1. PRESENTACIÓN ALAT
Es una enzima que pertenece al grupo de las transferasas, pues transfieren
grupos aminos. Su reacción es libremente reversible y su constante de
equilibrio es cercana a la unidad. Estas enzimas son inducibles, porque su
actividad puede aumentarse por la acción de diversas hormonas como la tiroxina o
los glucocorticoides.
Su nomenclatura se establece a partir del aminoácido desde el cual transfieren el
grupo amino. Los números EC 2.6 representan a las enzimas transferasas que
transfieren grupos que contienen nitrógeno.
Es una enzima aminotransferasa con gran concentración en el hígado y en menor medida
en los riñones, corazón y músculos.
TRANSAMINACIÓN
Es la transferencia de un grupo amino entre un aa y un cetoacido aceptor. No utiliza ATP
ni equivalente reductores NADH H o NADPH2. Es una reacción reversible dependiendo
de la ley de acción de masa, si se tiene más reactante o más productos se puede ir en un
sentido u otro.
Catalizada por transaminasas, el grupo prostético es el piridoxal fosfato, el grupo
prostético es una molécula orgánica covalentemente unida a la proteína, la enzima sin el
grupo prostético no funciona. El aceptor común es el alfa-cetoglutarato.
El piridoxal fosfato deriva de la vitamina B6 (las vitaminas se requieren como grupos
prosteticos o cofactores para muchas enzimas) esta formando enlaces ionico y covalente
con el grupo radical de glicina, con el fosfato se establece un enlace hidrofilico y puentes
de hidrogeno con grupos radicales de aminoácidos o con enlaces peptídicos, el grupo
amino se encuentra formando un enlace electroestático de coordinación con un aspártico
y el metilo se encuentra formando un contacto hidrofobico.
Su función: inicialmente hay una enzima formando una base de schiff con el piridoxal
fosfato, viene un aa donador de grupo amino y este desplaza a la lisina para formar una
base schiff con el grupo amino del aa entrante.
Las enzima poseen un sitio activo, dependiendo de los radicales puestos alli va a ser la
condición, la enzima va cambiando su conformación a medida que los reactante van
transformándose en productos, estas conformaciones son importantes para el caso del
piridoxal, a través de los cambios conformacionales hay un reordenamiento de los
electrones de la base de schiff, pasando de una aldimina a una cetimina, en la aldimina
hay un doble enlace entre el alfa amino y el metilo del piridoxal, en la cetimina el doble
enlace se desplazó hacia el aminoacido. Eso da la idea que el aa se transformara en un
alfa cetoacido. Esto permite la disociación del alfa amino con el grupo metilo del piridoxal
pasando de una cetimina a una piridoxamina fosfato y alfacetoacido. En el proceso, no

2. cambia el pH, hay una hidrólisis para la escisión del enlace covalente, el que era
alfaaminoacido se convierte en alfa cetoacido y la piridoxamina e queda
momentáneamente con el amino.
1) Se forma una base de Shiff entre el P del PLP y el aminoácido (aldimina externa)
2) Se produce la desprotonación del C alfa, la pérdida puede darse porque puede
estabilizarse el carbanión por resonancia (carbanión y intermediario quinonoide)
3) La estructura para estabilizarse necesita compensar la carga negativa en exceso
mediante la adición de un p+
(cetimina)
4) En la etapa final se produce la hidrólisis para liberar los productos finales, el alfa
cetoacido y la piroxamina fosfato
Alat
 ALAT es una enzima producida por los hepatocitos
 Es uno de los marcadores bioquímicos utilizados para comprobar la función del
hígado.
 Cuando las células del hígado están dañadas o mueren sus membranas, se
destruyen y liberan ALAT en el torrente sanguíneo.
 Las concentraciones de ALAT aumentan como consecuencia de la inflamación del
hígado, la cual a su vez puede proceder de una gran variedad de causas, entre
ellas la hepatitis viral, consumo excesivo de alcohol o toxicidad medicamentosa.
 ALAT se encuentra principalmente en el tejido hepático y en pequeñas
proporciones en el músculo cardiaco y esquelético, en el riñon, en el cerebro, en el
páncreas y en los pulmones.
 Aumento del nivel de ALAT indica lesión hepatocelular aguda.
Coef. De Ritis=ASAT/ALAT
> a 1 (necrosis)
< a 1 Hepatitis viral o crónica( inflamación)
Cociente TGO (AST)/TGP (ALT) (cociente de De Ritis)
La diferente localización de las aminotransferasas o transaminasas en el interior de la
célula condujo a de De Ritis et al. (1957) a sugerir el cociente TGO/TGP como un medio
para distinguir las lesiones predominantemente inflamatorias de los procesos necróticos

3. LABORATORIO
Fundamento
 La enzima ALAT cataliza la transferencia de un grupo amino desde el aminoácido L- alanina
hacia el a cetoglutarato resultando de esta reacción la formación de piruvato y L-
glutamato.
 El piruvato resultante, es reducido por la enzima LDH, con la consiguiente oxidación del
NADH a NAD.
 La velocidad resultante de la disminución de la absorbancia a 340 nm es directamente
proporcional a la actividad de la ALAT.
 La desaparición de NADH se sigue por medición de la disminución de la absorbancia a 340
NRN durante varios minutos. El cambio en la absorbancia por minuto (AAImin) es
proporcional a los micromoles de NADH oxidado y a su vez a micromoles de sustrato
transformado por minuto.
 Un periodo de incubación preliminar es necesaria para garantizar que la reducción
dependiente de NADH de 0x0-ácidos endógena en la muestra se completa antes de la
adición de 2-oxoglutarato para comenzar la reacción aminotransferasa. Como ya se ha

4. mencionado, la suplementación con P-5'-P asegura que toda la actividad de la
aminotransferasa de la muestra se mide.
Buffer / Reactivo enzimático:
► Buffer Tris (pH 7,5): para establecer un medio apto para el funcionamiento de la enzima.
► L-Alanina: sustrato propio de la ALAT, es el dador de grupos amino y se agrega en exceso.
► LDH: Enzima encargada de la segunda fase de la reacción acoplada.
Sustrato:
►  - cetoglutarato: Actúa como sustrato y es el aceptor de grupos amino y forma al
glutamato.
► NADH: Actúa como sustrato en unión al piruvato para generar Lactato. El consumo de éste
es la base del método enzimático.
Interferentes
► Para la medición de las transaminasas existen muchas sustancias que pueden afectar el
resultado, dentro de las muchas que podemos mencionar están:
► Muestras hemolizadas.
► Consumo de alcohol dentro de las 24 horas antes de la toma de muestra.
► Muestras plasma que hayan sido anticoaguladas con heparina o citrato.
► Sueros altamente lipémicos o de pacientes ictéricos.
► Consumo de fármacos como Eritromicina, Tetraciclinas, etc.
► Pastillas anticonceptivas hepatotóxicas.
Linealidad: 500 U/L.
Para valores superiores 500 U/L, diluir la muestra con suero fisiológico y el resultado
obtenido se multiplica por el factor de dilución.
-Límite de detección: 4 U/L.
-Interferencias: Hemólisis, bilirrubina sobre 20 mg/dL y la lipemia (triglicéridos sobre 200
mg/dL) podrían interferir en la técnica. Otros medicamentos y sustancias podrían interferir
(4).

5. -Exactitud: Los reactivos VALTEK no muestran diferencias sistemáticas significativas
cuando se comparan con otros reactivos comerciales. Los detalles del estudio
comparativo están disponibles bajo solicitud.