Online Journals 2905504=Azadbakht
- 1. ﭘﮋوﻫﺸﯽ
ﻣﺠﻠـــــﻪ داﻧﺸـــــﮕﺎه ﻋﻠـــــــﻮم ﭘـﺰﺷﮑـــــــﯽ ﻣــﺎزﻧــــــــﺪران
دوره ﺷﺎﻧﺰدﻫﻢ ﺷﻤﺎره 45 ﻣﻬﺮ و آﺑﺎن ﺳﺎل 5831 )62-12(
اﺳﺘﺨﺮاج، ﺷﻨﺎﺳﺎﯾﯽ و ﺑﺮرﺳﯽ ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ آﻧﺰﯾﻢ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﻣﯿﻮه
Carica papayaازاﯾﺮان
+
ﻫﻮﺷﻨﮓ ﮐﯿﻮاﻧﯽ ).***(Ph.D ).**(Ph.D ﻣﺤﻤﺪﺣﺴﯿﻦ ﻃﺒﺎﯾﯽ آزادﺑﺨﺖ).*(Ph.D ﻣﺤﻤﺪ
ﭼﮑﯿﺪه
ﺳﺎﺑﻘﻪ و ﻫﺪف: ﭘﺎﭘـﺎﺋﯿﻦ ﯾـﮏ آﻧـﺰﯾﻢ ﭘﺮوﺗﺌﻮﻟﯿﺘﯿـﮏ ﺑـﻮده ﮐـﻪ از ﺷـﯿﺮاﺑﻪ ﺧـﺸﮏ و ﺧـﺎﻟﺺ ﺷـﺪه ﻣﯿـﻮه ﺧﺮﺑـﺰه درﺧﺘـﯽ
) (Carica papayaاز ﺧﺎﻧﻮاده Caricaceaeﺑﻪ دﺳﺖ ﻣﯽآﯾﺪ. در ﭘﺰﺷﮑﯽ از ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻫـﻀﻢ ﮐﻨﻨـﺪه و ﺑﺮداﺷـﺘﻦ ﻧـﺴﻮج
ﻓﺎﺳﺪ و ﻣﺮده و در داروﺳﺎزی ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻋﺎﻣﻞ ﭘﺨﺶ ﮐﻨﻨﺪه داروﻫﺎ اﺳﺘﻔﺎده ﻣﯽﺷﻮد. ﺑﯿﺶﺗﺮﯾﻦ ﻣﻘﺪار ﻣﺼﺮف ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ در ﺻـﻨﺎﯾﻊ
ﮔﻮﺷﺖ و ﮐﺎﻟﺒﺎس ﻣﯽﺑﺎﺷﺪ.
ﻣﻮاد و روشﻫﺎ: در اﯾﻦ ﺗﺤﻘﯿﻖ، ﺷﯿﺮاﺑﻪ ﺧﺎم ﻣﯿﻮهﻫﺎی ﮐﺎﻣﻼً رﺷﺪ ﮐﺮده و ﻧﺎرس درﺧﺖ ﺧﺮﺑﺰه درﺧﺘﯽ از ﻧﺎﺣﯿﻪ ﺳﺮﺑﺎز
ﺳﯿﺴﺘﺎن و ﺑﻠﻮﭼﺴﺘﺎن ﺟﻤﻊآوری ﺷﺪ. ﺑﺮای ﺟﻤﻊآوری ﺷﯿﺮاﺑﻪ ﮔﯿﺎه، ﺑﺎ ﭼﺎﻗﻮ ﭼﻨﺪﯾﻦ ﺑﺮش روی ﻣﯿﻮه اﯾﺠﺎد ﮐﺮده )ﻋﻤﻖ ﺑﺮش
ﺑﺴﯿﺎر ﻣﻬﻢ اﺳﺖ( ، و ﭘﺲ از ﺟﻤﻊآوری ﺷﯿﺮاﺑﻪ ﺳﻔﯿﺪ رﻧﮓ ﺧﺎرج ﺷﺪه ، در ﺣﺮارت ﻣﺼﻨﻮﻋﯽ ) (30°Cﺧﺸﮏ ﮔﺮدﯾﺪ.
ﺑﻪ ﻣﻨﻈﻮر اﺳﺘﺨﺮاج ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺑﺘﺪا ﻋﺼﺎره ﺗﺎم ﺗﻮﺳﻂ ﯾﮏ ﻣﺎده ﺟﺎذب )ﺧﺎک دﯾﺎﺗﻮﻣﻪ( ﺟﺬب و ﺑﻌﺪ ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﺳﯿﺴﺘﺌﯿﻦ
ﻫﯿﺪروﮐﻠﺮاﯾﺪ، ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ، ﮐﯿﻤﻮ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ و ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦﻫﺎ ﺑﻪ ﺷﮑﻞ ﻣﺤﻠﻮل در آﻣﺪه و ﭘﺲ از ﺻﺎف ﮐﺮدن ﺑﻪ وﺳﯿﻠﻪ ﺑﺎز و رﺳﺎﻧﺪن ﺑﻪ
pHﻣﻨﺎﺳﺐ، ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ رﺳﻮب داده ﺷﺪ. ﺳﭙﺲ ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﺳﻮﻟﻔﺎت آﻣﻮﻧﯿﻮم، ﮐﯿﻤﻮﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ را از ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺟﺪا ﻧﻤﻮده و در ﻧﻬﺎﯾﺖ
ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﺳﺪﯾﻢ ﮐﻠﺮاﯾﺪ، ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از ﻣﺤﻠﻮل رﺳﻮب داده و ﺧﺎﻟﺺﺳﺎزی ﮔﺮدﯾﺪ.
ﺑﺮای ﺷﻨﺎﺳﺎﯾﯽ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از روش اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز و ﺑﺮرﺳﯽ ﻃﯿﻒ IRو ﻣﻘﺎﯾﺴﻪ ﺑﺎ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪ. ﺑﺮای
اﻧﺪازهﮔﯿﺮی ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاج ﺷﺪه از روش USPاﺳﺘﻔﺎده ﮔﺮدﯾﺪ.
ﯾﺎﻓﺘﻪﻫﺎ: در اﯾﻦ ﺗﺤﻘﯿﻖ ، 2/1 ﮔﺮم ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از 001 ﮔﺮم ﺷﯿﺮاﺑﻪ ﺑﻪ دﺳﺖ آﻣﺪ. ﻫﻤﭽﻨﯿﻦ ﻧﺘﺎﯾﺞ ﻧﺸﺎن داده اﺳـﺖ ﮐـﻪ اﻟﮕـﻮی
اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز و ﻃﯿﻒ IRﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاج ﺷﺪه ﻣﺸﺎﺑﻪ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد اﺳﺖ.
اﺳﺘﻨﺘﺎج: ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ ﺑﺮاﺑﺮ 5800U/mgﺑﻮد ﮐﻪ در ﻣﻘﺎﯾﺴﻪ ﺑﺎ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﺑﺎ ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ 6000U/mgدر
ﺣﺪ ﻗﺎﺑﻞ ﻗﺒﻮﻟﯽ اﺳﺖ.
واژه ﻫﺎی ﮐﻠﯿﺪی : ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ، ﮐﺎرﯾﮑﺎ ﭘﺎﭘﺎﯾﺎ، ﺧﺮﺑﺰه درﺧﺘﯽ، آﻧﺰﯾﻢ ﭘﺮوﺗﺌﻮﻟﯿﺘﯿﮏ
* ﻣﺘﺨﺼﺺ ﻓﺎرﻣﺎﮐﻮﮔﻨﻮزی، ﻋﻀﻮ ﻫﯿﺄت ﻋﻠﻤﯽ )داﻧﺸﯿﺎر( ﻣﺮﮐﺰ ﺗﺤﻘﯿﻘﺎت ﻋﻠﻮم داروﯾﯽ و داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ ﻣﺎزﻧﺪران
+
ﺳﺎری : ﮐﯿﻠﻮﻣﺘﺮ 81 ﺟﺎده ﺧﺰر آﺑﺎد- داﻧﺸﮑﺪه ﺑﻬﺪاﺷﺖ
** ﻣﺘﺨﺼﺺ ﻓﺎرﻣﺎﮐﻮﮔﻨﻮزی، ﻋﻀﻮ ﻫﯿﺄت ﻋﻠﻤﯽ )داﻧﺸﯿﺎر( داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ ﻣﺎزﻧﺪران
*** دﮐﺘﺮای داروﺳﺎز
ﺗﺎرﯾﺦ ﺗﺼﻮﯾﺐ : 61/3/58 ﺗﺎرﯾﺦ ارﺟﺎع ﺟﻬﺖ اﺻﻼﺣﺎت : 62/4/48 ﺗﺎرﯾﺦ درﯾﺎﻓﺖ : 21/2/48
دوره ﺷﺎﻧﺰدﻫﻢ ، ﺷﻤﺎره 45 ، ﻣﻬﺮ و آﺑﺎن 5831 ﻣﺠﻠﻪ داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ ﻣﺎزﻧﺪران 12
- 2. ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ آﻧﺰﯾﻢ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ
ﻣﻘﺪﻣﻪ
ﺑﺰودی ﺑﻪ ﺻﻮرت ﺗﻮده ﺳﻔﺘﯽ در ﻣﯽآﯾﺪ. ﺗﻮده ﺳﻔﺖ در ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﯾﮏ آﻧﺰﯾﻢ ﭘﺮوﺗﺌﻮﻟﯿﺘﯿﮏ اﺳﺖ ﮐﻪ از ﺷﯿﺮاﺑﻪ
ﻣﻌﺮض آﻓﺘﺎب و ﯾﺎ ﺣﺮارت ﻣﺼﻨﻮﻋﯽ ﺧﺸﮏ ﻣﯽﮔﺮدد ﻣﯿﻮه ﻧﺎرس ﮔﯿـﺎه ﺧﺮﺑــﺰه درﺧﺘــﯽ ﺑـﺎ ﻧــﺎم ﻋﻠﻤــﯽ
)ﺣﺮارت ﻣﺼﻨﻮﻋﯽ، ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺧﺎم ﺑﺎ درﺟﻪ ﺑﻬﺘﺮی ﺑﺪﺳﺖ . Carica Papaya Lاز ﺧﺎﻧﻮاده Caricaceaeﺑﻪ دﺳﺖ
ﻣﯽدﻫﺪ(. ﺟﻬﺖ اﺳﺘﺨﺮاج و ﺧﺎﻟﺺﺳﺎزی ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از ﻣﯽآﯾﺪ)1(. اﯾﻦ ﮔﯿﺎه درﺧﺘﯽ اﺳﺖ ﻫﻤﯿﺸﻪ ﺳﺒـﺰ ﺑﻪ ارﺗﻔـﺎع
روشﻫﺎی ﻣﺨﺘﻠﻔﯽ اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪه اﺳﺖ ﮐﻪ از ﺟﻤﻠﻪ آﻧﻬﺎ 8 – 6 ﻣﺘﺮ، دارای ﺳﺎﻗﻪﻫﺎی اﺳﻔﻨﺠﯽ ﺑﺎ ﻣﺮﮐﺰ ﺗﻮﺧﺎﻟﯽ، ﺑﺎ
ﺣﻞ ﮐﺮدن ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺧﺎم در آب و رﺳﻮب دادن ﺑﺎ اﻟﮑﻞ، ﭼﻮﺑﯽ ﺻﺎف و ﻧﺮم اﺳﺖ. ﺑﺮگﻫﺎ در اﻧﺘﻬﺎی ﺳﺎﻗﻪ ﻧﻮک
ﺣﻞ ﮐﺮدن در ﻣﺤﻠﻮلﻫﺎی اﺳﯿﺪﻫﺎی آﻣﯿﻨﻪ و رﺳﻮب دادن ﺗﯿﺰ ﻗﺮار دارﻧﺪ و ﻣﺴﺘﻘﯿﻤﺎً ﺑﻪ ﺳﺎﻗﻪ ﻣﺘﺼﻞ ﻫﺴﺘﻨﺪ. ﻣﯿﻮهﻫﺎی
ﺑﺎ اﻣﻼح ﻣﺨﺘﻠﻒ ﻣﯽﺑﺎﺷﺪ)11(. ﻧﺎرس آن ﺳﺒﺰ رﻧﮓ و ﺑﻪ ﻃﻮل ﺣﺪود 30cmﮐﻪ ﻣﺴﺘﻘﯿﻤﺎً
ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺧﺎم دارای ﭼﻨﺪﯾﻦ آﻧﺰﯾﻢ ﻣﯽﺑﺎﺷﺪ وﻟﯽ ﺑﻪ اﻧﺘﻬﺎی ﺳﺎﻗﻪ درﺧﺖ ﭼﺴﺒﯿﺪهاﻧﺪ. ﻣﯿﻮه ﭘﺲ از رﺳﯿﺪن ﺑﻪ
ﻣﻬﻢﺗﺮﯾﻦ آﻧﻬﺎ آﻧﺰﯾﻢﻫﺎی ﭘﺮوﺗﺌﻮﻟﯿﺘﯿﮏ )ﭘﺮوﺗﺌﯿﻨﺎز( ﺷﺎﻣﻞ رﻧﮓ زرد در ﻣﯽآﯾﺪ)3-2(.
ﭘﺎﭘـﺎﺋﯿــﻦ، ﮐﯿﻤـﻮﭘـﺎﭘـﺎﺋﯿــﻦ Aو ، Bﭘـﺮوﺗﺌﯿﻨــﺎز Aو ، B ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﭘﻮدری ﺳﻔﯿﺪ ﯾﺎ ﺳﻔﯿﺪ ﻣﺎﯾﻞ ﺑﻪ زرد دارای
ﭘﺎﭘﺎﯾـﺎ ﭘﭙﺘﯿــﺪاز Aﻣﯽﺑﺎﺷـﺪ. در ﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ ﺧـﺎم ﻋـﻼوه ﺑﺮ وزن ﻣﻮﻟﮑﻮﻟﯽ 000/32 ﮐﻪ از 212 اﺳﯿﺪآﻣﯿﻨﻪ ﺗﺸﮑﯿﻞ
آﻧﺰﯾﻢﻫﺎی ﭘﺮوﺗﺌﻮﻟﯿﺘﯿﮏ، آﻧﺰﯾﻢﻫﺎی دﯾﮕﺮی از ﺟﻤﻠﻪ ﺷﺪه و اﺳﯿﺪﻫﺎی آﻣﯿﻨﻪ ﺑﻪ وﺳﯿﻠﻪ ﺳﻪ ﭘﻞ دیﺳﻮﻟﻔﯿﺪی در
ﮔﻠﯿﮑﻮزﯾﺪازﻫﺎ، ﭘﮑﺘﯿﻦ اﺳﺘﺮازﻫﺎ، ﻟﯿﭙﺎزﻫﺎ و ﻓﺴﻔﺎﺗﺎزﻫﺎ ﻧﯿﺰ ﺳﻪ ﻣﺤﻞ ﺑﻪ ﻫﻢ ﻣﺘﺼﻞ ﺷﺪه و ﯾﮏ ﮔﺮوه ﺳﻮﻟﻔﯿﺪرﯾﻞ آزاد
وﺟﻮد دارﻧﺪ)1،4،8(. ﻧﯿﺰ دارد. ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ در آب و ﮔﻠﯿﺴﯿﺮﯾﻦ ﻣﺤﻠﻮل ﺑﻮده و
از ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺧﺎم،ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺧﺎﻟﺺ وﮐﯿﻤﻮ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦاﺳﺘﺨﺮاج ﻗﺪرت ﺗﺠﺰﯾﻪ ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦ آن ﺑﺴﯿﺎر ﺑﯿﺶﺗﺮ از ﭘﭙﺴﯿﻦ اﺳﺖ.
ﻣﯽﮔﺮدد. از ﮐﯿﻤﻮ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ ﺟﻬﺖ درﻣﺎن ﻓﺘـﻖ دﯾﺴـﮏ 1/0 ﻗﺴﻤﺖ از اﯾﻦ آﻧﺰﯾﻢ ﺗﻮاﻧﺎﯾﯽ ﺣﻞ ﮐﺮدن 002 – 001
ﻣﻬﺮهای ﮐﻤﺮی اﺳﺘﻔﺎده ﻣﯽﮔﺮدد)4(. ﻗﺴﻤﺖ از ﻓﯿﺒﺮﯾﻦ ﻟﺨﺘﻪ ﺷﺪه را دارد)6-4(.
ﻫﺪف اﯾﻦﺗﺤﻘﯿﻖ اﺳﺘﺨﺮاج ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ازﺷﯿﺮه ﻣﯿﻮه ﻧﺎرس از ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﻫﻀﻢﮐﻨﻨﺪه ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦﻫﺎ اﺳﺘﻔﺎده
ﮔﯿﺎه ﺧﺮﺑﺰه درﺧﺘﯽ اﯾﺮاﻧﯽ، ﻫﻤﭽﻨﯿﻦ ﺷﻨﺎﺳﺎﯾﯽ ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﻣﯽﺷﻮد ﭼﻮن ﻓﻌﺎﻟﯿﺘﯽ ﺷﺒﯿﻪ ﺑﻪ ﭘﭙﺴﯿﻦ دارد. ﻫﻤﭽﻨﯿﻦ از آن
ﭘﺮوﺗﺌﻮﻟﯿﺘﯿﮏ آن ﺑﻮده اﺳﺖ. ﺑﺮای ﺟﺪا ﮐﺮدن ﻗﺴﻤﺖ Fabاز Fcاﯾﻤﻨﻮﮔﻠﻮﺑﻮﻟﯿﻦﻫﺎ
اﺳﺘﻔﺎده ﻣﯽﺷﻮد)8-7(. ﻣﺤﻠﻮل ﻣﻮﺿﻌﯽ ﭘﺎﯾﺎﺋﯿﻦ)01 درﺻﺪ(
ﻣﻮاد و روش ﻫﺎ ﺑﺮای درﻣﺎن ﺿﺎﯾﻌﺎت ﭘﻮﺳﺘﯽﻣﺜﻞ دﻣﻞﻫﺎی ﭼﺮﮐﯽ و در از
ﺧﺎک دﯾﺎﺗﻮﻣﻪ )3962 . ،(Artﺳﯿﺴﺘﺌﯿﻦ ﻫﯿﺪروﮐﻠﺮاﯾﺪ ﺑﯿﻦ ﺑﺮدن ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦﻫﺎی رﺳﻮب ﮐﺮده روی ﻟﻨﺰﻫﺎی ﭼﺸﻤﯽ
)9382 . (Artآﻣﻮﻧﯿﻮم ﺳﻮﻟﻔﺎت )6121 . ، (Artﺳﺪﯾﻢ ﺑﮑﺎر ﺑﺮده ﻣﯽﺷﻮد. ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ در ﺻﻨﺎﯾﻊ ﮔﻮﺷﺖ و ﮐﺎﻟﺒﺎس
ﻓﺴﻔﺎت دی ﺑﺎزﯾﮏ، ، EDTAﺗﺮی ﮐﻠﺮواﺳﺘﯿﮏ اﺳﯿﺪ، اﺳﺘﻔﺎده وﺳﯿﻌﯽ دارد. ﻫﻤﭽﻨﯿﻦ در ﺻﻨﺎﯾﻊ دﺑﺎﻏﯽ ﺑﺮای ﺗﻤﯿﺰ
ﺳﯿﺘﺮﯾﮏ اﺳﯿﺪ، ﮐﺎزﺋﯿﻦ ﺳﺪﯾﻢ ﮐﻠﺮاﯾﺪ، ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد و ﮐﺮدن اﺑﺮﯾﺸﻢ و ﭘﺸﻢ ﻗﺒﻞ از ﺧﺸﮏ ﮐﺮدن و ﺑﺮای ﺟﺪا
ﺗﯿﺮوزﯾﻦ ﻫﻤﮕﯽ از ﻧﻮع ﻣﺮک ﺗﻬﯿﻪ ﺷﺪه اﺳﺖ. ﮐﺮدن ﻣﻮﻫﺎ ازﭼﺮم ﻗﺒﻞاز دﺑﺎﻏﯽ اﺳﺘﻔﺎده ﻣﯽﺷﻮد)4،01-9(.
دﺳﺘﮕﺎه ﺷﺎﻣﻞ: IRﻣﺪل 001 – ، Bruker X ﺑﺮای ﺗﻬﯿﻪ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از ﻣﯿﻮه ﺧﺮﺑﺰه درﺧﺘﯽ، ﺷﯿﺎرﻫﺎﯾﯽ
اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز )ژل اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز ﻣﺪل Beckmanو از ﻧﻮع در ﭼﻬﺎر ﺳﻤﺖ ﻣﯿﻮه ﮐﺎﻣﻼً رﺷﺪ ﯾﺎﻓﺘﻪ وﻟﯽ ﻧﺎرس اﯾﺠﺎد
ﭘﻠﯽاﮐﺮﯾﻼﻣﯿﺪ/ ،( SDSاﺳﭙﮑﺘﺮوﻓﺘﻮﻣﺘﺮ ﻣﺪل 0002 Cecil ﻣﯽﺷﻮد. ﺷﯿﺮاﺑﻪ ﭼﻨﺪ ﺛﺎﻧﯿﻪ ﺑﻪ راﺣﺘﯽ ﺟﺎری ﻣﯽﺷﻮد وﻟﯽ
22 دوره ﺷﺎﻧﺰدﻫﻢ ، ﺷﻤﺎره 45 ، ﻣﻬﺮ و آﺑﺎن 5831 ﻣﺠﻠﻪ داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ ﻣﺎزﻧﺪران
- 3. ﻣﺤﻤﺪ آزادﺑﺨﺖ و ﻫﻤﮑﺎران ﭘﮋوﻫﺸﯽ
5/7 – 7 (pHﺣﻞ ﺷﺪه و 04 ﮔﺮم ﺳﺪﯾﻢ ﮐﻠﺮاﯾﺪ ﺑﻪ آن ﺗﻬﯿﻪ ﻧﻤﻮﻧﻪ: در اﯾﻦ ﺗﺤﻘﯿﻖ، ﺑﺎ ﻣﺮاﺟﻌﻪ ﺑﻪ ﻣﻨﻄﻘﻪ ﺳﺮﺑﺎز
اﺿﺎﻓﻪ ﮔﺮدﯾﺪ. ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺑﻪ ﺻﻮرت داﻧﻪﻫﺎی ﺳﻔﯿﺪ رﻧﮓ از ﺷﻬﺮﺳﺘﺎن ﭼﺎه ﺑﻬﺎر در اﺳﺘﺎن ﺳﯿﺴﺘـﺎن و ﺑﻠﻮﭼﺴﺘـﺎن،
رﺳﻮب ﻣﯽﮐﻨﺪ. اﯾﻦ ﺳﻮﺳﭙﺎﻧﺴﯿﻮن ﺑﻪ ﻣﺪت ﯾﮑﺴﺎﻋﺖ در روی ﻣﯿﻮه ﻧﺎرس درﺧﺖ ﺧﺮﺑﺰه درﺧﺘﯽ، ﺑﺎ ﯾﮏ ﭼﺎﻗﻮ در
دﻣﺎی 4°Cﻗﺮار داده ﺷﺪ. و ﺳﭙﺲ ﺑﺎ دور 2500rpmﺑﻪ ﭼﻨﺪ ﺳﻤﺖ ﺑﺎ ﻋﻤﻖ ﻣﻌﯿﻦ ﺑﺮش داده و ﺷﯿﺮاﺑﻪ در ﺷﯿﺸﻪﻫﺎ
ﻣﺪت ﯾﮏ ﺳﺎﻋﺖ ﺳﺎﻧﺘﺮﯾﻔﻮژ ﺷﺪ. رﺳﻮب در 250ml ﺟﻤﻊآوری ﮔﺮدﯾﺪ و در ﺣﺮارت ﻣﺼﻨﻮﻋﯽ) (30°Cﺧﺸﮏ
ﻣﺤﻠﻮل ﺳﯿﺴﺘﺌﯿﻦ ﻫﯿﺪروﮐﻠﺮاﯾﺪ 20/0 ﻣﻮﻻر )5/6 (pH ﺷﺪ. ﻧﺎم ﻋﻠﻤﯽ ﮔﯿﺎه ﺑﺎ ﺗﻮﺟﻪ ﺑﻪ ﻧﻤﻮﻧﻪ ﻫﺮﺑﺎرﯾﻮﻣﯽ و ﺗﻮﺳﻂ
ﺣﻞ ﺷﺪه و ﺑﻪ ﻣﺪت 03 دﻗﯿﻘﻪ در دﻣﺎی اﻃﺎق ﻗﺮار داده ﺑﺨﺶ ﮔﯿﺎهﺷﻨﺎﺳﯽ داﻧﺸﮑﺪه ﻋﻠﻮم ﺷﯿﺮاز ﺗﺎﯾﯿﺪ ﮔﺮدﯾﺪ.
ﺷﺪ. ﮐﺮﯾﺴﺘﺎلﻫﺎی درﺧﺸﻨﺪه ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ در اﯾﻦ ﻣﺪت ﻇﺎﻫﺮ اﺳﺘﺨﺮاج ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ: ﺑﺮای اﺳﺘﺨﺮاج ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از روش
ﺷﺪ ﮐﻪ ﺗﻮﺳﻂ ﺳﺎﻧﺘﺮﯾﻔﻮژ ﺑﺎ دور 2500rpmﺟﺪا ﮔﺮدﯾﺪ. ﮐﯿﻢ١ و اﺳﻤﯿﺖ )4591( ﺑﺎ ﮐﻤـﯽ اﺻﻼﺣـﺎت اﺳﺘﻔـﺎده
ﺷﻨـﺎﺳـﺎﯾـﯽ ﭘﺎﭘـﺎﺋﯿــﻦ: ﺑـﺮای ﺷﻨﺎﺳـﺎﯾــﯽ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿــﻦ از ﮔﺮدﯾﺪ)21(. ﺟﻬﺖ اﺳﺘﺨﺮاج، اﺑﺘﺪا 001 ﮔﺮم ﺷﯿﺮه ﺧﺸﮏ
اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز ﺳﻠﻮﻟﺰ اﺳﺘﺎت، ژل اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز، و ﺗﻬﯿﻪ ﻃﯿﻒ ﺷﺪه ﺑﺎ 55 ﮔﺮم ﺧﺎک دﯾﺎﺗﻮﻣﻪ و 09 ﮔﺮم ﺷﻦ ﺷﺴﺘﻪ ﺷﺪه
IRو ﻣﻘﺎﯾﺴﻪ آﻧﻬﺎ ﺑﺎ ﭘﺎﯾﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد اﺳﺘﻔﺎده ﮔﺮدﯾﺪ. در ﯾﮏ ﻫﺎون ﻣﺨﻠﻮط ﮐﺮده و ﭘﺲ از اﺿﺎﻓﻪ ﮐﺮدن 051
ﺗﻌﯿﯿـﻦ ﻓﻌـﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿــﻦ اﺳﺘـﺨﺮاﺟـﯽ: ﺑﺮای ﺑﺮرﺳﯽ ﻣﯿﻠﯽﻟﯿﺘﺮ ﻣﺤﻠﻮل ﺳﯿﺴﺘﺌﯿﻦ ﻫﯿﺪروﮐﻠﺮاﯾﺪ 40/0 ﻣﻮﻻر )در
ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از روش USPاﺳﺘﻔﺎدهﮔﺮدﯾﺪ. دراﯾﻦ روش ﺳﻮد 450/0 ﻣﻮﻻر(، ﻣﺨﻠﻮط ﺗﮑﺎن داده ﺷﺪ. ﺳﻮﺳﭙﺎﻧﺴﯿﻮن
از ﮐﺎزﺋﯿﻦ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان ﺳﻮﺑﺴﺘﺮا اﺳﺘﻔﺎده ﻣﯽﺷﻮد. ﺑﺎ اﺛﺮ ﻣﻘﺎدﯾﺮ را ﻣﺪﺗﯽ ﺳﺎﮐﻦ ﻗﺮار داده و ﭘﺲ از ﺟﺪا ﮐﺮدن ﻣﺤﻠﻮل
ﻣﺨﺘﻠﻒ و اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺑﺮ روی ﮐﺎزﺋﯿﻦ، ﺗﯿﺮوزﯾﻦ روﯾﯽ، ﺑﻪ ﻣﺤﻠﻮل و رﺳﻮب ﻣﺠﺪداً ﻣﺤﻠﻮل ﺳﯿﺴﺘﺌﯿﻦ اﺿﺎﻓﻪ
آزاد ﺷﺪه و ﺑﺎ ﺗﺮیﮐﻠﺮواﺳﺘﯿﮏ اﺳﯿﺪ اﯾﺠﺎد ﮐﻤﭙﻠﮑﺲ ﺷﺪ ﻃﻮری ﮐﻪ ﺣﺠﻢ ﮐﻞ اﺳﺘﺨﺮاج ﺑﻪ ﯾﮏ ﻟﯿﺘﺮ رﺳﯿﺪ.
رﻧﮕﯽ ﻣﯽﻧﻤﺎﯾﺪ. ﺟﺬب ﮐﻤﭙﻠﮑﺲ رﻧﮕﯽ ﻣﺬﮐﻮر در ﻃﻮل ﻣﺤﻠﻮل ﺑﺎ ﻓﯿﻠﺘﺮ واﺗﻤﻦ2 و ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﻗﯿﻒ ﺑﻮﺧﻨﺮ3 و ﯾﮏ
ﻣﻮج 280nmاﻧﺪازهﮔﯿﺮی ﺷﺪه و ﻧﻤﻮدار ﺑﯿﺮ- ﻻﻣﺒﺮت ﻓﺸﺎر ﻣﮑﺶ ﻣﻼﯾﻢ ﺻﺎف ﮔﺮدﯾﺪ. ﻣﺤﻠﻮل ﺻﺎف ﺷﺪه ﺑﻪ
رﺳﻢ ﻣﯽﺷﻮد. ﺑﺎ اﻧﺠﺎم روش ﻓﻮق روی ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاج رﻧﮓ ﺳﺒﺰ روﺷﻦ ﺑﺎ 5/5 pHاﺳﺖ )ﻓﺮاﮐﺴﯿﻮن 1(. ﻣﺤﻠﻮل
ﺷﺪه و اﺳﺘﻔﺎده از ﻧﻤﻮدار ﻣﺬﮐﻮر، ﻣﯿﺰان ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺻﺎف ﺷﺪه ﺑﺎ ﺳﻮد ﻧﺮﻣﺎل ﺑﻪ آﻫﺴﺘﮕﯽ ﺑﻪ 9 pHرﺳﺎﻧﺪه ﺷﺪ
اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ ﺗﻌﯿﯿﻦ ﮔﺮدﯾﺪ)5(. )ﺳﻮد ﺑﺎﻋﺚ رﺳﻮب ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦﻫﺎ ﻣﯽﮔﺮدد(. رﺳﻮب ﺣﺎﺻﻞ
ﺑﺎ ﺳﺎﻧﺘﺮﯾﻔﻮژ ﺑﺎ دور 2600rpmو ﺑﻪ ﻣﺪت ﯾﮏ ﺳﺎﻋﺖ
ﯾﺎﻓﺘﻪ ﻫﺎ ﺟﺪا ﺷﺪ. ﺑﻪ ﻣﺎﯾﻊ ﺻﺎف ﺷﺪه )ﻓﺮاﮐﺴﯿﻮن 2( ﺑﻪ آراﻣﯽ
آﻣﻮﻧﯿﻮم ﺳﻮﻟﻔﺎت اﺿﺎﻓﻪ ﮔﺮدﯾﺪ ﺗـﺎ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ رﺳﻮب ﮐـﺮده
در اﯾﻦ ﺗﺤﻘﯿﻖ 2/1 ﮔﺮم ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از 001 ﮔﺮم ﺷﯿﺮاﺑﻪ
و ﮐﯿﻤﻮﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ ﺑﻪ ﺷﮑﻞ ﻣﺤـﻠﻮل ﺑﺎﻗـﯽ ﻣﺎﻧـﺪ. رﺳـﻮب
ﺑﻪ دﺳﺖ آﻣﺪ.
)ﻓﺮاﮐﺴﯿﻮن3( ﺗﻮﺳﻂ ﺳﺎﻧﺘﺮﯾﻔﻮژ ﺑﺎ دور 2500rpmﺑﻪ
ﺷﻨﺎﺳﺎﯾﯽ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﻣﺪت ﯾﮏ ﺳﺎﻋﺖ ﺟﺪا ﮔﺮدﯾﺪ. ﻓﺮاﮐﺴﯿﻮن 3 دوﺑﺎره ﺑﺎ
ﺑﺮای ﺷﻨﺎﺳﺎﯾﯽ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاج ﺷﺪه از دو ﻧﻮع 400ccﻣﺤﻠﻮل آﻣﻮﻧﯿﻮم ﺳﻮﻟﻔﺎت ﺷﺴﺘﻪ ﺷﺪه و رﺳﻮب
اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز و ﻫﻤﭽﻨﯿﻦ ﻣﻘﺎﯾﺴﻪ ﻃﯿﻒ IRﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاج ﻣﺜﻞ ﻣﺮﺣﻠﻪ ﻗﺒﻞ ﺑﺎ ﺳﺎﻧﺘﺮﯾﻔﻮژ ﺟﺪا ﺷﺪ. رﺳﻮب ﺣﺎﺻﻞ در
ﺷﺪه و ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪ. 350ccﻣﺤﻠﻮل 20/0 ﻣﻮﻻر ﺳﯿﺴﺘﺌﯿﻦ ﻫﯿﺪروﮐﻠﺮاﯾﺪ )اﯾﺠﺎد
1. Kim and smith 2. Wathman
3. Bokhner
دوره ﺷﺎﻧﺰدﻫﻢ ، ﺷﻤﺎره 35 ، ﻣﺮداد و ﺷﻬﺮﯾﻮز 5831 32 ﻣﺠﻠﻪ داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ ﻣﺎزﻧﺪران
- 4. ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ آﻧﺰﯾﻢ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ
در اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز، از دو اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز ﺳﻠﻮﻟﺰ اﺳﺘﺎت و
ژل اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز اﺳﺘﻔﺎده ﮔﺮدﯾﺪ. اﻟﮕﻮی ﺑﻪ دﺳﺖ آﻣﺪه از
ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاج ﺷﺪه و ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد، دﻗﯿﻘﺎً ﺗﺎﺋﯿﺪی
ﺑﺮ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ ﺑﻮد. ژل اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز ﺑﺮای ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦﻫﺎ
ﻧﺴﺒﺖ ﺑـﻪ اﻟﮑﺘـﺮوﻓـﻮرز ﺳﻠـﻮﻟـﺰ اﺳﺘـﺎت دارای ﻣﺰاﯾـﺎی
ﺑﯿﺶﺗﺮی اﺳﺖ زﯾﺮا ﺑﻪ راﺣﺘﯽ ﺗﻬﯿﻪ ﻣﯽﺷﻮد، ﺿﻤﻨﺎً ﺷﻔﺎف
ﺑﻮده و ﻣﯽﺗﻮان ﺗﺤﺖ اﺷﻌﻪ UVﻣﺎﮐﺰﯾﻤﻢ ﺟﺬب آن را
ﻧﻤﻮدار ﺷﻤﺎره 2 : ﻃﯿﻒ IRﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ
ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ ﻧﻤﻮد و ﻫﻤﭽﻨﯿﻦ دوﺑﺎره ﺣﻞ ﮐﺮدن آن ﺑﻬﺘﺮ اﻧﺠﺎم
ﻣﯽﮔﯿﺮد. ﺷﺮاﯾﻂ اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز در ﺟﺪول ﺷﻤﺎره 1 اراﺋﻪ
ﺗﻌﯿﯿﻦ ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاج ﺷﺪه:
ﺷﺪه اﺳﺖ.
ﺑﻪ ﻋﻠﺖ ﻏﻠﻈﺖﮐﻢ آﻧﺰﯾﻢﻫﺎ،اﻧﺪازهﮔﯿﺮی ﺑﺎ روشﻫﺎی
ﺷﯿﻤﯿﺎﯾﯽ ﻣﺎﻧﻨﺪ آﻧﭽﻪ در اﻧﺪازهﮔﯿـﺮی ﻏﻠﻈﺖ ﭘﺮوﺗﺌﯿـﻦﻫﺎ
ﺟﺪول ﺷﻤﺎره 1 : ﺷﺮاﯾﻂ اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز ﺑﺮای ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ
ﺑﻪ ﮐﺎر ﻣﯽرود، ﮐﻢﺗﺮ اﻣﮑﺎنﭘﺬﯾـﺮ ﻣﯽﺑﺎﺷﺪ. ﻟﺬا ﻣﯿـﺰان زﻣﺎن وﻟﺘﺎژ ﺟﺮﯾﺎن ﺑﺎﻓﺮ ﺷﺮاﯾﻂ
)(H )(V )(mA ﻧﻮع
آﻧﺰﯾﻢﻫﺎ را ﺑﺎ واﺣﺪ ﻗﺮاردادی ﻣﺸﺨﺺ ﻣﯽﻧﻤﺎﯾﻨﺪ. ﯾﮏ
5/2 002 01 اﺳﺘﺎت 4 = pHو ژل اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز
واﺣﺪ ﺑﯿﻦاﻟﻤﻠﻠﯽ ) (IUﻣﻘﺪار آﻧﺰﯾﻤﯽ اﺳﺖ ﮐﻪ ﺑﺘﻮاﻧﺪ در ﻧﯿﺮوی ﯾﻮﻧﯽ)1/0= (µ
ﻣﺪت زﻣﺎن ﯾﮏ دﻗﯿﻘﻪ واﮐﻨﺶ ﯾﮏ ﻣﯿﮑﺮوﻣﻮل ﺳﻮﺑﺴﺘﺮا 4 022 2 اﺳﺘﺎت 4 = pHو اﻟﮑﺘﺮوﻓﻮرز
ﻧﯿﺮوی ﯾﻮﻧﯽ)1/0= (µ ﺳﻠﻮﻟﺰ اﺳﺘﺎت
را ﮐﺎﺗﺎﻟﯿﺰ ﻧﻤﺎﯾﺪ. ﻃﺒﻖ ﺗﻌﺮﯾﻒ ،USPﻓﻌﺎﻟﯿﺖ آﻧﺰﯾﻢ
ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ، ﻓﻌﺎﻟﯿﺘﯽ اﺳﺖ ﮐﻪ ﻣﻌﺎدل 1 ﻣﯿﮑﺮوﮔﺮم ﺗﯿﺮوزﯾﻦ را
از ﺳﻮﺑﺴﺘﺮای ﮐﺎزﺋﯿﻦ در ﺷﺮاﯾﻂ ﻣﻌﯿﻦ آزاد ﮐﻨﺪ. ﻧﻤﻮدار ﺷﻤﺎره 1 و 2 ﺑﻪ ﺗﺮﺗﯿﺐ ﻃﯿﻒ IRﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ
در اﻧﺪازهﮔﯿﺮی ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ، ﺳﯿﺴﺘﺌﯿﻦ ﺑﺎﻋﺚ اﺣﯿﺎ اﺳﺘﺎﻧـﺪارد و ﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ اﺳﺘﺨـﺮاج ﺷـﺪه را ﻧﺸـﺎن ﻣﯽدﻫـﺪ.
ﺷﺪن ﺑﺎﻧﺪﻫﺎی دیﺳﻮﻟﻔﯿﺪی ﺑﻪ ﮔﺮوه آزاد ﺳﻮﻟﻔﯿﺪرﯾﻞ ﻫﻤـﺎنﻃـﻮریﮐـﻪ در اﯾﻦ دو ﺗﺼﻮﯾـﺮ ﻣﻼﺣﻈﻪ ﻣﯽﺷﻮد،
ﻣﯽﺷﻮد و ﺑﻪﻋﻨﻮان ﻋﺎﻣﻞ ﻓﻌﺎلﮐﻨﻨﺪه ﻋﻤﻞﻣﯽﮐﻨﺪ. ﻫﻨﮕﺎﻣﯽ ﭘﯿﮏﻫﺎی IRﻣﺮﺑـﻮط ﺑﻪ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ اﺳﺘﺎﻧـﺪارد و ﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ
ﮐﻪ ﺳﯿﺴﺘﺌﯿﻦ ﺑﺪون EDTAﺑﻪ ﮐﺎر ﺑﺮده ﻣﯽﺷﻮد، ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ دﻗﯿﻘﺎً ﻣﺸﺎﺑﻪ ﻫﻢ اﺳﺖ.
ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﮐﻢﺗﺮ از ﻣﻮﻗﻌﯽ اﺳﺖ ﮐﻪ ﻫﺮ دو ﺑﺎ ﻫﻢ ﺑﻪ ﮐﺎر ﺑﺮده
ﻣﯽﺷﻮﻧﺪ. ﺑﺎ اﺛﺮ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺑﺮ روی ﮐﺎزﺋﯿﻦ، اﺳﯿﺪ آﻣﯿﻨﻪ
ﺗﯿﺮوزﯾﻦ آزاد ﻣﯽﮔﺮدد ﮐﻪ اﯾﻦ اﺳﯿﺪ آﻣﯿﻨﻪ ﺑﺎ ﺗﺮیﮐﻠﺮو
اﺳﺘﯿﮏ اﺳﯿﺪ اﯾﺠﺎدﮐﻤﭙﻠﮑﺲ رﻧﮕﯽ ﻣﯽﮐﻨﺪ. ﻣﯿﺰان ﺟﺬب
اﯾﻦ ﮐﻤﭙﻠﮑﺲ در ﻃﻮل ﻣﻮج 280nmﺑﻪ وﺳﯿﻠﻪ دﺳﺘﮕﺎه
اﺳﭙﮑﺘﺮوﻓﺘﻮﻣﺘﺮ اﻧﺪازهﮔﯿﺮی ﺷﺪ. ﺟﺪول 2 ﻏﻠﻈﺖ و ﻣﯿﺰان
ﺟﺬب اﺳﺘﺎﻧﺪاردﻫﺎ )ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ( و ﻧﻤﻮﻧﻪ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ را
ﻧﻤﻮدار ﺷﻤﺎره 1 : ﻃﯿﻒ IRﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد
ﻧﺸﺎن ﻣﯽدﻫﺪ.
دوره ﺷﺎﻧﺰدﻫﻢ ، ﺷﻤﺎره 45 ، ﻣﻬﺮ و آﺑﺎن 5831 42 ﻣﺠﻠﻪ داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ ﻣﺎزﻧﺪران
- 5. ﻣﺤﻤﺪ آزادﺑﺨﺖ و ﻫﻤﮑﺎران ﭘﮋوﻫﺸﯽ
اﻫﻤﯿﺖ اﯾﻦ دو ﻣﺎده ﺣﺎﺻﻞ از ﺷﯿﺮاﺑﻪ ﻣﯿﻮه ﻧﺎرس درﺧﺖ ﺟﺪول ﺷﻤﺎره 2 : ﻏﻠﻈﺖ و ﻣﯿﺰان ﺟﺬب اﺳﺘﺎﻧﺪاردﻫﺎ )ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ( و ﻧﻤﻮﻧﻪ
ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ
Carica Papayaرا ﺑﻪ وﺿﻮح ﻧﺸﺎن ﻣﯽدﻫﺪ)4،9،01(.
ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ 3S 2S 1S ﻧﻤﻮﻧﻪ
ﺟﻬﺖ اﺳﺘﺨﺮاج آﻧﺰﯾﻢﻫﺎی ﭘﺮوﺗﺌﻮﻟﯿﺘﯿﮏ از ﺟﻤﻠﻪ 920/0 040/0 30/0 20/0 ﻏﻠﻈﺖ
ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از روشﻫﺎی ﻣﺨﺘﻠﻒ اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪه اﺳﺖ)1،41( از 470/0 001/0 570/0 50/0 ﻣﯿﺰان ﺟﺬب
ﺟﻤﻠﻪ اﯾﻦ روشﻫﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﺗﮑﻨﯿﮏ اﺳﺘﺨﺮاج ﺑﺎ ﯾﮏ
ﺑﺎ اﺳﺘﻔﺎده از ﻣﻘﺎدﯾﺮ ﺟﺬب و ﻏﻠﻈﺖ ﻣﺮﺑﻮط ﺑﻪ
ﺣﻼل و رﺳﻮب ﺑﻪوﺳﯿﻠﻪ ﯾﮏ ﺣﻼل)ﭘﺪﯾﺪه (salting out
اﺳﺘﺎﻧﺪاردﻫﺎی ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ، ﻧﻤﻮدار ﺑﯿﺮ- ﻻﻣﺒﺮت رﺳﻢ ﮔﺮدﯾﺪ و
ﻣﯽﺑﺎﺷـﺪ. ﻫﻤﭽﻨﯿــﻦ ﺟﻬﺖ ﺟﺪاﺳــﺎزی و ﺷﻨﺎﺳﺎﯾــﯽ اﯾـﻦ
ﺑﺎ ﺗﻮﺟﻪ ﺑﻪ ﻣﯿﺰان ﺟﺬب، ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاج ﺷﺪه ﺑﺎ
ﺗﺮﮐﯿﺒﺎت از روشﻫﺎی ﻣﺨﺘﻠﻒ ﮐﺮوﻣﺎﺗﻮﮔﺮاﻓﯽ ﻫﻤﺎﻧﻨﺪ
اﺳﺘﻔﺎده از ﻓﺮﻣﻮل زﯾﺮ ﺑﻪ دﺳﺖ آﻣﺪ:
ﮐﺮوﻣﺎﺗﻮﮔﺮاﻓﯽ ﺗﻤﺎﯾﻠﯽ، ﮐﺮوﻣﺎﺗﻮﮔﺮاﻓﯽ ﺗﻌﻮﯾﺾ آﻧﯿﻮن،
0006 * 2 = Aﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ)(U/mg
ژل ﻓﯿﻠﺘﺮاﺳﯿﻮن اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪه اﺳﺖ)51(. 1A
ﻣﻬـﻢﺗﺮﯾــﻦ روش ﺟﻬﺖ ﺟـﺪاﺳـﺎزی ﭘﺎﭘـﺎﺋﯿــﻦ و 1 Aو2 Aﺑﻪ ﺗـﺮﺗﯿﺐ ﻣﯿـﺰان ﺟﺬب ﻣﺤﻠﻮل آﺑﮑﯽ
ﮐﯿﻤﻮﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ، اﺳﺘﻔﺎده از ﯾﮏ ﺣﻼل ﺟﻬﺖ اﺳﺘﺨﺮاج و ﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ اﺳﺘﺎﻧـﺪارد و اﺳﺘﺨﺮاﺟـﯽ اﺳﺖ ﮐﻪ در دﺳﺘﮕﺎه
رﺳﻮب ﺑﻪوﺳﯿﻠﻪ ﯾﮏ ﺣﻼل ﻣﯽﺑﺎﺷﺪ. ﺑﺪﯾﻦ ﻣﻨﻈﻮر از آب اﺳﭙﮑﺘﺮوﻓﺘﻮﻣﺘﺮ ﻗﺮاﺋﺖ ﮔﺮدﯾﺪ، ﻋﺪد 0006 ﻣﯿﺰان ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ
ﺑﻪﻋﻨﻮان ﺣﻼل و اﻟﮑﻞ ﺑﻪﻋﻨﻮان رﺳﻮب دﻫﻨﺪه ﻫﻤﭽﻨﯿﻦ از ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﺑﺮاﺳﺎس U/mgاﺳﺖ. ﻃﺒﻖ ﻓﺮﻣﻮل ﻣﯿﺰان
ﻣﺤﻠﻮلﻫﺎی اﺳﯿﺪ آﻣﯿﻨﻪ ﺟﻬﺖ اﺳﺘﺨﺮاج و رﺳﻮب ﺑﻪوﺳﯿﻠﻪ ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ ﺑﺮاﺑﺮ اﺳﺖ ﺑﺎ:
920/
اﻧﻮاع اﻣﻼح )ﺳﻮﻟﻔﺎت آﻣﻮﻧﯿﻮم، ﺳﺪﯾﻢ ﮐﻠﺮاﯾﺪ( اﺳﺘﻔﺎده * 6000 = 5800U/mg
030/
ﻣﯽﺷﻮد)1،4(. در اﯾﻦ ﺗﺤﻘﯿﻖ از ﻣﺤﻠﻮل اﺳﯿﺪ آﻣﯿﻨﻪ ﺳﯿﺘﺌﯿﻦ
ﻟﺬا ﻣﯿﺰان ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﻧﻤﻮﻧﻪ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ، 0085
ﻫﯿﺪروﮐﻠﺮاﯾﺪ )40/0 ﻣﻮﻻر( ﺟﻬﺖ اﺳﺘﺨﺮاج و ﺳﭙﺲ
واﺣﺪ در ﻫﺮ ﻣﯿﻠﯽﮔﺮم ﻣﯽﺑﺎﺷﺪ.
رﺳﻮب ﭘﺮوﺗﺌﯿﻦﻫﺎ ﺑﻪوﺳﯿﻠﻪ ﻣﺤﻠﻮل ﻫﯿﺪروﮐﺴﯿﺪ ﺳﺪﯾﻢ و
ﻧﻬﺎﯾﺘﺎً رﺳﻮب ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺑﻪوﺳﯿﻠﻪ ﺳﻮﻟﻔﺎت آﻣﻮﻧﯿﻮم اﺳﺘﻔﺎده
ﮔﺮدﯾﺪ. ﺟﻬﺖ ﺧﺎﻟﺺﺳﺎزی، ﻣﺠﺪداً ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاج ﺑﺤﺚ
ﺷﺪه در ﻣﺤﻠﻮل ﺳﯿﺴﺘﺌﯿﻦ ﻫﯿﺪروﮐﻠﺮاﯾﺪ ﺣﻞ ﺷﺪه و در ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ و ﮐﯿﻤﻮﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ دو آﻧﺰﯾﻢ ﭘﺮوﺗﺌﻮﻟﯿﺘﯿﮏ ﺑﺎ ﻣﻨﺸﺄ
اﯾﻦ ﻣﺮﺣﻠﻪ ﺟﻬﺖ ﺑﻪ دﺳﺖ آوردن ﮐﺮﯾﺴﺘﺎلﻫﺎی ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از ﻃﺒﯿﻌﯽ ﻣﯽﺑﺎﺷﻨﺪ ﮐﻪ از ﻣﯿﻮه ﺧﺮﺑﺰه درﺧﺘﯽ ﺗﻬﯿﻪ ﻣﯽﺷﻮﻧﺪ
ﺳﺪﯾﻢ ﮐﻠﺮاﯾﺪ اﺳﺘﻔﺎده ﺷﺪه اﺳﺖ. ﺑﺎ ﺷﻨﺎﺳﺎﯾﯽ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺑﻪ )1،31،41(. از آن ﺟﺎﯾﯽ ﮐﻪ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ و ﮐﯿﻤﻮﭘﺎﯾﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﻔﺎده
روشﻫﺎی اﻟﮑﺘﺮوﻓـﻮرز اﺳﺘـﺎت، ژل اﻟﮑﺘﺮوﻓـﻮرز و ﺗﻬﯿـﻪ وﺳﯿﻌﯽ در ﺻﻨﺎﯾﻊ و ﭘﺰﺷﮑﯽ دارﻧﺪ، ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ و ﺑﺮرﺳﯽ
ﻃﯿﻒ IRو ﻣﻘﺎﯾﺴﻪ ﺑﺎ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﻣﺸﺨﺺ ﺷـﺪ ﮐﻪ روشﻫﺎی اﺳﺘﺨﺮاج، ﺟﺪاﺳﺎزی وﺷﻨﺎﺳﺎﯾﯽ آنﻫﺎ ﻣﯽﺗﻮاﻧﺪ
ﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟـﯽ دﻗﯿﻘﺎً ﻣﺸﺎﺑﻪ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد اﺳﺖ. در ﮐﺸﻮر ﮔﺎﻣﯽ ارزﺷﻤﻨﺪ ﺑﺎﺷﺪ. اﺳﺘﻔﺎده از ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ در
ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ در ﻣﻘﺎﯾﺴﻪ ﺑﺎ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﺻﻨﺎﯾﻊ ﮔﻮﺷﺖ و ﻓﺮآوردهﻫﺎی ﻏﺬاﯾﯽ، ﻫﻤﭽﻨﯿﻦ وﺟﻮد
١
39درﺻﺪ ﺑﻮده اﺳﺖ. ﻣﺮﯾﻨﺎﻟﯿﻨﯽ )2002( ﻓﻌﺎﻟﯿﺖآﻧﺰﯾﻢﻫﺎی ﻓﺮآوردهﻫﺎی ﻣﻮﺿﻌﯽ از ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از ﺟﻤﻠﻪ ﻓﺮآورده ﺟﻬﺖ
ﭘﺮوﺗﺌﻮﻟﯿﺘﯿﮏ اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ را ﺑﯿﻦ 001-09 درﺻﺪ ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ درﻣﺎن ﺳﻮﺧﺘﮕﯽ اﻃﻔﺎل، اﺳﺘﻔﺎده از ﮐﯿﻤﻮﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺑﻪ ﻋﻨﻮان
آﻧﺰﯾﻢ اﺳﺘﺎﻧﺪارد ﻣﻮرد ﻗﺒﻮل ﻣﯽداﻧﺪ ﻟﺬا ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ ﺗﻨﻬـﺎ دارو ﺟﻬﺖ درﻣـﺎن ﻓﺘـﻖ دﯾﺴﮏ ﻣﻬـﺮهای ﮐﻤـﺮی،
1. Mrinalini
دوره ﺷﺎﻧﺰدﻫﻢ ، ﺷﻤﺎره 35 ، ﻣﺮداد و ﺷﻬﺮﯾﻮز 5831 52 ﻣﺠﻠﻪ داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ ﻣﺎزﻧﺪران
- 6. ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ آﻧﺰﯾﻢ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ
( )0071( و ﺑﻪ وﯾﮋه ﺗﺸﺎﺑـﻪ ﭘﯿﮏﻫﺎ درC=O ) ﮐﺮﺑﻮﻧﯿﻞ .(14)اﺳﺘﺨﺮاﺟﯽ در اﯾﻦ ﺗﺤﻘﯿﻖ در ﺣﺪ ﻗﺎﺑﻞ ﻗﺒﻮل ﻣﯽﺑﺎﺷﺪ
( )0041-0011( ﻣﻮﯾـﺪFinger Print) ﻧﺎﺣﯿﻪ اﺛﺮ اﻧﮕﺸﺖ - OH ﻫـﺮ دو ﭘﺎﭘﺎﺋﯿـﻦ ﺣﻀـﻮر ﮔﺮوهﻫـﺎیIR در ﻃﯿﻒ
.ﺗﺸﺎﺑﻪ دو ﺗﺮﮐﯿﺐ ﻣﯽﺑﺎﺷﺪ – آﻟﯿﻔـﺎﺗﯿﮏ )0092(، ﮔﺮوهﻫـﺎیCH ،(3100-3600)
ﻓﻬﺮﺳﺖ ﻣﻨﺎﺑﻊ
1. Buttle D.J, Kembhavi A.A, Sharp S.L, 9. Stareley I.F, Mohammed P, Schneider G,
Shute R.E, Rich D.H, Barrett A.J. Bickler S.W. The treatment of paediatric
Affinity purification of the novel burns using topical papaya, Burns, 1999;
cysteine proteinase papaya proteinase IV, 25: 636-639.
and papain from papaya latex, Biochem. 10. Lee W.C,Chen T.C.Functional characteristics
J. 1989; 261: 469-476. of egg white solids obtained from papain
،ﺟﻠﺪ2- ﺗﻬﺮان ،ﮐﻮرﻣﻮﻓﯿﺖﻫﺎی اﯾﺮان :2. ﻗﻬﺮﻣﺎن اﺣﻤﺪ treated albumen, Journal of Food
.(1377) 656– 659 ،ﻣﺮﮐﺰ ﻧﺸﺮ داﻧﺸﮕﺎه ﺗﻬﺮان Enginering, 2002; 51: 263-266.
3. Bhattacharya J, Khuspe S.S. In vitro and 11. ﮐﯿﻮاﻧﯽ،ﻫﻮﺷﻨﮓ:اﺳﺘﺨﺮاج، ﺷﻨﺎﺳﺎﯾﯽ و ﺑﺮرﺳﯽ ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ
in vivo germination of papaya (Carica آﻧﺰﯾﻢ ﭘﺎﭘﺎﺋﯿﻦ از ﻣﯿﻮه درﺧﺖ ﮐﺎرﯾﮑﺎ ﭘﺎﭘﺎﯾﺎ واﻗﻊ در
papaya L.) seeds, Scientia Horticulturae, ،ﭘﺎﯾﺎنﻧﺎﻣﻪ دﮐﺘﺮی داروﺳﺎزی ﺷﯿﺮاز ،ﻣﻨﺎﻃﻖ ﺟﻨﻮب اﯾﺮان
2001; 91: 39-49. ﺑﻪ راﻫﻨﻤﺎﯾﯽ دﮐﺘﺮ ﻣﺤﻤﺪ آزادﺑﺨﺖ و دﮐﺘﺮ ﺳﯿﺪ ﻣﺤﻤﺪ
4. Samuelsson G. Drugs of natural origin, .1378 ﺣﺴﯿﻦ ﻃﺒﺎﺋﯽ، زﻣﺴﺘﺎن
4th ed., Apotekarsocieteten, Swedish
12. Kimmw J, Smith E. Crystalin papain,
Pharmaceutical Press, 1999, 360-366.
preparation specificity and activation, J.
5. USP 25: The United States Pharmacopoeia, Chem. 1954; 207: 515.
Convention, Inc., 2002, P. 1306-1307.
13. Cherian T. Effect of papaya latex
6. Edwin F, Jagannadham M.V. Single extract on gravid and non-gravid rat
disulfide bond reduced papain exists in a
uterine preparations in vitro, Journal of
compact intermediate state, Biochemica et
Ethnopharmacology, 2000; 70: 205-212.
Biophysica Acta, 2000; 1479: 68-82.
14. Mrinalini Menon M, Vithayathil P.J,
7. Adamczyk M, Gebler J.C, Wu J. Papain Raju S.M, Ramadoss C.S. Isolation and
digestion of different mouse IgG subclasses
characterization of proteolytic enzymes
as studied by electrospray mass
from the latex of Synadenium grantii
spectrometry, Journal of Immunological
Hook, Plant Science, 2002; 163: 131-139.
Methods, 2000; 237: 95-104.
15. Hostettmann K, Marston A, Hostettmann
8. Dermarderosian A, Beutler J.A. The
M. Preparative chromatography techniques.
review of natural produces, published by
Application in natural product isolation,
Facts & Comparisons, 2 nd. ed., 2002, Springer-Verlag, Berlin, 1998, 206-214.
286-7.
26 1385 دوره ﺷﺎﻧﺰدﻫﻢ ، ﺷﻤﺎره 45 ، ﻣﻬﺮ و آﺑﺎن ﻣﺠﻠﻪ داﻧﺸﮕﺎه ﻋﻠﻮم ﭘﺰﺷﮑﯽ ﻣﺎزﻧﺪران