O PCR-SSP é uma técnica de genotipagem que utiliza iniciadores específicos para determinar polimorfismos genéticos, principalmente antígenos HLA importantes para transplantes. O processo envolve amplificar amostras de DNA em tubos contendo primers específicos para alelos, permitindo identificar quais estão presentes após eletroforese em gel. A técnica possui vantagens como diagnóstico precoce e teste de múltiplos polimorfismos, mas também desvantagens como baixa resolução e custos elevados

1. PCR-SSP
Acadêmicos:
Bruna Campos, Hortência Gomes, Rebeca Furtado, Yuri Guedes
Professora orientadora:
Cláudia Penaforte
Centro Universitário de Belo Horizonte – UNIBH
Faculdade de Medicina
Disciplina: Biologia Molecular

2. O que é?
• O PCR-SSP é uma abordagem de genotipagem de DNA com base na
utilização de sequências específicas (SSP);
• Consiste de múltiplos iniciadores de PCR específicos para diferentes
polimorfismos genéticos. Exemplo: HLA;
• Várias PCRs são preparadas para cada amostra e os produtos de
amplificação específicos serão produzidos se os iniciadores são
complementares ao DNA da amostra.
Disponível em: <https://www.abbottmolecular.com/technologies/ssp.html>

3. Material Utilizado
• DNA
• Tampão
• dNTP
• MgCl2
• Primer "específico"
• Taq polimerase
• Termociclador
• Gel de agarose (para correr a eletroforese)
Disponível em: <http://www.jbn.org.br/audiencia_pdf.asp?aid2=777&nomeArquivo=19-04-06.pdf>

4. Aplicação
• Análise de polimorfismos únicos de nucleotídeos (SNPs);
• Principalmente para determinar antígenos HLA (que são altamente
polimórficos);
• Teste de compatibilidade entre doadores e receptores em transplantes;
• Farmacogenética;
• Diagnóstico de doenças.
Disponível em: <http://www.jbn.org.br/audiencia_pdf.asp?aid2=777&nomeArquivo=19-04-06.pdf>

5. HLA
• Sistema do HLA  Antígenos HLA;
• Importância no estudo da rejeição de órgãos;
• Defesa imunológica;
• Existem várias proteínas do sistema imune que estão associadas ao HLA:
MHC-I, MHC-II, Citocinas, Interleucinas, Interferons.
Disponível em: <http://www.jbn.org.br/audiencia_pdf.asp?aid2=777&nomeArquivo=19-04-06.pdf>

6. Processo PCR-SSP
• Colocar o DNA em diferentes tubos contendo dois primers PCR;
• Um dos primers hibridiza uma região conservada do locus HLA, sendo adicionado a
todos os tubos;
• O segundo primer hibridiza com uma região polimórfica do locus HLA;
*cada tubo contem um primer de especificidade diferente.
• A amplificação do DNA só será observada no tubo contendo o segundo primer
específico que corresponde ao alelo (alta resolução) ou ao grupo de alelos (baixa
resolução) do HLA na amostra do DNA;
• Eletroforese em gel de agarose.
Disponível em: <http://www.grupouninter.com.br/revistasaude/index.php/saudeDesenvolvimento/article/view/220>

7. Disponível em: <http://www.slideshare.net/jmgrigg/organ-transplantation-and-the-hla-system-lecture-28091691>

8. Disponível em: <http://www.slideshare.net/jmgrigg/organ-transplantation-and-the-hla-system-lecture-28091691>

9. Disponível em: <http://www.slideshare.net/jmgrigg/organ-transplantation-and-the-hla-system-lecture-28091691>

10. Disponível em: <http://www.slideshare.net/jmgrigg/organ-transplantation-and-the-hla-system-lecture-28091691>

11. Vantagens
• Diagnóstico precoce de doenças;
• Em um único teste, mais de um polimorfismo pode ser identificado;
• Mais eficiente que o teste de sorologia;
• Fácil e rápida execução.
Disponível em: <www.scielo.br/pdf/rbhh/v31n4/aop5509.pdf>

12. Desvantagens
• Baixa resolução (grupos de alelos);
• Contaminação;
• Uso do gel de agarose limita o tamanho do fragmento;
• Requer habilidade técnica;
• Alto custo do equipamento.
Disponível em: <http://www.moreirajr.com.br/revistas.asp?fase=r003&id_materia=4499>

13. Referências
• https://www.abbottmolecular.com/technologies/ssp.html, acesso em junho, 2015.
• http://www.grupouninter.com.br/revistasaude/index.php/saudeDesenvolvimento/article/view/2
20, acesso em junho, 2015.
• http://www.jbn.org.br/audiencia_pdf.asp?aid2=777&nomeArquivo=19-04-06.pdf, acesso em
junho, 2015.
• http://www.moreirajr.com.br/revistas.asp?fase=r003&id_materia=4499, acesso em junho, 2015.
• http://www.scielo.br/pdf/rbhh/v31n4/aop5509.pdf, acesso em junho, 2015.
• http://www.slideshare.net/jmgrigg/organ-transplantation-and-the-hla-system-lecture-28091691,
acesso em junho, 2015.

14. Agradecemos a atenção!