Quale test per la diagnosi delle Allergie?

AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013
Filippo Fassio
AOU Careggi
SOD Immunologia e Terapie Cellulari
(Direttore Prof. E. Maggi)
ImmunoCAP vs ISAC

Diagnostica allergologica: evoluzione…

Prick test ImmunoCAP (ImmunoCAP)
ISAC
Dosaggio IgE sieriche
• Test di diagnostica
“tradizionale”
• Anche diagnostica
molecolare, ma
pochissimi allergeni
disponibili
“tradizionale”
molecolare, con molti
allergeni disponibili,
da indicare
singolarmente
• Solo diagnostica
molecolare
• Pannello standard
(immodificabile) di
112 molecole
allergeniche
Introduzione: metodiche…

Allergologia molecolare: quale test?
ImmunoCAP
Allergeni singoli
da richiedere singolarmente
Test ISAC
(Immuno Solid-phase Allergen Chip)
Pannello standard di 112 molecole

ImmunoCAP
ISAC

Allergologia molecolare: test ISAC
Test ISAC
(Immuno Solid-phase Allergen Chip)
Pannello standard di 112 molecole
• Test non automatizzato
• Per l’esecuzione necessita di:
• Vetrino
• Scanner per microarray
• Solo diagnostica molecolare

Step 1.
Reazione Antigene - Anticorpo
Gli anticorpi IgE presenti nel siero del
paziente riconoscono epitopi
specifici creando immunocomplessi
con le molecole allergeniche sulla
superficie del biochip.
Dettagli pratici:
Tempo di incubazione: 120 min
Lavaggio: 10 min in Sol A.
5 min in acqua distillata
ImmunoCAP ISAC®: la reazione
immunologica

Step 2.
Reazione con anticorpo secondario
Gli anticorpi secondari anti-IgE
vanno a legarsi all'immunocomplesso
IgE-allergene fissato sulla superficie
del chip. La reazione viene evidenziata
dalla presenza di un fluoroforo sull'anticorpo
secondario.
Dettagli pratici:
Tempo di incubazione: 30 min
Lavaggio: 10 min in Sol A.
5 min in distilled water
immunologica

Step 3.
Acquisizione dell'immagine
Il raggio laser dello scanner
eccita il fluoroforo che
riemette la radiazione luminosa
a una diversa lunghezza d'onda.
Il segnale viene poi elaborato dal software
per la creazione dell'immagine.
Dettagli pratici:
Tempo di scansione: 2 min
Lunghezza d'onda di eccitazione: 532 nm
Lunghezza d'onda di emissione: 570 nm
Laser
immunologica

ImmunoCAP ISAC®
Immuno Solid-phase Allergen Chip
E’ un supporto solido sul
quale differenti molecole
native e ricombinanti sono
state fissate in una precisa
disposizione così da
formare un array
microscopico.
Questo permette il
monitoraggio simultaneo e
in parallelo delle
Interazioni biologiche con
piccole quantità di campione
e di reagenti.
~ 100 picogrammi allergene / spot
> 100 allergeni / cm²
~ 200 µm dimensioni dello spot
0
65.535
112

Microarray ISAC: referto…

ImmunoCAP (ImmunoCAP)
ISAC
“tradizionale”
molecolare, con molti
allergeni disponibili,
da indicare
singolarmente
• Solo diagnostica
molecolare
• Pannello standard
(immodificabile) di
112 molecole
allergeniche

Nello studio sono stati arruolati:
• Soggetti con allergie respiratorie
• Polisensibili (almeno 2 positività dei test
allergologici, non correlate tra loro)
• Poliallergici

Può sostituire i test di laboratorio attualmente in uso per
la diagnosi delle allergopatie respiratorie?
Quali vantaggi offre dal punto di vista dell’inquadramento
diagnostico e della gestione clinica del paziente allergico?
Quali criticità sono emerse durante l’utilizzo del microarray
ISAC?
Allergologia molecolare: microarray ISAC

Può sostituire i test di laboratorio
attualmente in uso per la diagnosi
delle allergopatie respiratorie?

Quali vantaggi offre dal punto di
vista dell’inquadramento
diagnostico e della gestione clinica
del paziente allergico?

Allergologia molecolare: caratterizzazione
12% Polisensibili
con sensibilizzazione
predominante
29% Polisensibili “veri”
25% Polisensibili con
cross-reattività
29% Polisensibili
ad alimenti
?

Allergologia molecolare: caratterizzazione
12% Polisensibili
predominante
11% Polisensibili
predominante
6%
?
cross-reattività
sensibilizzazione ad
alimenti

Allergologia molecolare: terapie
Netto aumento delle prescrizioni di ITS
per allergeni inalanti

Quali criticità sono emerse durante
l’utilizzo del microarray ISAC?

Allergologia molecolare: costi

Allergologia molecolare: criticità ISAC
• Metodica attualmente non automatizzata (ma automatizzabile)
• Time-consuming: durata complessiva circa 4 ore; almeno nelle
prime 2 ore richiesta presenza dell’operatore
• Risposte semi-quantitative (ISU)
• Non possibile dosaggio delle IgE totali
Sufficienti 30 μl di sangue
(puntura capillare), utile
specialmente per pazienti
pediatrici

ImmunoCAP vs ISAC: conclusioni…
Può sostituire i test di laboratorio attualmente in
uso per la diagnosi delle allergopatie respiratorie?
per il pannello graminacee
per tutti gli altri allergeni inalanti

Quali vantaggi offre dal punto di vista dell’inquadramento
diagnostico e della gestione clinica del paziente allergico?
migliore definizione diagnostica
test multiplex
migliore gestione terapeutica (?)
ampio pannello di allergeni
risultati inattesi (aspecifici?)

Molecole allergeniche 
Pazienti

…ma in natura ce ne sono DI PIU’…
89 allergeni
(VBC genomics)
103 allergeni
(Phadia)
112 allergeni
(Thermo Fisher)
Il microarray ISAC cresce…

Conclusioni

www.allergome.org
Allergome…in caso di bisogno

La diagnostica molecolare in campo allergologico è l’evoluzione
teorica ed applicativa più significativa dalla caratterizzazione
delle IgE.
Aumenta il livello di complessità di interpretazione dei test, per
cui necessita di valutazione da parte di specialista allergologo,
con specifica esperienza di allergologia molecolare.
La metodica microarray ISAC, nella sua versione attuale,
presenta limiti principalmente legati alla “giovinezza” della
tecnologia e dell’approccio allergologico molecolare stesso.
Già oggi questa metodica, utilizzata congiuntamente ai test
allergologici “tradizionali” (in vivo o in vitro) permette una
migliore definizione diagnostica, le cui potenzialità sono solo
parzialmente esplorate.

fassio.filippo@gmail.com

Quale test per la diagnosi delle Allergie?

Empfohlen

Empfohlen

Weitere ähnliche Inhalte

Was ist angesagt?

Was ist angesagt? (20)

Andere mochten auch

Andere mochten auch (20)

Ähnlich wie Quale test per la diagnosi delle Allergie?

Ähnlich wie Quale test per la diagnosi delle Allergie? (20)

Mehr von Filippo Fassio

Mehr von Filippo Fassio (10)

Quale test per la diagnosi delle Allergie?