SlideShare ist ein Scribd-Unternehmen logo
1 von 24
Downloaden Sie, um offline zu lesen
Reporte de Anomalías Estructurales Cromosómicas en
Pacientes Referidos al Laboratorio de Citogenética del
Hospital Nacional Docente Madre Niño
“San Bartolomé”
Período diciembre 2014-enero 2015
MORALES REYES Claudia Amelia
Asesora Externa : Blga. Gamarra Camacho Rosario
Asesor Interno : Blgo. Carlos Santa Cruz Carpio
Facultad de Ciencias Naturales y Matemática
Universidad Nacional Federico Villarreal
Lima 2015
2
DEDICATORIA
De las generaciones de las rosas que en el
fondo del tiempo se han perdido quiero
que una se salve del olvido, una sin
marca o signo entre las cosas que fueron.
A mis padres y hermanos, por el tiempo,
amor y comprensión.
3
AGRADECIMIENTOS
El presente informe, es el resultado de un conjunto de esfuerzos que no
hubieran tenido lugar sin el apoyo incondicional de todos los involucrados en el
proceso. Me encuentro agradecida de las autoridades del Hospital Nacional
Docente Madre Niño “San Bartolomé” y de los médicos y biólogos encargados
del Laboratorio de Citogenética, quiénes brindaron el mayor apoyo para la
realización de las prácticas.
Un agradecimiento especial a Carlos Santa Cruz y Rosario Gamarra, por su
tiempo y amable asesoría para la realización de este informe.
4
ÍNDICE
Pág.
RESUMEN 6
ABSTRACT 7
1. INTRODUCCIÓN 8
2. MARCO TEÓRICO 9 - 11
2.1. CITOGENÉTICA
2.2. CICLO CELULAR
2.2.1. PROFASE
2.2.2. METAFASE
2.2.3. ANAFASE
2.2.4. TELOFASE
2.2.5. CITOCINESIS
2.3. ANOMALÍAS ESTRUCTURALES
2.3.1. DELECIONES
2.3.2. DUPLICACIONES
2.3.3. ANILLOS CROMOSÓMICOS
2.3.4. ISOCROMOSOMAS
2.4. PATOLOGÍAS ASOCIADAS A ANOMALÍAS ESTRUCTURALES
3. MATERIALES Y MÉTODOS 11 - 13
3.1. DISEÑO DE ESTUDIO
3.2. POBLACIÓN DE ESTUDIO
3.3. METOLOGÍA
3.3.1. POBLACIÓN DE ESTUDIO
5
3.3.2. PROCEDIMIENTO
4. RESULTADOS 14- 16
5. DISCUSION 17
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 18
ANEXOS 20
6
RESUMEN
La citogenética es hoy en día un campo de mucha ayuda en el estudio de los
cromosomas, estudio que en muchos casos nos llevará al encuentro de
patologías asociadas a cromosomas anómalos. Estos se refieren a una mala
disposición de los cromosomas en alguna de las fases del ciclo celular, dando
lugar a aberraciones que, como en el caso del Síndrome Cri du chat, es
común encontrar en estudios de cariotipo. El siguiente informe, pretende
reportar la metodología empleada para el estudio de cromosomas, dando la
habilidad a la autora de poder realizar este tipo de análisis. En total, durante
los dos meses de práctica, se analizaron 145 pacientes de ambos grupos
etarios, adultos y pediátricos, el 4.23% de los pacientes adultos refiere una
anomalía estructural, en el caso de los pacientes pediátricos, las anomalías
estructurales solo estuvieron presentes en el 2,7% de pacientes. No se
reportan frecuencias de anomalías debido a los pocos casos encontrados, por
lo que no se determinan conclusiones.
Palabras clave: Cariotipo, cromosomas, anomalías estructurales.
7
ABSTRACT
Cytogenetics means today an important field in the study of chromosomes,
study which in many cases will lead to the meeting of pathologies associated
with abnormal chromosomes. These refer a bad arrangement of chromosomes
in any phase of the cell cycle, resulting aberrations as in Cru du chat syndrome
are commonly found in karyotype studies. The following dossier are intended
to report the methodology used for the study of chromosomes, giving to the
author the ability to carry out this kind of test. In total, during the two months of
practice, 145 patients of both age groups were analyzed, 4,23% of adults
patients relates a structural abnormality, in the other hand the pediatric patients
only refer 2,7% of structural abnormalities. No frequencies are reported
because of the few cases found, that is why we do not elaborate any
conclusion.
Key words: Karyotype, chromosomes, structural abnormalities.
8
1. INTRODUCCIÓN
La citogenética es el estudio de los cromosomas tanto en número como en
estructura, los primeros reportes sobre citogenética humana se dieron al
término del siglo XIX cuando Fleming publica en 1982 las primeras
ilustraciones del cromosoma humano(1). La citogenética convencional,
constituye actualmente una herramienta de gran importancia que permite
realizar el diagnóstico cromosómico en pacientes que sugieren ser
portadores de alguna cromosomopatía. Las cromosomopatías son
enfermedades genéticas causadas por la alteración en uno o varios genes,
y éstas pueden ser numéricas como las polipleudías y aneploidías, o
estructurales. Estas últimas refieren un tipo distinto de alteración en el
cromosoma como deleciones, traslocaciones, inserciones o duplicaciones.
Diferentes estudios realizados a nivel mundial, refieren que las alteraciones
cromosómicas son más frecuentes en la pareja infértil que en la población
general (2). Por otra parte, las causas de la mayoría de defectos congénitos
son cromosómicas, así la importancia epidemiológica de los defectos al
nacimiento estriba en que se presentan en 2 a 4% de todos los recién
nacidos y ocasionan el 20% de muertes ocurridas en el primer año de vida
(2). Las anormalidades cromosómicas pueden afectar a los cromosomas
autosómicos o sexuales, en las alteraciones estructurales se presentan los
rearreglos no balanceados, como las deleciones, duplicaciones, anillos,
isocromosomas dicéntricos y marcadores no específicados. Los rearreglos
balanceados pueden no identificarse en los individuos, ya que por lo
general no alteran el fenotipo (3). Los individuos portadores de rearreglos,
poseen un riesgo aumentado de producir gametos no balanceados o de
presentar problemas de infertilidad, esterilidad o aborto habitual.
Es de suma importancia contar con datos que argumenten los estudios
citogenéticos de laboratorio, confirmatorios del diagnóstico clínico, para
organizar un manejo integral y multidisciplinario de los pacientes con
enfermedades genéticas. En el siguiente reporte, se realiza el estudio de
pacientes evaluados en el período diciembre 2014 y enero 2015 en el
Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé” , para conocer la
incidencia de anomalías estructurales en pacientes de distintos grupos
etarios, a continuación se desarrolla el procedimiento y finalmente se
presentan las tablas correspondientes a los datos analizados. Se reserva el
derecho de anonimato de los pacientes evaluados.
9
2. MARCO TEÓRICO
2.1CITOGENÉTICA
La citogenética humana es el estudio de los cromosomas,
normalmente en la metafase de la mitosis, debido a que en esta etapa los
cromosomas se unen al huso mitótico y se alinean para su mejor visibilidad,
como veremos más adelante. Recientemente este estudio ha sido integrado
con estudios genómicos y de biología molecular (4). Las aberraciones
cromosómicas estructurales son de gran importancia por el riesgo que
presentan los portadores de tener descendencia con reordenamientos
desbalanceados (5). Las anomalías cromosómicas están presentes en al
menos el 10% de todos los espermatozoides y en el 25% de los oocitos
maduros. Entre el 15 y 20% de todos los embarazos no llegan a término,
debido a que concluyen en abortos espontáneos, la mayoría de estos
causados por una anomalía cromosómica (6). Como parte del proceso
natural de evolución, cuando estas alteraciones cromosómicas coexisten en
las células germinales pueden trasmitirse a los gametos y a la
descendencia: en otros casos puede llevar a un arresto en la
gametogénesis o al desarrollo de gametos con alteraciones cromosómicas
no balanceadas(6). Los fundamentos clásicos para solicitar análisis
cromosómico son la comprobación de anomalías citogenética cuando se
sospecha por las manifestaciones clínicas, la búsqueda de la causa de
malformaciones congénitas múltiples, alteraciones en la diferencia sexual,
talla baja, retardo psicomotor o mental y trastornos en el desarrollo del
lenguaje en niños afectados (7).
2.2 CICLO CELULAR
El ciclo celular engloba un conjunto de sucesos necesarios para la
división celular. Consiste en dos fases, Interfase (I) y fase M (M). La
interfase consta de la fase de síntesis o fase S, en la que hay duplicación
del material genético y la fase G1 y G2, que son fases de intervalo para el
incremento del tamaño celular. Por otro lado, en la fase M se reparte a las
células hijas el material genético duplicado, a través de la segregación de
cromosomas (8). La fase M, ha sido dividida convenientemente para su
estudio, es así que tenemos las siguientes etapas:
2.2.1 Profase: los cromosomas (unión de dos
cromátides hermanas) se condensan en el núcleo, mientras en el
10
citoplasma se comienza a ensamblar el huso mitótico entre los
centrosomas.
2.2.2 Metafase: fraccionamiento de la membrana
nuclear, la unión de los cromosomas al huso mitótico, lo que hace de esta
fase muy importante para la visibilidad de los cromosomas, y así
inmediatamente después se alineen al ecuador de la célula (9)
2.2.3 Anafase: se produce la separación de las
cromátidas hermanas, las que darán lugar a dos cromosomas hijos, los que
migrarán hacia los polos (9).
2.2.4 Telofase: en esta etapa, ambos juegos de
cromosomas llegan a los polos de la célula y adoptan una estructura menos
densa, para formar posteriormente una nueva estructura nuclear. Al finalizar
esta fase, la división del citoplasma y sus contenidos forman un anillo
contráctil (10).
2.2.5 Citocinesis: se divide la célula mediante el anillo
contráctil de actina y miosina, produciendo dos células hijas con un juego
completo de cromosomas(9).
Los cromosomas solo pueden ser estudiados en metafases mitóticas o
meióticas, luego de haber concluido la síntesis de DNA, debido a que se
observan los cromosomas con las dos cromátidas.
2.3 Anomalías Estructurales
En las alteraciones estructurales podemos encontrar rearreglos
balanceados y no balanceados. En el caso de los rearreglos no
balanceados, encontramos deleciones, duplicaciones, anillos,
isocromosomas dicéntricos y marcadores no especificados. Sin embargo
los rearreglos balanceados, pueden no identificarse en los individuos,
debido a que en la mayoría de casos no alteran el fenotipo, aunque estos
últimos son portadores sanos poseen un riesgo aumentado de presentar
problemas de infertilidad, esterilidad o abortos habituales (8).
2.3.1 Deleciones: es un tipo especial de anomalía
estructural cromosómica, que consiste en la pérdida de un fragmento de
ADN de un cromosoma, su origen puede deberse a una sencilla rotura
cromosómica y pérdida del segmento acéntrico. Sin embargo, en algunos
casos las deleciones son el resultado de un entrecruzamiento desigual
entre cromosomas homólogos o cromátidas hermanas mal alineados.
11
2.3.2 Duplicaciones: se refiere a la repetición de un
fragmento de cromosoma a continuación del fragmento original. Las
duplicaciones surgen por error en la duplicación del ADN, como producto de
una reorganización cromosómica de tipo estructural o relacionado con un
proceso de sobrecruzamiento defectuoso.
2.3.3 Anillos cromosómicos: puede tratarse de sucesos
céntricos o acéntricos, es un reordenamiento desbalanceado, aunque la
pérdida del segmento terminal pueda no estar envuelta en material genético
viral, las duplicaciones que ocurren en los anillos, a menudo conducen a
problemas en la mitosis, acompañadas de continuos cambios en el tamaño
y composición del anillo. Las repercusiones en el fenotipo son variables,
con signos de trisomías o de deleciones.
2.3.4 Isocromas: se produce una pérdida completa de
un brazo de un cromosoma, por la duplicación de otro, es una alteración
cromosómica bastante frecuente en el cromosoma X, puede producirse en
la primera división meiótica, donde generará material heterocigótico.
2.4 Patologías asociadas a Anomalías Estructurales
Es conocido que entre 3 y 5% de niños nacidos presentan una
anomalía congénita (3), la gran mayoría de embriones con anomalías
cromosómicas no concluyen con embarazo. Dentro de las manifestaciones
clínicas asociadas a patologías causadas por anomalías estructurales,
encontramos talla baja, retardo mental, dismorfias o alteraciones en el
desarrollo sexual.
En el Síndrome Cri du chat, se presenta deleción del brazo corto del
cromosoma 5. La incidencia es de 1 en cada 50000 recién nacidos. Se
observa un llanto característico en el período neonatal, acompañado de
bajo peso, pliegues epicánticos, hendiduras palpebrales, microcefalia y
retraso mental grave.
3 MATERIALES Y MÉTODOS
3.1 DISEÑO DE ESTUDIO: Por su naturaleza este estudio es
descriptivo, de corte transversal y retrospectivo.
3.2 POBLACION DE ESTUDIO Se considerara a pacientes de
todas las edades referidos al Laboratorio de Citogenética del Hospital
Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé”para el estudio de cariotipos
en el período diciembre 2014 – enero 2015.
12
3.3 METODOLOGÍA
3.3.1 Población de estudio Se evaluaron pacientes
referidos al Laboratorio de Citogenética del Hospital Nacional Docente
Madre Niño “San Bartolomé”, Lima, Perú, sin restricción de edad, sexo ni
raza. Los pacientes niegan haber recibido tratamiento previo (quimioterapia,
radioterapia o terapia hormonal). Se entrevistó a cada paciente sobre los
datos más relevantes de la historia clínica familiar, con la finalidad de
realizar un estudio genealógico en busca de patologías hereditarias que
podrían repercutir en la salud del paciente.
3.3.2 Procedimiento A cada paciente se le extrajo en
condiciones asépticas, de 2 a 5ml de sangre con una jeringa hipodérmica
de 5ml conteniendo heparina como anticoagulante. Luego de extraída la
muestra, se dejaron sedimentar para posteriormente utilizar el suero que se
encuentra en la superficie. Este se adicionará al frasco de cultivo que
contiene el medio de cultivo PBmax, medio diseñado para el crecimiento de
líneas celulares diploides, además contiene suero fetal bovino, cuya
composición rica en proteínas, enzimas, hormonas, factores de inhibición
del desarrollo celular, lípidos esenciales, minerales, metabolitos y
nutrientes, lo hacen esencial para la proliferación y producción biológica de
células in vitro. El medio debe contener antibióticos (penicilina y
estreptomicina), y finalmente contendrá phytohemaglutinina, que posee
capacidad mitogénica, es decir induce la mitosis y proliferación. En el medio
anteriormente descrito se adicionó 500ul del suero del paciente, esta
mezcla es llevada a incubación a 37°C durante 72 horas, con la finalidad de
que las células correspondientes a los glóbulos blancos proliferen.
Al cabo de 72 horas, se añadió 100ul de colchicina 0.1ng/ml, agente que
bloquea la citocinesis, impidiendo la formación del huso mitótico.
Posteriormente se llevó a la incubadora a 37°C por 50 minutos, para
permitir que las células sean detenidas en metafase. Se centrifugó a
1000RPM por 9 minutos.
Se descartó el sobrenadante y se resuspendió el pellet en 6ml de KCl
(Cloruro de Potasio), con la finalidad de que las células sean afectadas por
un shock hipotónico para lisar los eritrocitos. Luego se llevó a incubar a
37°C por 15minutos, se añadió 10 gotas del fijador Carnoy, solución 3:1 de
metanol:ácido acético, y se mezcló con la muestra incubada. Se centrifugó
a 1000 RPM por 9 minutos. Se eliminó el sobrenadante y resuspendeió el
pellet con 6ml de Carnoy, se mezcló y dejó fijar durante 30 minutos a
13
temperatura ambiente. Este paso se repitió durante tres veces, a modo de
lavados.
El último pellet obtenido luego de los lavados se resuspendió en 1,5ml del
fijador, para su posterior conservación. Las láminas porta objetos fueron
lavadas con una mezcla de etanol acetona antes de su uso, con la finalidad
de eliminar el exceso de grasa sobre su superficie. Se agregaron de 4 a 5
gotas del pellet resuspendido en la lámina y se seca al mechero.
Para el análisis microscópico las muestras fueron teñidas según el método
de bandeo G de rutina. Para esta coloración se preparan 3 frascos Koplins
conteniendo distintas sustancias:
Frasco 1: solución de Tripsina 1%
Frasco 2: solución salina fisiológica
Frasco 3: colorante Giemsa 4%
El frasco 1 se colocó en baño maría a 37° debido a que esta temperatura es
óptima para el funcionamiento de esta enzima, se colocan las láminas
durante 1 segundo, luego se procedió a enjuagar en el frasco 2 y finalmente
se colorearon en el frasco 3 durante 15 minutos. Finalmente se lavaron, se
dejaron secar y se observaron al microscopio óptico.
3.3.3 Análisis cromosómico En el microscopio óptico se
seleccionaron de 10 a 60 metafases por cada paciente, la diferencia se debió
principalmente al bajo porcentaje de metafases obtenidas en algunos pacientes.
Las metafases para el diagnóstico tuvieron buena dispersión y morfología, y su
análisis se realizó con ayuda del cariotipador.
3.3.4 Análisis estadístico El análisis de los datos de los
pacientes evaluados en los meses diciembre 2014 y enero 2015 se realizó
tomando de referencia la base de datos secundaria del Laboratorio
Citogenética del Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé”.
Llos datos han sido evaluados con el programa Microsoft Excel de Office
para Windows.
14
4 RESULTADOS
En el período comprendido entre diciembre del año 2014 y enero del año 2015,
fueron evaluados en total 71 pacientes adultos, mayores a 18 años, y 74
pacientes pediátricos (desde recién nacidos hasta 17 años). Se encontró 3
casos de anomalías estructurales en pacientes adultos correspondientes a dos
pacientes de sexo femenino y un paciente de sexo masculino, como se detalla
en la Tabla N°2, se encontró la deleción 46,X,I(X)(q10.q10) y la traslocación
46,XX t(7;17)(p12,q13), mientras que en el paciente masculino se encontró la
heterocromatina centromérica 46,XY,16qh+.Las anomalías estructurales
encontradas en pacientes pediátricos, son correspondientes a pacientes
femeninos como se detalla en la Tabla N°4. Una de las pacientes presenta la
deleción 46,X del(X)(q21.1), mientras que la segunda paciente presenta el
incremento satelital 46,XX,14psth+,15ps+. Además las Tablas N°1 y Tablas
N°3 muestran un resumen de la población evaluada, en la que se detalla los
grupos etarios y grupos de género. En el análisis cromosómico se analizaron
de 10 a 60 metafases por paciente. Para los cuadros generales con el detalle
de todos los pacientes evaluados, ver anexos.
Tabla N°1 Reporte de pacientes adultos evaluados
N° Pacientes Alteraciones %
Femeninos 45 2 2.82%
Masculinos 26 1 1.41%
Total 71 3 4.23%
Tabla N°2 Reporte de Anomalías Estructurales en Pacientes Adultos
EDAD SEXO CARIOTIPO ANOMALÍA
37 Femenino 46,X,I(X)(q10.q10) Isocromosoma
29 Femenino 46,XX t(7;17)(p12,q13) Traslocación
39 Masculino 46,XY,16qh+ Heterocromatina centromérica
15
Tabla N°3 Reporte de pacientes pediátricos evaluados
N° Pacientes Alteraciones %
Femeninos 34 2 2.70%
Masculinos 40 0 0
Total 74 2 2.70%
Tabla N°4 Reporte de Anomalías Estructurales en Pacientes Pediátricos
EDAD SEXO CARIOTIPO ANOMALÍA
17 Femenino 46,X del(X)(q21.1) Deleción
1 Femenino 46,XX,14PSTH+,15PS+ Incremento en satélite
Tabla N°5 Reporte de Causas para el estudio de cariotipo en Pacientes
Adultos
N°
Pacientes
Causas-
Infertilidad
% Causas-
Ovodoación
% Causas-
Otros
%
Femeninos 45 36 50.70% 8 11.27% 1 1.41%
Masculinos 26 26 36.62% 0 0 0 0
Total 71 62 87.32% 8 11.27% 1 1.41%
Se reportan las causas que sugieren al clínico que el paciente presente una
anomalía estructural, se dividen tres grupos en las posibles causas, el primero
corresponde a Infertilidad, luego a pacientes que van a someterse a
tratamientos por Ovodonación y luego correspondientes a otras causas, como
único caso se presenta el temor de los padres a tener hijos con retardo mental
(Tabla N°5).
16
Tabla N°6 Reporte de Causas para el estudio de cariotipo en Pacientes
Pediátricos
N°
Pacientes
Causas-
Retardo
mental
% Causas-
Amenorrea
% Causas-
Otros
%
Femeninos 45 11 14.86% 3 4.05% 20 27.03%
Masculinos 26 12 16.22% 0 0 28 37.84%
Total 71 23 31.08% 3 4.05% 48 64.87%
Se reportan las causas que sugieren al clínico que el paciente presente una
anomalía estructural, se dividen tres grupos en las posibles causas, el primero
corresponde a pacientes con retardo mental, luego a pacientes femeninos que
presentan amenorrea y finalmente correspondientes a otras causas que
refieren principalmente casos de talla bajo, microcefalia, criptorquidia,
cardiopatías congénitas e hipogonadismo (Tabla N°6).
En total se analizaron 145 pacientes de ambos grupos etarios, adultos y
pediátricos, el 4.23% de los pacientes adultos refiere una anomalía estructural,
en el caso de los pacientes pediátricos, las anomalías estructurales solo
estuvieron presentes en el 2,7% de pacientes. No se reporta frecuencia de
anomalías, debido a que cada caso es único.
Es preciso finalizar, recordando que debido al poco tiempo de duración de las
prácticas, no se pueden estimar mayores frecuencias por los pocos pacientes
encontrados, por lo que el presente pretende informar sobre los casos
hallados, esperando sirva para una investigación mayor, y nuestra población
pueda en un futuro tener mayor conocimiento de los males genéticos que nos
aquejan.
17
5 DISCUSIÓN
De acuerdo al reporte de WHO (2008) acerca de enfermedades a nivel
mundial, los desórdenes genéticos y congénitos son la segunda causa más
común de muerte en infantes y niños, ocurren con una prevalencia de 2,5-6%
por nacimientos (11). En este estudio se determinaron varios tipos de
anomalías cromosómicas en el estudio de cariotipo realizado a 145 pacientes,
divididos en 2 grupos etarios, correspondientes a adultos con edad igual o
mayor a 18 años, y pediátricos con edad menor a 18 años desde el nacimiento.
Los análisis citogenéticos revelaron baja incidencia de rearreglos estructurales,
encontrándose casos únicos por cada anomalía citogenética. De acuerdo al
grupo etario, las alteraciones corresponden a pacientes derivados al laboratorio
con diversos diagnósticos, en el caso de pacientes adultos a infertilidad
(87.32%) y en el caso de pediátricos a casos clínicos de amenorrea (4.05%) y
retardo mental (31.08%). Los estudios del cariotipo son confirmatorios para
diversos casos de anomalías estructurales, derivados según la etiología que
presenta el paciente. Considerables datos estadísticos a nivel mundial,
reportan a cuadros clínicos de talla baja y amenorrea primaria o secundaria
como consecuencia de anomalías estructurales (12). Los abortos recurrentes
se consideran como un problema clínico que aparece en el 10-15% de la
población mundial y el 50% de estos son atribuibles a una anomalía estructural
cromosómica (13). En parejas con abortos recurrentes, un diagnóstico inicial
debe incluir el análisis cromosómico de la pareja, tanto el hombre como la
mujer. La anomalía más común es la translocación(14), otra anomalía
cromosómica es la inversión en el cromosoma X, provocando la inactivación de
este. Estas anomalías fueron observadas en nuestro estudio. Los
polimorfismos comunes citogenéticos son detectados por el Bandeo-G, así los
heteromorfismos son incluidos en las regiones heterocromáticas de los
cromosomas 1, 9, 16 e Y, y también en los brazos cortos prominentes,
conocidos como satélites. Los bloques individuales de heterocromatina
muestran reacciones específicas con diferentes frecuencias de mutaciones
(15). Las duplicaciones, deleciones e inversiones de algunas regiones son
causadas por el pareamiento anormal de cromosomas homólogos en la
profase de la meiosis I. Las variantes polimórficas de los cromosomas que
juegan probablemente un rol de gran importancia en la fertilidad y viabilidad
pertenecen a regiones heterocromáticas (16) pero no tienen impacto en el
fenotipo(17).
18
6 RESEÑAS BIBLIOGRÁFICAS
1. C. Ravel, J-P. Siffroi. Anomalies de structure du chromosome Y et syndrome
de Turner. Gynécologie Obstétrique & Fertilite. 2009;37(2):511–8.
2. Ricardo Hernández Herrera, Luz Rojas Patlán, Rosa Garza Pérez, Martha
Dávila Rodríguez, Elva Cortés Gutierréz, Emerson García Rodríguez, et al.
Anormalidades cromosómicas en pacientes de un hospital de
ginecoobstetricia. Rev Med Inst Mex Seguro Soc. 2014;52(1):90–3.
3. Marta Lucia Bueno. Cromosomas, vehículos en la organización y transmisión
de los caracteres. Acta biol Colomb. 2011;16(3):43–60.
4. Xiaoli Yang, Wei Wu, Charles C. Teng. Algorithms for modeling structural
changes in human chromosomes. Computer Methods and Programs in
Biomedicine. 2013;110(2):171–82.
5. Olga Quiñones Maza, Jorge Quintana Aguilar, Luis Méndez Rosado, Anduriña
Barrios Meza, Ursulina Suárez Mayedo, Minerva García, et al. Frecuencias de
reordenamientos cromosómicos estructurales acorde a las indicaciones para
estudios citogenéticos prenatales y postnatales. Rev Cubana Genet Comunit.
2010;4(3):36–42.
6. Sergio Romero Tovar, Berenice Juárez Espinosa, Carlos Galindo García,
Margarita Mendoza Romo, Rafael Sánchez Usabiaga. Prevalencia de
alteraciones cromosómicas en pacientes infértiles estudiadas en una clínica de
reproducción asistida. Ginecol Obstet Mex. 2009;77(3):128–35.
7. Silvia Castillo, Lorena Tobella, Samuel Salazar, Vera Daher, Patricia Sanz,
Fermina López, et al. Alteraciones cromosómicas en niños referidos para
estudio citogenético. Rev Chil Pediatr. 1994;65(4):210–4.
8. Alonso Cerezo. Bases cromosómicas de las alteraciones genéticas humanas.
Química Clínica. 2007;26(4):224–8.
9. Leonardo Lomanto Díaz, Óscar Ortiz Cala, César Bretón Pinto, Álvaro Gómez
Lizcano, Viviana Mesa Cornejo. El ciclo celular. MEDUNAB. 2003;6(16):21–9.
10. José Alvarado Moreno, Héctor Mayani. El ciclo celular y su papel en la
biología de las células progenitoras hematopoyéticas. Medigraphic.
2007;143(2):149–61.
11. LJ Estcourt, BJ Bain. WHO Classification of Leukemia. 7.
19
12. Zhao, J, Whistler, RL. Spherical aggregates of starch granules as flavor
carriers. Food Technology. 1994;48(7):104–5.
13. M. Rajasekhar, R. Murugesan, Rekharao, H. Shetty, Jyothirao, P. M.
Gopinath, et al. Cytogenetic Analysis of 1400 Referral Cases: Manipal
Experience. Int J Hum Genet. 2010;10(1):49–55.
14. Andrés Estay, Roxana Parra, Hugo Benítez. Alteraciones cromosómicas en
linfocitos de sangre periférica. Rev Chil Pediatr. 2007;78(4):363–8.
15. Verma Ic. Burden of genetic disorders in India. Indian J Padiatr.
2001;68(1):25–39.
16. P. F. Madon, A. S. Athalye, F.R Parikh. Polymorphic variants on
chromosomes probably play a significant role in infertility. Reprod Biomed
Online. 2005;11(6):726–32.
17. FI Sahin, Z Yilmaz, OO Yuregir, T Bulakbasi, O Ozer, HB Zeyneloglu.
Chromosome heteromorphism an impact on infertility. Assist Reprod Genet.
25(2):191–5.
20
ANEXOS
21
Fotografía 2. Detalle de la asepsia para la inoculación del
suero en el medio de cultivo.
Fotografía 3. Detalle de la inoculación del suero en el medio
de cultivo.
Fotografía 1. Detalle de la muestra y el medio, primera etapa
del proceso.
22
Fotografía 4. Medios de cultivo conteniendo los leucocitos.
Fotografía 5. Pelllets obtenidos al final del procedimiento.
Fotografía 6. Preparación de láminas con la muestra final.
23
Fotografía 7. Lugar especial en el laboratorio para la
coloración de las láminas.
Fotografía 8. Detalles de los cromosomas obtenidos, en un
paciente pediátrico.
24
Fotografía 9. Detalle del reporte entregado al paciente, en este caso corresponde a un
paciente pediátrico con trisonomía 13

Weitere ähnliche Inhalte

Was ist angesagt?

Material genetico y_reproduccion_celular
Material genetico y_reproduccion_celularMaterial genetico y_reproduccion_celular
Material genetico y_reproduccion_celular
Paulina Jq
 
El genoma humano de nazarena, gisella y juan ignacio
El genoma humano de nazarena, gisella y juan ignacioEl genoma humano de nazarena, gisella y juan ignacio
El genoma humano de nazarena, gisella y juan ignacio
juaninazagise
 
Genetica y-clonacionolll
Genetica y-clonacionolllGenetica y-clonacionolll
Genetica y-clonacionolll
buesa
 
Fundamentos de la Biologia Molecular
Fundamentos de la Biologia MolecularFundamentos de la Biologia Molecular
Fundamentos de la Biologia Molecular
Crisnelda
 
Ciclo Celular Y Carcinogenesis
Ciclo Celular Y CarcinogenesisCiclo Celular Y Carcinogenesis
Ciclo Celular Y Carcinogenesis
Frank Bonilla
 

Was ist angesagt? (19)

Material genetico y_reproduccion_celular
Material genetico y_reproduccion_celularMaterial genetico y_reproduccion_celular
Material genetico y_reproduccion_celular
 
TRABAJO DE BIOLOGÍA
TRABAJO DE BIOLOGÍATRABAJO DE BIOLOGÍA
TRABAJO DE BIOLOGÍA
 
Genética y comportamiento
Genética y comportamientoGenética y comportamiento
Genética y comportamiento
 
hablemos de genética MEIOSIS
hablemos de genética MEIOSIS hablemos de genética MEIOSIS
hablemos de genética MEIOSIS
 
Trabajo de genetica listo
Trabajo de genetica listoTrabajo de genetica listo
Trabajo de genetica listo
 
El genoma humano de nazarena, gisella y juan ignacio
El genoma humano de nazarena, gisella y juan ignacioEl genoma humano de nazarena, gisella y juan ignacio
El genoma humano de nazarena, gisella y juan ignacio
 
Genetica y-clonacionolll
Genetica y-clonacionolllGenetica y-clonacionolll
Genetica y-clonacionolll
 
Genética Conceptos básicos
Genética Conceptos básicosGenética Conceptos básicos
Genética Conceptos básicos
 
Mecanismos celulares de la herencia
Mecanismos celulares de la herenciaMecanismos celulares de la herencia
Mecanismos celulares de la herencia
 
GenéTica
GenéTicaGenéTica
GenéTica
 
Cromosomas
CromosomasCromosomas
Cromosomas
 
Genética 1
Genética 1Genética 1
Genética 1
 
Controversia en la investigación con células madre
Controversia en la investigación con células madreControversia en la investigación con células madre
Controversia en la investigación con células madre
 
Cariotipo. laboratorio de habilidades para segundo año medio, biología.
Cariotipo. laboratorio de habilidades para segundo año medio, biología.Cariotipo. laboratorio de habilidades para segundo año medio, biología.
Cariotipo. laboratorio de habilidades para segundo año medio, biología.
 
Presentacion proyecto celulas-madres-isss-2006
Presentacion proyecto celulas-madres-isss-2006Presentacion proyecto celulas-madres-isss-2006
Presentacion proyecto celulas-madres-isss-2006
 
Fundamentos de la Biologia Molecular
Fundamentos de la Biologia MolecularFundamentos de la Biologia Molecular
Fundamentos de la Biologia Molecular
 
Expo clase 3
Expo clase 3Expo clase 3
Expo clase 3
 
Ciclo de Mitosis y de la Citocinesis
Ciclo de Mitosis y de la CitocinesisCiclo de Mitosis y de la Citocinesis
Ciclo de Mitosis y de la Citocinesis
 
Ciclo Celular Y Carcinogenesis
Ciclo Celular Y CarcinogenesisCiclo Celular Y Carcinogenesis
Ciclo Celular Y Carcinogenesis
 

Ähnlich wie Reporte anomalías estructurales

Aneuploidías Cromosómicas más Frecuentes_ Revision bibliográfica_ Camila Gonz...
Aneuploidías Cromosómicas más Frecuentes_ Revision bibliográfica_ Camila Gonz...Aneuploidías Cromosómicas más Frecuentes_ Revision bibliográfica_ Camila Gonz...
Aneuploidías Cromosómicas más Frecuentes_ Revision bibliográfica_ Camila Gonz...
CamilaGonzlez612915
 
Patologia de la 2da y 3ra semana
Patologia de la 2da y 3ra semanaPatologia de la 2da y 3ra semana
Patologia de la 2da y 3ra semana
Yuly Huete Abal
 

Ähnlich wie Reporte anomalías estructurales (20)

Trastornos geneticos
Trastornos geneticosTrastornos geneticos
Trastornos geneticos
 
Los Factores Teratogénicos
Los Factores TeratogénicosLos Factores Teratogénicos
Los Factores Teratogénicos
 
Aneuploidías Cromosómicas más Frecuentes_ Revision bibliográfica_ Camila Gonz...
Aneuploidías Cromosómicas más Frecuentes_ Revision bibliográfica_ Camila Gonz...Aneuploidías Cromosómicas más Frecuentes_ Revision bibliográfica_ Camila Gonz...
Aneuploidías Cromosómicas más Frecuentes_ Revision bibliográfica_ Camila Gonz...
 
nefrologia-dia-295_103757.pdf
nefrologia-dia-295_103757.pdfnefrologia-dia-295_103757.pdf
nefrologia-dia-295_103757.pdf
 
Ensayo final (sk)
Ensayo final (sk)Ensayo final (sk)
Ensayo final (sk)
 
Bitacora anomalia genética mandat.docx
Bitacora anomalia genética mandat.docxBitacora anomalia genética mandat.docx
Bitacora anomalia genética mandat.docx
 
Patologías fetales congénitas y cromosomicas
Patologías fetales congénitas y cromosomicasPatologías fetales congénitas y cromosomicas
Patologías fetales congénitas y cromosomicas
 
Cariotipo
CariotipoCariotipo
Cariotipo
 
sindromes.pdf
sindromes.pdfsindromes.pdf
sindromes.pdf
 
1° jornadas internacionales de abordaje integral de (1)
1° jornadas internacionales de abordaje integral de (1)1° jornadas internacionales de abordaje integral de (1)
1° jornadas internacionales de abordaje integral de (1)
 
ANEUPLOIDIAS.1234567891011121314151617pdf
ANEUPLOIDIAS.1234567891011121314151617pdfANEUPLOIDIAS.1234567891011121314151617pdf
ANEUPLOIDIAS.1234567891011121314151617pdf
 
Juarez sanchez miriam_m16s2_elciclocelular
Juarez sanchez miriam_m16s2_elciclocelularJuarez sanchez miriam_m16s2_elciclocelular
Juarez sanchez miriam_m16s2_elciclocelular
 
Patologia de la 2da y 3ra semana
Patologia de la 2da y 3ra semanaPatologia de la 2da y 3ra semana
Patologia de la 2da y 3ra semana
 
NUEVO.pdf
NUEVO.pdfNUEVO.pdf
NUEVO.pdf
 
Agentes teratógenos
Agentes teratógenosAgentes teratógenos
Agentes teratógenos
 
Tarea 10 de genetica y conducta 16408405
Tarea 10  de genetica y conducta 16408405Tarea 10  de genetica y conducta 16408405
Tarea 10 de genetica y conducta 16408405
 
Tarea 10
Tarea 10Tarea 10
Tarea 10
 
ANOMALIAS CROMOSOMICAS PERU.pdf
ANOMALIAS CROMOSOMICAS PERU.pdfANOMALIAS CROMOSOMICAS PERU.pdf
ANOMALIAS CROMOSOMICAS PERU.pdf
 
Agentes teratogenicos
Agentes teratogenicosAgentes teratogenicos
Agentes teratogenicos
 
Alteraciones en el desarrollo de la corteza cerebral. Presentación clínica y ...
Alteraciones en el desarrollo de la corteza cerebral. Presentación clínica y ...Alteraciones en el desarrollo de la corteza cerebral. Presentación clínica y ...
Alteraciones en el desarrollo de la corteza cerebral. Presentación clínica y ...
 

Kürzlich hochgeladen

(2024-05-06)Sesion Anticoncepción desde atencion primaria (DOC)
(2024-05-06)Sesion Anticoncepción desde atencion primaria (DOC)(2024-05-06)Sesion Anticoncepción desde atencion primaria (DOC)
(2024-05-06)Sesion Anticoncepción desde atencion primaria (DOC)
UDMAFyC SECTOR ZARAGOZA II
 
LIBRO LA MEJOR PSICOTERAPIA, PROLOGO - copia.pdf
LIBRO LA MEJOR PSICOTERAPIA, PROLOGO - copia.pdfLIBRO LA MEJOR PSICOTERAPIA, PROLOGO - copia.pdf
LIBRO LA MEJOR PSICOTERAPIA, PROLOGO - copia.pdf
Franc.J. Vasquez.M
 
SEMANA 01 - ASISTENCIA AL USUARIO CON PATOLOGIAS
SEMANA 01 - ASISTENCIA AL USUARIO CON PATOLOGIASSEMANA 01 - ASISTENCIA AL USUARIO CON PATOLOGIAS
SEMANA 01 - ASISTENCIA AL USUARIO CON PATOLOGIAS
JessBerrocal3
 
Diabetes Mellitus 2024 y fisiologia y datos.pdf
Diabetes Mellitus 2024 y fisiologia y datos.pdfDiabetes Mellitus 2024 y fisiologia y datos.pdf
Diabetes Mellitus 2024 y fisiologia y datos.pdf
AbelPerezB
 
(2024-05-07). ANTICONCEPCIÓN EN ATENCIÓN PRIMARIA
(2024-05-07). ANTICONCEPCIÓN EN ATENCIÓN PRIMARIA(2024-05-07). ANTICONCEPCIÓN EN ATENCIÓN PRIMARIA
(2024-05-07). ANTICONCEPCIÓN EN ATENCIÓN PRIMARIA
UDMAFyC SECTOR ZARAGOZA II
 

Kürzlich hochgeladen (20)

Uso Racional del medicamento prescripción
Uso Racional del medicamento prescripciónUso Racional del medicamento prescripción
Uso Racional del medicamento prescripción
 
(2024-05-06)Sesion Anticoncepción desde atencion primaria (DOC)
(2024-05-06)Sesion Anticoncepción desde atencion primaria (DOC)(2024-05-06)Sesion Anticoncepción desde atencion primaria (DOC)
(2024-05-06)Sesion Anticoncepción desde atencion primaria (DOC)
 
Conceptos De pago Tarjeton digital del imss
Conceptos De pago Tarjeton digital del imssConceptos De pago Tarjeton digital del imss
Conceptos De pago Tarjeton digital del imss
 
Resolucion Ministerial 242-2024-MINSA.pdf
Resolucion Ministerial 242-2024-MINSA.pdfResolucion Ministerial 242-2024-MINSA.pdf
Resolucion Ministerial 242-2024-MINSA.pdf
 
LIBRO LA MEJOR PSICOTERAPIA, PROLOGO - copia.pdf
LIBRO LA MEJOR PSICOTERAPIA, PROLOGO - copia.pdfLIBRO LA MEJOR PSICOTERAPIA, PROLOGO - copia.pdf
LIBRO LA MEJOR PSICOTERAPIA, PROLOGO - copia.pdf
 
HIPOCALCEMIA NEONATAL EN PEDIATRIA .pptx
HIPOCALCEMIA NEONATAL EN PEDIATRIA .pptxHIPOCALCEMIA NEONATAL EN PEDIATRIA .pptx
HIPOCALCEMIA NEONATAL EN PEDIATRIA .pptx
 
EDEMA VASCULAR con enfoque en semiologia
EDEMA VASCULAR con enfoque en semiologiaEDEMA VASCULAR con enfoque en semiologia
EDEMA VASCULAR con enfoque en semiologia
 
SEMANA 01 - ASISTENCIA AL USUARIO CON PATOLOGIAS
SEMANA 01 - ASISTENCIA AL USUARIO CON PATOLOGIASSEMANA 01 - ASISTENCIA AL USUARIO CON PATOLOGIAS
SEMANA 01 - ASISTENCIA AL USUARIO CON PATOLOGIAS
 
Contaminación del agua en la ciudad de Arequipa.pdf
Contaminación del agua en la ciudad de Arequipa.pdfContaminación del agua en la ciudad de Arequipa.pdf
Contaminación del agua en la ciudad de Arequipa.pdf
 
Distensibilidad Vascular y funciones de los sist arterial.pptx
Distensibilidad Vascular y funciones de los sist arterial.pptxDistensibilidad Vascular y funciones de los sist arterial.pptx
Distensibilidad Vascular y funciones de los sist arterial.pptx
 
asincronias ventilatorias-ventilacion mecanica
asincronias ventilatorias-ventilacion mecanicaasincronias ventilatorias-ventilacion mecanica
asincronias ventilatorias-ventilacion mecanica
 
2024 GUÍA DE RESPUESTA EN CASO DE EMERGENCIA.pdf
2024 GUÍA DE RESPUESTA EN CASO DE EMERGENCIA.pdf2024 GUÍA DE RESPUESTA EN CASO DE EMERGENCIA.pdf
2024 GUÍA DE RESPUESTA EN CASO DE EMERGENCIA.pdf
 
(2024-09-05) Mutilacion genital femenina (DOC).docx
(2024-09-05) Mutilacion genital femenina (DOC).docx(2024-09-05) Mutilacion genital femenina (DOC).docx
(2024-09-05) Mutilacion genital femenina (DOC).docx
 
Benzodiazepinas en anestesiologia generalidades.pptx
Benzodiazepinas en anestesiologia generalidades.pptxBenzodiazepinas en anestesiologia generalidades.pptx
Benzodiazepinas en anestesiologia generalidades.pptx
 
Diabetes Mellitus 2024 y fisiologia y datos.pdf
Diabetes Mellitus 2024 y fisiologia y datos.pdfDiabetes Mellitus 2024 y fisiologia y datos.pdf
Diabetes Mellitus 2024 y fisiologia y datos.pdf
 
libro Langman Embriologia Medica 14edicion
libro Langman Embriologia Medica 14edicionlibro Langman Embriologia Medica 14edicion
libro Langman Embriologia Medica 14edicion
 
666105651-Farmacologia-Rios-2-Editorial-Sketch-Med-2024.pdf
666105651-Farmacologia-Rios-2-Editorial-Sketch-Med-2024.pdf666105651-Farmacologia-Rios-2-Editorial-Sketch-Med-2024.pdf
666105651-Farmacologia-Rios-2-Editorial-Sketch-Med-2024.pdf
 
(2024-05-07). ANTICONCEPCIÓN EN ATENCIÓN PRIMARIA
(2024-05-07). ANTICONCEPCIÓN EN ATENCIÓN PRIMARIA(2024-05-07). ANTICONCEPCIÓN EN ATENCIÓN PRIMARIA
(2024-05-07). ANTICONCEPCIÓN EN ATENCIÓN PRIMARIA
 
Neurocirugía Hoy, Volume 17, Numero 53__
Neurocirugía Hoy, Volume 17, Numero 53__Neurocirugía Hoy, Volume 17, Numero 53__
Neurocirugía Hoy, Volume 17, Numero 53__
 
PATTON Estructura y Funcion del Cuerpo Humano (2).pdf
PATTON Estructura y Funcion del Cuerpo Humano (2).pdfPATTON Estructura y Funcion del Cuerpo Humano (2).pdf
PATTON Estructura y Funcion del Cuerpo Humano (2).pdf
 

Reporte anomalías estructurales

  • 1. Reporte de Anomalías Estructurales Cromosómicas en Pacientes Referidos al Laboratorio de Citogenética del Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé” Período diciembre 2014-enero 2015 MORALES REYES Claudia Amelia Asesora Externa : Blga. Gamarra Camacho Rosario Asesor Interno : Blgo. Carlos Santa Cruz Carpio Facultad de Ciencias Naturales y Matemática Universidad Nacional Federico Villarreal Lima 2015
  • 2. 2 DEDICATORIA De las generaciones de las rosas que en el fondo del tiempo se han perdido quiero que una se salve del olvido, una sin marca o signo entre las cosas que fueron. A mis padres y hermanos, por el tiempo, amor y comprensión.
  • 3. 3 AGRADECIMIENTOS El presente informe, es el resultado de un conjunto de esfuerzos que no hubieran tenido lugar sin el apoyo incondicional de todos los involucrados en el proceso. Me encuentro agradecida de las autoridades del Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé” y de los médicos y biólogos encargados del Laboratorio de Citogenética, quiénes brindaron el mayor apoyo para la realización de las prácticas. Un agradecimiento especial a Carlos Santa Cruz y Rosario Gamarra, por su tiempo y amable asesoría para la realización de este informe.
  • 4. 4 ÍNDICE Pág. RESUMEN 6 ABSTRACT 7 1. INTRODUCCIÓN 8 2. MARCO TEÓRICO 9 - 11 2.1. CITOGENÉTICA 2.2. CICLO CELULAR 2.2.1. PROFASE 2.2.2. METAFASE 2.2.3. ANAFASE 2.2.4. TELOFASE 2.2.5. CITOCINESIS 2.3. ANOMALÍAS ESTRUCTURALES 2.3.1. DELECIONES 2.3.2. DUPLICACIONES 2.3.3. ANILLOS CROMOSÓMICOS 2.3.4. ISOCROMOSOMAS 2.4. PATOLOGÍAS ASOCIADAS A ANOMALÍAS ESTRUCTURALES 3. MATERIALES Y MÉTODOS 11 - 13 3.1. DISEÑO DE ESTUDIO 3.2. POBLACIÓN DE ESTUDIO 3.3. METOLOGÍA 3.3.1. POBLACIÓN DE ESTUDIO
  • 5. 5 3.3.2. PROCEDIMIENTO 4. RESULTADOS 14- 16 5. DISCUSION 17 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 18 ANEXOS 20
  • 6. 6 RESUMEN La citogenética es hoy en día un campo de mucha ayuda en el estudio de los cromosomas, estudio que en muchos casos nos llevará al encuentro de patologías asociadas a cromosomas anómalos. Estos se refieren a una mala disposición de los cromosomas en alguna de las fases del ciclo celular, dando lugar a aberraciones que, como en el caso del Síndrome Cri du chat, es común encontrar en estudios de cariotipo. El siguiente informe, pretende reportar la metodología empleada para el estudio de cromosomas, dando la habilidad a la autora de poder realizar este tipo de análisis. En total, durante los dos meses de práctica, se analizaron 145 pacientes de ambos grupos etarios, adultos y pediátricos, el 4.23% de los pacientes adultos refiere una anomalía estructural, en el caso de los pacientes pediátricos, las anomalías estructurales solo estuvieron presentes en el 2,7% de pacientes. No se reportan frecuencias de anomalías debido a los pocos casos encontrados, por lo que no se determinan conclusiones. Palabras clave: Cariotipo, cromosomas, anomalías estructurales.
  • 7. 7 ABSTRACT Cytogenetics means today an important field in the study of chromosomes, study which in many cases will lead to the meeting of pathologies associated with abnormal chromosomes. These refer a bad arrangement of chromosomes in any phase of the cell cycle, resulting aberrations as in Cru du chat syndrome are commonly found in karyotype studies. The following dossier are intended to report the methodology used for the study of chromosomes, giving to the author the ability to carry out this kind of test. In total, during the two months of practice, 145 patients of both age groups were analyzed, 4,23% of adults patients relates a structural abnormality, in the other hand the pediatric patients only refer 2,7% of structural abnormalities. No frequencies are reported because of the few cases found, that is why we do not elaborate any conclusion. Key words: Karyotype, chromosomes, structural abnormalities.
  • 8. 8 1. INTRODUCCIÓN La citogenética es el estudio de los cromosomas tanto en número como en estructura, los primeros reportes sobre citogenética humana se dieron al término del siglo XIX cuando Fleming publica en 1982 las primeras ilustraciones del cromosoma humano(1). La citogenética convencional, constituye actualmente una herramienta de gran importancia que permite realizar el diagnóstico cromosómico en pacientes que sugieren ser portadores de alguna cromosomopatía. Las cromosomopatías son enfermedades genéticas causadas por la alteración en uno o varios genes, y éstas pueden ser numéricas como las polipleudías y aneploidías, o estructurales. Estas últimas refieren un tipo distinto de alteración en el cromosoma como deleciones, traslocaciones, inserciones o duplicaciones. Diferentes estudios realizados a nivel mundial, refieren que las alteraciones cromosómicas son más frecuentes en la pareja infértil que en la población general (2). Por otra parte, las causas de la mayoría de defectos congénitos son cromosómicas, así la importancia epidemiológica de los defectos al nacimiento estriba en que se presentan en 2 a 4% de todos los recién nacidos y ocasionan el 20% de muertes ocurridas en el primer año de vida (2). Las anormalidades cromosómicas pueden afectar a los cromosomas autosómicos o sexuales, en las alteraciones estructurales se presentan los rearreglos no balanceados, como las deleciones, duplicaciones, anillos, isocromosomas dicéntricos y marcadores no específicados. Los rearreglos balanceados pueden no identificarse en los individuos, ya que por lo general no alteran el fenotipo (3). Los individuos portadores de rearreglos, poseen un riesgo aumentado de producir gametos no balanceados o de presentar problemas de infertilidad, esterilidad o aborto habitual. Es de suma importancia contar con datos que argumenten los estudios citogenéticos de laboratorio, confirmatorios del diagnóstico clínico, para organizar un manejo integral y multidisciplinario de los pacientes con enfermedades genéticas. En el siguiente reporte, se realiza el estudio de pacientes evaluados en el período diciembre 2014 y enero 2015 en el Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé” , para conocer la incidencia de anomalías estructurales en pacientes de distintos grupos etarios, a continuación se desarrolla el procedimiento y finalmente se presentan las tablas correspondientes a los datos analizados. Se reserva el derecho de anonimato de los pacientes evaluados.
  • 9. 9 2. MARCO TEÓRICO 2.1CITOGENÉTICA La citogenética humana es el estudio de los cromosomas, normalmente en la metafase de la mitosis, debido a que en esta etapa los cromosomas se unen al huso mitótico y se alinean para su mejor visibilidad, como veremos más adelante. Recientemente este estudio ha sido integrado con estudios genómicos y de biología molecular (4). Las aberraciones cromosómicas estructurales son de gran importancia por el riesgo que presentan los portadores de tener descendencia con reordenamientos desbalanceados (5). Las anomalías cromosómicas están presentes en al menos el 10% de todos los espermatozoides y en el 25% de los oocitos maduros. Entre el 15 y 20% de todos los embarazos no llegan a término, debido a que concluyen en abortos espontáneos, la mayoría de estos causados por una anomalía cromosómica (6). Como parte del proceso natural de evolución, cuando estas alteraciones cromosómicas coexisten en las células germinales pueden trasmitirse a los gametos y a la descendencia: en otros casos puede llevar a un arresto en la gametogénesis o al desarrollo de gametos con alteraciones cromosómicas no balanceadas(6). Los fundamentos clásicos para solicitar análisis cromosómico son la comprobación de anomalías citogenética cuando se sospecha por las manifestaciones clínicas, la búsqueda de la causa de malformaciones congénitas múltiples, alteraciones en la diferencia sexual, talla baja, retardo psicomotor o mental y trastornos en el desarrollo del lenguaje en niños afectados (7). 2.2 CICLO CELULAR El ciclo celular engloba un conjunto de sucesos necesarios para la división celular. Consiste en dos fases, Interfase (I) y fase M (M). La interfase consta de la fase de síntesis o fase S, en la que hay duplicación del material genético y la fase G1 y G2, que son fases de intervalo para el incremento del tamaño celular. Por otro lado, en la fase M se reparte a las células hijas el material genético duplicado, a través de la segregación de cromosomas (8). La fase M, ha sido dividida convenientemente para su estudio, es así que tenemos las siguientes etapas: 2.2.1 Profase: los cromosomas (unión de dos cromátides hermanas) se condensan en el núcleo, mientras en el
  • 10. 10 citoplasma se comienza a ensamblar el huso mitótico entre los centrosomas. 2.2.2 Metafase: fraccionamiento de la membrana nuclear, la unión de los cromosomas al huso mitótico, lo que hace de esta fase muy importante para la visibilidad de los cromosomas, y así inmediatamente después se alineen al ecuador de la célula (9) 2.2.3 Anafase: se produce la separación de las cromátidas hermanas, las que darán lugar a dos cromosomas hijos, los que migrarán hacia los polos (9). 2.2.4 Telofase: en esta etapa, ambos juegos de cromosomas llegan a los polos de la célula y adoptan una estructura menos densa, para formar posteriormente una nueva estructura nuclear. Al finalizar esta fase, la división del citoplasma y sus contenidos forman un anillo contráctil (10). 2.2.5 Citocinesis: se divide la célula mediante el anillo contráctil de actina y miosina, produciendo dos células hijas con un juego completo de cromosomas(9). Los cromosomas solo pueden ser estudiados en metafases mitóticas o meióticas, luego de haber concluido la síntesis de DNA, debido a que se observan los cromosomas con las dos cromátidas. 2.3 Anomalías Estructurales En las alteraciones estructurales podemos encontrar rearreglos balanceados y no balanceados. En el caso de los rearreglos no balanceados, encontramos deleciones, duplicaciones, anillos, isocromosomas dicéntricos y marcadores no especificados. Sin embargo los rearreglos balanceados, pueden no identificarse en los individuos, debido a que en la mayoría de casos no alteran el fenotipo, aunque estos últimos son portadores sanos poseen un riesgo aumentado de presentar problemas de infertilidad, esterilidad o abortos habituales (8). 2.3.1 Deleciones: es un tipo especial de anomalía estructural cromosómica, que consiste en la pérdida de un fragmento de ADN de un cromosoma, su origen puede deberse a una sencilla rotura cromosómica y pérdida del segmento acéntrico. Sin embargo, en algunos casos las deleciones son el resultado de un entrecruzamiento desigual entre cromosomas homólogos o cromátidas hermanas mal alineados.
  • 11. 11 2.3.2 Duplicaciones: se refiere a la repetición de un fragmento de cromosoma a continuación del fragmento original. Las duplicaciones surgen por error en la duplicación del ADN, como producto de una reorganización cromosómica de tipo estructural o relacionado con un proceso de sobrecruzamiento defectuoso. 2.3.3 Anillos cromosómicos: puede tratarse de sucesos céntricos o acéntricos, es un reordenamiento desbalanceado, aunque la pérdida del segmento terminal pueda no estar envuelta en material genético viral, las duplicaciones que ocurren en los anillos, a menudo conducen a problemas en la mitosis, acompañadas de continuos cambios en el tamaño y composición del anillo. Las repercusiones en el fenotipo son variables, con signos de trisomías o de deleciones. 2.3.4 Isocromas: se produce una pérdida completa de un brazo de un cromosoma, por la duplicación de otro, es una alteración cromosómica bastante frecuente en el cromosoma X, puede producirse en la primera división meiótica, donde generará material heterocigótico. 2.4 Patologías asociadas a Anomalías Estructurales Es conocido que entre 3 y 5% de niños nacidos presentan una anomalía congénita (3), la gran mayoría de embriones con anomalías cromosómicas no concluyen con embarazo. Dentro de las manifestaciones clínicas asociadas a patologías causadas por anomalías estructurales, encontramos talla baja, retardo mental, dismorfias o alteraciones en el desarrollo sexual. En el Síndrome Cri du chat, se presenta deleción del brazo corto del cromosoma 5. La incidencia es de 1 en cada 50000 recién nacidos. Se observa un llanto característico en el período neonatal, acompañado de bajo peso, pliegues epicánticos, hendiduras palpebrales, microcefalia y retraso mental grave. 3 MATERIALES Y MÉTODOS 3.1 DISEÑO DE ESTUDIO: Por su naturaleza este estudio es descriptivo, de corte transversal y retrospectivo. 3.2 POBLACION DE ESTUDIO Se considerara a pacientes de todas las edades referidos al Laboratorio de Citogenética del Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé”para el estudio de cariotipos en el período diciembre 2014 – enero 2015.
  • 12. 12 3.3 METODOLOGÍA 3.3.1 Población de estudio Se evaluaron pacientes referidos al Laboratorio de Citogenética del Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé”, Lima, Perú, sin restricción de edad, sexo ni raza. Los pacientes niegan haber recibido tratamiento previo (quimioterapia, radioterapia o terapia hormonal). Se entrevistó a cada paciente sobre los datos más relevantes de la historia clínica familiar, con la finalidad de realizar un estudio genealógico en busca de patologías hereditarias que podrían repercutir en la salud del paciente. 3.3.2 Procedimiento A cada paciente se le extrajo en condiciones asépticas, de 2 a 5ml de sangre con una jeringa hipodérmica de 5ml conteniendo heparina como anticoagulante. Luego de extraída la muestra, se dejaron sedimentar para posteriormente utilizar el suero que se encuentra en la superficie. Este se adicionará al frasco de cultivo que contiene el medio de cultivo PBmax, medio diseñado para el crecimiento de líneas celulares diploides, además contiene suero fetal bovino, cuya composición rica en proteínas, enzimas, hormonas, factores de inhibición del desarrollo celular, lípidos esenciales, minerales, metabolitos y nutrientes, lo hacen esencial para la proliferación y producción biológica de células in vitro. El medio debe contener antibióticos (penicilina y estreptomicina), y finalmente contendrá phytohemaglutinina, que posee capacidad mitogénica, es decir induce la mitosis y proliferación. En el medio anteriormente descrito se adicionó 500ul del suero del paciente, esta mezcla es llevada a incubación a 37°C durante 72 horas, con la finalidad de que las células correspondientes a los glóbulos blancos proliferen. Al cabo de 72 horas, se añadió 100ul de colchicina 0.1ng/ml, agente que bloquea la citocinesis, impidiendo la formación del huso mitótico. Posteriormente se llevó a la incubadora a 37°C por 50 minutos, para permitir que las células sean detenidas en metafase. Se centrifugó a 1000RPM por 9 minutos. Se descartó el sobrenadante y se resuspendió el pellet en 6ml de KCl (Cloruro de Potasio), con la finalidad de que las células sean afectadas por un shock hipotónico para lisar los eritrocitos. Luego se llevó a incubar a 37°C por 15minutos, se añadió 10 gotas del fijador Carnoy, solución 3:1 de metanol:ácido acético, y se mezcló con la muestra incubada. Se centrifugó a 1000 RPM por 9 minutos. Se eliminó el sobrenadante y resuspendeió el pellet con 6ml de Carnoy, se mezcló y dejó fijar durante 30 minutos a
  • 13. 13 temperatura ambiente. Este paso se repitió durante tres veces, a modo de lavados. El último pellet obtenido luego de los lavados se resuspendió en 1,5ml del fijador, para su posterior conservación. Las láminas porta objetos fueron lavadas con una mezcla de etanol acetona antes de su uso, con la finalidad de eliminar el exceso de grasa sobre su superficie. Se agregaron de 4 a 5 gotas del pellet resuspendido en la lámina y se seca al mechero. Para el análisis microscópico las muestras fueron teñidas según el método de bandeo G de rutina. Para esta coloración se preparan 3 frascos Koplins conteniendo distintas sustancias: Frasco 1: solución de Tripsina 1% Frasco 2: solución salina fisiológica Frasco 3: colorante Giemsa 4% El frasco 1 se colocó en baño maría a 37° debido a que esta temperatura es óptima para el funcionamiento de esta enzima, se colocan las láminas durante 1 segundo, luego se procedió a enjuagar en el frasco 2 y finalmente se colorearon en el frasco 3 durante 15 minutos. Finalmente se lavaron, se dejaron secar y se observaron al microscopio óptico. 3.3.3 Análisis cromosómico En el microscopio óptico se seleccionaron de 10 a 60 metafases por cada paciente, la diferencia se debió principalmente al bajo porcentaje de metafases obtenidas en algunos pacientes. Las metafases para el diagnóstico tuvieron buena dispersión y morfología, y su análisis se realizó con ayuda del cariotipador. 3.3.4 Análisis estadístico El análisis de los datos de los pacientes evaluados en los meses diciembre 2014 y enero 2015 se realizó tomando de referencia la base de datos secundaria del Laboratorio Citogenética del Hospital Nacional Docente Madre Niño “San Bartolomé”. Llos datos han sido evaluados con el programa Microsoft Excel de Office para Windows.
  • 14. 14 4 RESULTADOS En el período comprendido entre diciembre del año 2014 y enero del año 2015, fueron evaluados en total 71 pacientes adultos, mayores a 18 años, y 74 pacientes pediátricos (desde recién nacidos hasta 17 años). Se encontró 3 casos de anomalías estructurales en pacientes adultos correspondientes a dos pacientes de sexo femenino y un paciente de sexo masculino, como se detalla en la Tabla N°2, se encontró la deleción 46,X,I(X)(q10.q10) y la traslocación 46,XX t(7;17)(p12,q13), mientras que en el paciente masculino se encontró la heterocromatina centromérica 46,XY,16qh+.Las anomalías estructurales encontradas en pacientes pediátricos, son correspondientes a pacientes femeninos como se detalla en la Tabla N°4. Una de las pacientes presenta la deleción 46,X del(X)(q21.1), mientras que la segunda paciente presenta el incremento satelital 46,XX,14psth+,15ps+. Además las Tablas N°1 y Tablas N°3 muestran un resumen de la población evaluada, en la que se detalla los grupos etarios y grupos de género. En el análisis cromosómico se analizaron de 10 a 60 metafases por paciente. Para los cuadros generales con el detalle de todos los pacientes evaluados, ver anexos. Tabla N°1 Reporte de pacientes adultos evaluados N° Pacientes Alteraciones % Femeninos 45 2 2.82% Masculinos 26 1 1.41% Total 71 3 4.23% Tabla N°2 Reporte de Anomalías Estructurales en Pacientes Adultos EDAD SEXO CARIOTIPO ANOMALÍA 37 Femenino 46,X,I(X)(q10.q10) Isocromosoma 29 Femenino 46,XX t(7;17)(p12,q13) Traslocación 39 Masculino 46,XY,16qh+ Heterocromatina centromérica
  • 15. 15 Tabla N°3 Reporte de pacientes pediátricos evaluados N° Pacientes Alteraciones % Femeninos 34 2 2.70% Masculinos 40 0 0 Total 74 2 2.70% Tabla N°4 Reporte de Anomalías Estructurales en Pacientes Pediátricos EDAD SEXO CARIOTIPO ANOMALÍA 17 Femenino 46,X del(X)(q21.1) Deleción 1 Femenino 46,XX,14PSTH+,15PS+ Incremento en satélite Tabla N°5 Reporte de Causas para el estudio de cariotipo en Pacientes Adultos N° Pacientes Causas- Infertilidad % Causas- Ovodoación % Causas- Otros % Femeninos 45 36 50.70% 8 11.27% 1 1.41% Masculinos 26 26 36.62% 0 0 0 0 Total 71 62 87.32% 8 11.27% 1 1.41% Se reportan las causas que sugieren al clínico que el paciente presente una anomalía estructural, se dividen tres grupos en las posibles causas, el primero corresponde a Infertilidad, luego a pacientes que van a someterse a tratamientos por Ovodonación y luego correspondientes a otras causas, como único caso se presenta el temor de los padres a tener hijos con retardo mental (Tabla N°5).
  • 16. 16 Tabla N°6 Reporte de Causas para el estudio de cariotipo en Pacientes Pediátricos N° Pacientes Causas- Retardo mental % Causas- Amenorrea % Causas- Otros % Femeninos 45 11 14.86% 3 4.05% 20 27.03% Masculinos 26 12 16.22% 0 0 28 37.84% Total 71 23 31.08% 3 4.05% 48 64.87% Se reportan las causas que sugieren al clínico que el paciente presente una anomalía estructural, se dividen tres grupos en las posibles causas, el primero corresponde a pacientes con retardo mental, luego a pacientes femeninos que presentan amenorrea y finalmente correspondientes a otras causas que refieren principalmente casos de talla bajo, microcefalia, criptorquidia, cardiopatías congénitas e hipogonadismo (Tabla N°6). En total se analizaron 145 pacientes de ambos grupos etarios, adultos y pediátricos, el 4.23% de los pacientes adultos refiere una anomalía estructural, en el caso de los pacientes pediátricos, las anomalías estructurales solo estuvieron presentes en el 2,7% de pacientes. No se reporta frecuencia de anomalías, debido a que cada caso es único. Es preciso finalizar, recordando que debido al poco tiempo de duración de las prácticas, no se pueden estimar mayores frecuencias por los pocos pacientes encontrados, por lo que el presente pretende informar sobre los casos hallados, esperando sirva para una investigación mayor, y nuestra población pueda en un futuro tener mayor conocimiento de los males genéticos que nos aquejan.
  • 17. 17 5 DISCUSIÓN De acuerdo al reporte de WHO (2008) acerca de enfermedades a nivel mundial, los desórdenes genéticos y congénitos son la segunda causa más común de muerte en infantes y niños, ocurren con una prevalencia de 2,5-6% por nacimientos (11). En este estudio se determinaron varios tipos de anomalías cromosómicas en el estudio de cariotipo realizado a 145 pacientes, divididos en 2 grupos etarios, correspondientes a adultos con edad igual o mayor a 18 años, y pediátricos con edad menor a 18 años desde el nacimiento. Los análisis citogenéticos revelaron baja incidencia de rearreglos estructurales, encontrándose casos únicos por cada anomalía citogenética. De acuerdo al grupo etario, las alteraciones corresponden a pacientes derivados al laboratorio con diversos diagnósticos, en el caso de pacientes adultos a infertilidad (87.32%) y en el caso de pediátricos a casos clínicos de amenorrea (4.05%) y retardo mental (31.08%). Los estudios del cariotipo son confirmatorios para diversos casos de anomalías estructurales, derivados según la etiología que presenta el paciente. Considerables datos estadísticos a nivel mundial, reportan a cuadros clínicos de talla baja y amenorrea primaria o secundaria como consecuencia de anomalías estructurales (12). Los abortos recurrentes se consideran como un problema clínico que aparece en el 10-15% de la población mundial y el 50% de estos son atribuibles a una anomalía estructural cromosómica (13). En parejas con abortos recurrentes, un diagnóstico inicial debe incluir el análisis cromosómico de la pareja, tanto el hombre como la mujer. La anomalía más común es la translocación(14), otra anomalía cromosómica es la inversión en el cromosoma X, provocando la inactivación de este. Estas anomalías fueron observadas en nuestro estudio. Los polimorfismos comunes citogenéticos son detectados por el Bandeo-G, así los heteromorfismos son incluidos en las regiones heterocromáticas de los cromosomas 1, 9, 16 e Y, y también en los brazos cortos prominentes, conocidos como satélites. Los bloques individuales de heterocromatina muestran reacciones específicas con diferentes frecuencias de mutaciones (15). Las duplicaciones, deleciones e inversiones de algunas regiones son causadas por el pareamiento anormal de cromosomas homólogos en la profase de la meiosis I. Las variantes polimórficas de los cromosomas que juegan probablemente un rol de gran importancia en la fertilidad y viabilidad pertenecen a regiones heterocromáticas (16) pero no tienen impacto en el fenotipo(17).
  • 18. 18 6 RESEÑAS BIBLIOGRÁFICAS 1. C. Ravel, J-P. Siffroi. Anomalies de structure du chromosome Y et syndrome de Turner. Gynécologie Obstétrique & Fertilite. 2009;37(2):511–8. 2. Ricardo Hernández Herrera, Luz Rojas Patlán, Rosa Garza Pérez, Martha Dávila Rodríguez, Elva Cortés Gutierréz, Emerson García Rodríguez, et al. Anormalidades cromosómicas en pacientes de un hospital de ginecoobstetricia. Rev Med Inst Mex Seguro Soc. 2014;52(1):90–3. 3. Marta Lucia Bueno. Cromosomas, vehículos en la organización y transmisión de los caracteres. Acta biol Colomb. 2011;16(3):43–60. 4. Xiaoli Yang, Wei Wu, Charles C. Teng. Algorithms for modeling structural changes in human chromosomes. Computer Methods and Programs in Biomedicine. 2013;110(2):171–82. 5. Olga Quiñones Maza, Jorge Quintana Aguilar, Luis Méndez Rosado, Anduriña Barrios Meza, Ursulina Suárez Mayedo, Minerva García, et al. Frecuencias de reordenamientos cromosómicos estructurales acorde a las indicaciones para estudios citogenéticos prenatales y postnatales. Rev Cubana Genet Comunit. 2010;4(3):36–42. 6. Sergio Romero Tovar, Berenice Juárez Espinosa, Carlos Galindo García, Margarita Mendoza Romo, Rafael Sánchez Usabiaga. Prevalencia de alteraciones cromosómicas en pacientes infértiles estudiadas en una clínica de reproducción asistida. Ginecol Obstet Mex. 2009;77(3):128–35. 7. Silvia Castillo, Lorena Tobella, Samuel Salazar, Vera Daher, Patricia Sanz, Fermina López, et al. Alteraciones cromosómicas en niños referidos para estudio citogenético. Rev Chil Pediatr. 1994;65(4):210–4. 8. Alonso Cerezo. Bases cromosómicas de las alteraciones genéticas humanas. Química Clínica. 2007;26(4):224–8. 9. Leonardo Lomanto Díaz, Óscar Ortiz Cala, César Bretón Pinto, Álvaro Gómez Lizcano, Viviana Mesa Cornejo. El ciclo celular. MEDUNAB. 2003;6(16):21–9. 10. José Alvarado Moreno, Héctor Mayani. El ciclo celular y su papel en la biología de las células progenitoras hematopoyéticas. Medigraphic. 2007;143(2):149–61. 11. LJ Estcourt, BJ Bain. WHO Classification of Leukemia. 7.
  • 19. 19 12. Zhao, J, Whistler, RL. Spherical aggregates of starch granules as flavor carriers. Food Technology. 1994;48(7):104–5. 13. M. Rajasekhar, R. Murugesan, Rekharao, H. Shetty, Jyothirao, P. M. Gopinath, et al. Cytogenetic Analysis of 1400 Referral Cases: Manipal Experience. Int J Hum Genet. 2010;10(1):49–55. 14. Andrés Estay, Roxana Parra, Hugo Benítez. Alteraciones cromosómicas en linfocitos de sangre periférica. Rev Chil Pediatr. 2007;78(4):363–8. 15. Verma Ic. Burden of genetic disorders in India. Indian J Padiatr. 2001;68(1):25–39. 16. P. F. Madon, A. S. Athalye, F.R Parikh. Polymorphic variants on chromosomes probably play a significant role in infertility. Reprod Biomed Online. 2005;11(6):726–32. 17. FI Sahin, Z Yilmaz, OO Yuregir, T Bulakbasi, O Ozer, HB Zeyneloglu. Chromosome heteromorphism an impact on infertility. Assist Reprod Genet. 25(2):191–5.
  • 21. 21 Fotografía 2. Detalle de la asepsia para la inoculación del suero en el medio de cultivo. Fotografía 3. Detalle de la inoculación del suero en el medio de cultivo. Fotografía 1. Detalle de la muestra y el medio, primera etapa del proceso.
  • 22. 22 Fotografía 4. Medios de cultivo conteniendo los leucocitos. Fotografía 5. Pelllets obtenidos al final del procedimiento. Fotografía 6. Preparación de láminas con la muestra final.
  • 23. 23 Fotografía 7. Lugar especial en el laboratorio para la coloración de las láminas. Fotografía 8. Detalles de los cromosomas obtenidos, en un paciente pediátrico.
  • 24. 24 Fotografía 9. Detalle del reporte entregado al paciente, en este caso corresponde a un paciente pediátrico con trisonomía 13