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Reparaci ón del DNA durante o después de su replicación 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Sistemas de reparaci ón de DNA: NER (Nucleotide Excision Repair)  29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Mecanismos de reparaci ón de DNA:  BER (Base excision Repair ) 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Enfermedades gen é ticas y sistemas de reparación del DNA  Xeroderma  pigmentosa ,[object Object],Cáncer  hereditario colorectal no poliposo hMSH2 hMLH1 ,[object Object],Reparación  de G:T   29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
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M uerte celular   ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Autoinmunidad SIDA Cáncer Alzheimer Apoptosis fisiológica Defecto Exceso 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Apoptosis y patología ,[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Diferencias entre  apoptosis y necrosis. Apoptosis Necrosis (Oncosis) Programada genéticamente Accidental. Se mantiene Se rompe Disminuye aumenta Se preservan  Se desintegran  Fragmentación del DNA tardía  fragmentos grandes . En cuerpos apoptóticos rodeados por membrana  Son reconocidos y fagocitados  Los contenidos de los orgánulos se liberan Inducen  inflamación local. Membrana. Tamaño celular Orgánulos. Temprana fragmentos  oligonucleosomales Fragmentación celular Restos celulares Mecanismo 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Fases de   l a  apoptosis 1.  Decisión 2.  Ejecución 4.  Degradación  y presentación  antígenos 3.  Fagocitosis Desequilibrio entre factores inductores e inhibidores bcl-2 <bax Temprana: Activación  de proteasas y endonucleasas In termedia: Fragmentación DNA  Tardia: Emisión de  cuerpos apoptóticos Activacion  de receptores Detección  de fosfatidil  Serina (PS) Evita liberación de  componentes  intracelulares inflamación TGF  29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
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conjugación Lederberg y Tatum, 1946 (P. Nobel 1958) 10 8  células 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
tubo en U pasa el medio pasan moléculas no pasan células tubo en U no nutrición cruzada no transformación (1944) 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
pilus pelo F o pelo sexual conjugación proceso unidireccional (Hayes, 1953) donadora o macho receptora o hembra pelos o  fimbrias 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 pareja específica      pareja efectiva
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Factor F factor F o factor de fertilidad 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 inserción  en el  cromosoma replicación transferencia
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a mayor tiempo entran marcadores (genes) nuevos 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
transferencia secuencial y lineal de genes  de Hfr a F- La conjugación es un  proceso de transferencia  de material genético unidireccional  y  orientada 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Barbara McClintock 1902-1992   29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
ELEMENTOS GENÉTICOS TRANSPONIBLE Los elementos genéticos transponibles son segmentos de DNA que tienen la capacidad de moverse desde una localización hasta otra ( ej.  genes saltarines). 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Propiedades de los Elementos Genéticos Transponibles  Movimiento al azar-  Los elementos genéticos transponibles pueden moverse desde cualquier molécula de DNA a cualquier otra molécula de DNA o aún a otro lugar dentro de la misma molécula. El movimiento no es  totalmente al azar; existen sitios preferentes en una molécula de DNA en la cual se insertará el elemento genético transponible. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Incapaz de auto-replicarse – Los elementos genéticos transponibles no existen de manera autónoma (a excepción – algunos genes transponibles en los fagos) y por tanto, para ser replicados deben ser parte de algún otro replicón 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Transposición mediada por recombinación sitio-específica – La transposición requiere poca o ninguna homología entre la localización actual y el nuevo sitio. El evento de transposición está mediado por una  transposasa  codificada por el elemento genético transponible.  29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
La recombinación que no requiere de homología entre las moléculas recombinantes se denomina de  sitio-específico, ilegítima o bien recombinación no-homóloga 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Transposición acompañada por duplicación – En muchas instancias la transposición del elemento genético transponible resulta en la remoción del elemento de su sitio original y su inserción en un nuevo sitio. Sin embargo, en algunos casos el evento de transposición se acompaña de una duplicación del elemento genético transponible. Una copia permanece en el sitio original y la otra se transpone en el nuevo sitio. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Secuencias de Inserción (IS) Las secuencias de inserción son elementos genéticos transponibles que llevan genes desconocidos, con excepción de aquellos que se requieren para la transposición. Nomenclatura  – A las secuencias de inserción ( insertion sequences ) se les da la designación  IS  seguida por un número ( ej : IS1) Las secuencias de inserción son pequeños tramos de DNA que a sus extremos tienen secuencias repetidas que están involucradas en la transposición.  29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
En medio de las secuencias terminales repetidas hay genes involucrados en la transposición y secuencias que pueden controlar la expresión de los genes, pero no presentan otros genes que no sean esenciales. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Importancia Mutación – La introducción de una secuencia de inserción en medio de un gene bacteriano resultará en la inactivación de tal gene. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Inserción de plásmidos en los cromosomas – Los sitios en los cuales los plásmidos se insertan en el cromosoma bacteriano se localizan ya sea en las propias secuencias de inserción o cerca de ellas 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
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Variación de Fase – Los antígenos flagelares son de los principales  antígenos ante los cuales se dirige la respuesta inmune, en nuestro intento de luchar contra la infección bacteriana.  En  Salmonella  existen genes que codifican para dos genes flagelares antigenicamente diferentes. La  expresión de estos genes está regulada por secuencias de inserción. En una orientación, uno de los genes está activo mientras que en la otra orientación el otro gene flagelar estará inactivo. Como resultado  Salmonella  puede cambiar sus flagelos en respuesta al ataque del sistema inmune. La variación de fase en los antígenos flagelares de  Salmonella  no es única. También se ha visto que ocurre con otros antígenos de superficie. Además el mecanismo de la variación de fase puede ser diferente en diversas especies de bacterias ( ej.  transformación en  Neisseria ). 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
APLICACIONES  EN  MEDICINA VETERINARIA 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Peter J. Russell,  iGenetics : Copyright © Pearson Education, Inc., publishing as Benjamin Cummings. El elemento más simple (descubierto inicialmente en el operón  gal  de  E. coli ) 800-1350 pb  Inverted terminal repeats (IRs) 9–41 pb Elementos IS de procariotas 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Integración del elemento IS 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Integración del elemento IS ,[object Object],[object Object],29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Transposones de procariotas Transposón compuesto 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Transposones de procariotas Genes resistencia en plásmidos 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Transposones de procariotas Transposón simple 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],[object Object],Elementos transponibles en  eucariotas 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
[object Object],Clase II:  replicación por enzima transposasa, proceso corte y empalme Elementos transponibles en  eucariotas: Clase II 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Genoma retrovirus Elementos transponibles en  eucariotas: Clase I 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
Elementos transponibles en  eucariotas: Clase I Retrotrasposón 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 LTR LTR gag   pol (retrotranscriptasa)
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  • 1. SECUENCIACIÓN IT´S A LITLE BITE COMPLICATED TO SEQUENCE ME 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 2.
  • 3. Las Cadenas Polinucleotídicas crecen por Adición de nucleótidos al Extremo 3´ OH FUNDAMENTO 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 4. Dideoxy Sequencing Fred Sanger - 1977 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 5.
  • 6. SECUENCIACION DEL DNA METODO ENZIMATICO 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 7. 5’ 3’ ||||||||||||||| A T C A T G T C A T C A A G T C T A G C A C A T G C TAGTACAGTAGTTCAGATCGTG fragmentos largos fragmentos cortos 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 8. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 9. graphics taken from Cold Spring Harbor Laboratory web site: darwin.cshl.org/shockan.html migración 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 10. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 11. González,2007 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 12. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 13. SORPRESA No. 1 S ó lo 2% del genoma son genes. Gen 1 Gen 2 98% del genoma 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 14. Somos casi idénticos (2% de diferencia) a los chimpancés. SORPRESA No. 2 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 15. Hay sólo 0,1% de variación genética entre todos los seres humanos. SORPRESA No. 3 Pero 0,1% de 3.000.000.000 bases = 3.000.000 bases 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 16. La propiedad mas importante del DNA es su secuencia de nucleótidos. La secuenciación es la determinación del orden de los nucleótidos. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 17.
  • 18.
  • 19.
  • 20.
  • 21.
  • 22.
  • 24. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 25. DNA SEQUENCING..IDEOS DE BIOMOLNA Sequencing Animation.rm ANIMATION 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 26.
  • 27.
  • 28. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 29.
  • 30. Tutorial sequencing 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 31.
  • 32. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 33.
  • 34.
  • 35. Confección del array 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 36. Confección de arrays MICROARRAYS Siembra 0,25-1 nL/spot generando spots de 100-150  m de diametro. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 37. Confección de arrays 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 38. Figure 3: Atomic force microscopy of DNA on a microarray. This is a micrograph of a portion of a hybridization probe from a yeast microarray, taken after the array was subjected to hybridization. The DNA is clearly deposited at a sufficient density to allow many kinds of strand–to–strand interactions. The width of the picture represents a scanned distance of 2 m. Image kindly provided by J. DeRisi (Stanford) and E. Carr (Hewlett–Packard). Confección de arrays 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 39. Robot sembrador Siembra 7 nL/spot generando spots de 400-800  m de diametro. Confección de arrays Macroarrays 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 Colección de genes blanco: DNA’s o Productos de PCR Membrana de nylon
  • 40. Hibridación en microarrays Cy5 Cy3 Cy5 = 633 nm Cy3 = 532 nm Expresión de 1 > 2 2 1 Expresión de 1 = 2 Expresión de 1 < 2 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 41. Microarray de levadura 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 42. El nivel de expresión de cada gen es representado por la intensidad de la señal asociada a un color: Rojo (Cy5) = > expresión en la muestra experimental Verde (Cy3) = < expresión en la muestra experimental Por convención el RNA de referencia es marcado con Cy3 . 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 43. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 44. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 45.
  • 46.
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  • 48.
  • 49.
  • 50.
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  • 52.
  • 53.
  • 54.
  • 55. El efecto combinado de estos factores puede ser expresado en una ecuación para el calculo de la Tm Tm = 81,5 ºC + 16,6log[Na] + 41(%G+C) - 0,63(%formamida) - (500/L) Tm = 79,8 ºC + 18,5log[Na] + 58,4(%G+C) + 11,8(%G+C) 2 - 0,5(%formamida) - (820/L) Para DNA:DNA Para DNA:RNA Para oligonucleotidos en 1 M Na+ Tm ( o C) = 4 (G+C) + 2 (A+T) IMPORTANTE 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 56.
  • 57.
  • 58. T m : punto medio del perfil de desnaturalización térmica de ADN-ADN o de ADN-ARN Aumento de absorbancia del ADN a 260nm por desnaturalizacion 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 Longitud de onda (nm) ADN simple hebra ADN doble hebra Absorbancia 220 260 300 Abs. relativa 260 nm 80 90 100 temperatura (ºC) T m = 86ºC ADN doble hebra ADN simple hebra desnaturalización
  • 59. Ensayo de reasociación de ADN-ADN para cepas a y b 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 60. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 61. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 62. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 63. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 64. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 65. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 66. Experimento Meselson y Stahl DUPLICACIÓN DEL ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 67. Experimento Meselson y Stahl DUPLICACIÓN DEL ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 68. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 69. Hebra molde Hebra líder Hebra retardada EL ADN es la molécula que permite perpetuar la vida: REPLICACIÓN DEL ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 70.
  • 71. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 72.
  • 73.
  • 74. La ADN polimerasa 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 75. Síntesis del primer de ARN por una primasa 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 76. En eucariontes los fragmentos de Okasaki tienen 200 nucleótidos, los primers unos 10. Los iniciadores de ARN se eliminan mediante una ARNasa específica que reconoce dobles hélices híbridas ARN-ADN La laguna es llenada por una polimerasa y la unión finalmente es realizada por una ligasa 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 77. La ligasa acopla la hidrólisis de un ATP para hacer más favorable la reacción de unión entre el fosfato y el hidroxilo libre, liberando al final un AMP. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 78. Efecto de las proteínas de enlace con la hebra sencilla del ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 79. Estructura de las proteinas de enlace a la hebra sencilla Modelo de la proteína humana 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 80. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 81. MECANISMO DE REPLICACIÓN DEL ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 82. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 83. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 84. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 85. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 86. 3’ 3’ 5’ 5’ 3’ 5’ 3’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ La replicación en un ojo de replicación primer ADN 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 87. A T C G A A C C G T T G C A C C G T T G C A C Síntesis continua de la cadena 5’ -3’ Síntesis continua de la cadena en dirección 5'  3'. La síntesis de esta cadena no plantea ningún problema. Así, una vez separadas ambas cadenas, se sintetiza el primer y la ADN pol. III (una de las enzimas que unen los nucleótidos) va a elongar la cadena en dirección 5'  3'. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 U A G C T T G G C A A C G T G
  • 88. A T C G A A C C G T T G C A C C G T T G C Síntesis discontinua de la cadena 3’ -5’ Síntesis discontinua. La cadena complementaria no se va a replicar en sentido 3'  5' sino que se replica discontinuamente en dirección 5'  3'. Primero se sintetiza el primer ( ARN) y posteriormente este se elonga con ADN. El ARN es posteriormente eliminado y los diferentes fragmentos sintetizados, llamados fragmentos de Okazaki , son unidos entre sí. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 T A G C T U G G C A A C G T G A A C C C G G T
  • 89. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 90.
  • 91.
  • 92. 11_21_2.jpg 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 93.
  • 94. Agentes genotóxicos y Mecanismos de reparación del DNA 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 95. Sistemas de Reparaci ón del DNA 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 96.
  • 97.
  • 98. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 Esto explica porqué los humanos, los ratones, y otros mamíferos son particularmente vulnerables al cáncer causado por la luz UV de los rayos solares, pero los demás miembros del reino animal, incluyendo insectos, peces, aves, anfibios, marsupiales, e incluso bacterias, virus y levaduras, poseen una capacidad mucho mayor de enmendar el daño.
  • 99. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 100. Reparaci ón de dímeros de pirimidinas mediante fotoreactivación 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 101. Reparaci ón del DNA: remoción de grupos metilo 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 102. Reparaci ón del DNA: bases mal apareadas 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 103. Metilaci ó n del DNA Metilaci ó n del DNA 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 104. Reparaci ón del DNA durante o después de su replicación 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 105. Sistemas de reparaci ón de DNA: NER (Nucleotide Excision Repair) 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 106. Mecanismos de reparaci ón de DNA: BER (Base excision Repair ) 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 107.
  • 108. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 109.
  • 110. Autoinmunidad SIDA Cáncer Alzheimer Apoptosis fisiológica Defecto Exceso 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 111.
  • 112. Diferencias entre apoptosis y necrosis. Apoptosis Necrosis (Oncosis) Programada genéticamente Accidental. Se mantiene Se rompe Disminuye aumenta Se preservan Se desintegran Fragmentación del DNA tardía fragmentos grandes . En cuerpos apoptóticos rodeados por membrana Son reconocidos y fagocitados Los contenidos de los orgánulos se liberan Inducen inflamación local. Membrana. Tamaño celular Orgánulos. Temprana fragmentos oligonucleosomales Fragmentación celular Restos celulares Mecanismo 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 113. Fases de l a apoptosis 1. Decisión 2. Ejecución 4. Degradación y presentación antígenos 3. Fagocitosis Desequilibrio entre factores inductores e inhibidores bcl-2 <bax Temprana: Activación de proteasas y endonucleasas In termedia: Fragmentación DNA Tardia: Emisión de cuerpos apoptóticos Activacion de receptores Detección de fosfatidil Serina (PS) Evita liberación de componentes intracelulares inflamación TGF  29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 114. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 115. conjugación Lederberg y Tatum, 1946 (P. Nobel 1958) 10 8 células 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 116. tubo en U pasa el medio pasan moléculas no pasan células tubo en U no nutrición cruzada no transformación (1944) 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 117. pilus pelo F o pelo sexual conjugación proceso unidireccional (Hayes, 1953) donadora o macho receptora o hembra pelos o fimbrias 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 118. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 119. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 120. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 pareja específica pareja efectiva
  • 121.
  • 122. Factor F factor F o factor de fertilidad 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 inserción en el cromosoma replicación transferencia
  • 123. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 124. a mayor tiempo entran marcadores (genes) nuevos 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 125. transferencia secuencial y lineal de genes de Hfr a F- La conjugación es un proceso de transferencia de material genético unidireccional y orientada 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 126. Barbara McClintock 1902-1992 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 127. ELEMENTOS GENÉTICOS TRANSPONIBLE Los elementos genéticos transponibles son segmentos de DNA que tienen la capacidad de moverse desde una localización hasta otra ( ej. genes saltarines). 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 128. Propiedades de los Elementos Genéticos Transponibles Movimiento al azar- Los elementos genéticos transponibles pueden moverse desde cualquier molécula de DNA a cualquier otra molécula de DNA o aún a otro lugar dentro de la misma molécula. El movimiento no es  totalmente al azar; existen sitios preferentes en una molécula de DNA en la cual se insertará el elemento genético transponible. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 129. Incapaz de auto-replicarse – Los elementos genéticos transponibles no existen de manera autónoma (a excepción – algunos genes transponibles en los fagos) y por tanto, para ser replicados deben ser parte de algún otro replicón 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 130. Transposición mediada por recombinación sitio-específica – La transposición requiere poca o ninguna homología entre la localización actual y el nuevo sitio. El evento de transposición está mediado por una transposasa codificada por el elemento genético transponible. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 131. La recombinación que no requiere de homología entre las moléculas recombinantes se denomina de sitio-específico, ilegítima o bien recombinación no-homóloga 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 132. Transposición acompañada por duplicación – En muchas instancias la transposición del elemento genético transponible resulta en la remoción del elemento de su sitio original y su inserción en un nuevo sitio. Sin embargo, en algunos casos el evento de transposición se acompaña de una duplicación del elemento genético transponible. Una copia permanece en el sitio original y la otra se transpone en el nuevo sitio. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 133. Secuencias de Inserción (IS) Las secuencias de inserción son elementos genéticos transponibles que llevan genes desconocidos, con excepción de aquellos que se requieren para la transposición. Nomenclatura – A las secuencias de inserción ( insertion sequences ) se les da la designación IS seguida por un número ( ej : IS1) Las secuencias de inserción son pequeños tramos de DNA que a sus extremos tienen secuencias repetidas que están involucradas en la transposición. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 134. En medio de las secuencias terminales repetidas hay genes involucrados en la transposición y secuencias que pueden controlar la expresión de los genes, pero no presentan otros genes que no sean esenciales. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 135. Importancia Mutación – La introducción de una secuencia de inserción en medio de un gene bacteriano resultará en la inactivación de tal gene. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 136. Inserción de plásmidos en los cromosomas – Los sitios en los cuales los plásmidos se insertan en el cromosoma bacteriano se localizan ya sea en las propias secuencias de inserción o cerca de ellas 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 137. 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 138. Variación de Fase – Los antígenos flagelares son de los principales  antígenos ante los cuales se dirige la respuesta inmune, en nuestro intento de luchar contra la infección bacteriana. En Salmonella existen genes que codifican para dos genes flagelares antigenicamente diferentes. La  expresión de estos genes está regulada por secuencias de inserción. En una orientación, uno de los genes está activo mientras que en la otra orientación el otro gene flagelar estará inactivo. Como resultado Salmonella puede cambiar sus flagelos en respuesta al ataque del sistema inmune. La variación de fase en los antígenos flagelares de Salmonella no es única. También se ha visto que ocurre con otros antígenos de superficie. Además el mecanismo de la variación de fase puede ser diferente en diversas especies de bacterias ( ej. transformación en Neisseria ). 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 139. APLICACIONES EN MEDICINA VETERINARIA 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 140. Peter J. Russell, iGenetics : Copyright © Pearson Education, Inc., publishing as Benjamin Cummings. El elemento más simple (descubierto inicialmente en el operón gal de E. coli ) 800-1350 pb Inverted terminal repeats (IRs) 9–41 pb Elementos IS de procariotas 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 141. Integración del elemento IS 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 142.
  • 143. Transposones de procariotas Transposón compuesto 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 144. Transposones de procariotas Genes resistencia en plásmidos 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 145. Transposones de procariotas Transposón simple 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 146.
  • 147.
  • 148. Genoma retrovirus Elementos transponibles en eucariotas: Clase I 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 149. Elementos transponibles en eucariotas: Clase I Retrotrasposón 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010 LTR LTR gag pol (retrotranscriptasa)
  • 150. Elementos transponibles en eucariotas: Clase I Retrotrasposición 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 151. Retrotrasposón Elementos transponibles en eucariotas 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 152. El genoma dinámico: los elementos transponibles son el principal componente de los genomas grandes de eucariotas 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 153. Elementos Efectos fenotípicos y genotípicos de la transposición Disgénesis híbrida en Drosophila 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 154.
  • 155. Elementos móviles 29/04/10 Dr. Giovanni Gonzalez DMV/BIOMOL/2010
  • 156.
  • 157.
  • 158.
  • 159.
  • 160.

Hinweis der Redaktion

  1. Xeroderma pigmentosa:alteracion de la pigemtacion y piel apergaminada.. Desarrollo de cancer de piel con alta frecuencia. Hasta ahora identificados 8 genes implicados en la repacion de los dimeros de pirimidinas.
  2. quiescencia o dormancia son procesos reversibles. Modo de muerte celular activo en el que la célula ejecuta un programa de defunción siguiendo unos pasos característicos . Es sinónimo de : muerte celular fisiológica y muerte celular por suicidio . Existen otros procesos de muerte programada atípica distintos de la apoptosis . Sentido biologico muerte celular higienica.
  3. La apoptosis disminuida puede provocar patologías de acumulación celular, mientras que su exceso se implica en otras de carácter degenerativo o de disminución celular. Las primeras incluyen a las Neoplasias , las Enfermedades autoinmunes y aquellas enfermedades infecciosas provocadas por patógenos que inhiben la apoptosis de las células que infectan. Las segundas incluyen : El daño hepático provocado por la respuesta inmune a los virus de la hepatitis. La deplección linfocitaria inducida por agentes infecciosos como el virus de la inmunodeficiencia humana y el Tripanosoma cruzi. Las enfermedades neurodegenerativas como la de Alzheimer, Parkinson, esclerosis lateral amiotrófica, retinitis pigmentosa y la atrofia muscular espinal. También se han relacionado con aumento de la apoptosis diversas enfermedades hematológicas como el síndrome mielodisplásico y la anemia aplásica , ciertas inmunodeficiencias primarias , el daño tisular secundario a isquemia , además de otras procesos degenerativos del sistema músculo-esquelético como la osteoporosis y la artrosis .
  4. Biologia celular la cadena Procesos biológicos asociados a la apoptosis Cambios en la morfología celular. Estructura y función de transporte de la membrana plasmática. Función de orgánulos celulares Degradación del DNA
  5. tema 25
  6. tema 25 http://nobelprize.org/medicine/laureates/1958/index.html ¿Hay recombinaci ón (sexo) en bacterias? Figure: 09-03. Genetic Recombination of Two Auxotrophs Genetic recombination of two auxotrophic strains producing prototrophs. Neither auxotroph grows on minimal medium, but prototrophs do, suggesting that genetic recombination has occurred.
  7. tema 25 La conjugaci ón requiere contacto entre las bacterias Figure: 09-04. Davis Experiment When strain A and B auxotrophs are grown in a common medium but separated by a filter, as in this Davis U-tube apparatus, no genetic recombination occurs and no prototrophs are produced.
  8. tema 25 No es un proceso sexual convencional: dos gametos (n) formen un cigoto (2n) Conjugaci ó n: transferencia unidireccional orientada Hayes: mata un tipo celular antes de la mezcla. Si el receptor esta vivo, hay recombinantes!
  9. tema 25 Conjugaci ó n: transferencia unidireccional orientada
  10. tema 25
  11. tema 25 a) pareja espec í fica; b) pareja efectiva
  12. tema 25
  13. tema 25 Unos 100 genes Transferencia (unos 22 genes): formación de los pili, origen de transferencia, corte del DNA, regulación del proceso
  14. tema 25
  15. tema 25
  16. tema 25 Cromosoma se establece como una estructura lineal y circular!