1. Esame del liquido seminale WHO 1999 WHO 2009 Loredana Gandini Master Medicina della Riproduzione Abano 25-27 / 03/ 2009

2. 1980 1987 1992 1999 2009

3. WHO Laboratory manual for the examination and processing of human semen Chapter 1 Introduction Part I Semen analysis Chapter 2 Standard procedures Chapter 3 Optional procedures Chapter 4 Research procedures Part II Sperm preparation Chapter 5 Sperm preparation techniques Chapter 6 Cryopreservation protocols Part III Quality Assurance Chapter 7 Quality Assurance and Control Part IV Appendices WHO 2009

4. … with some changes New Format Detailed methods - minimal cross reference to other sections Notes - explanations of methodology Comments - interpretation of results Boxes - additional explanatory material New Chapter Cryopreservation New Appendix Microscopy Reference ranges for semen parameter variables From fertile men with TTP < 12 months … much remains as in WHO 1999: Old concepts Standard - robust procedures for routine variables Optional - may be used in certain situations / by choice of institute Research - tests that are not considered routine WHO 2009

11. STANDARDIZZAZIONE FASE ANALITICA Valutazione del campione

16. STANDARDIZZAZIONE FASE ANALITICA VALUTAZIONE MICROSCOPICA

20. Quante cellule contare : intervallo di confidenza N spermatozoi contati 50 100 150 200 250 300 350 400 450 Percentage 0 25 50 75 100 125 150 intervallo di confidenza al 95% 1.96 x %SE % Errore Standard (%SE) 10 CR 120%  0.4 – 1.6  20 - 80 CR 20% CR 28% CR 40% in 50 µl (50x10 3 ) 45 - 55  43 - 57  40 - 60  per 1x10 6 /ml 0.9 - 1.1  0.86 - 1.14  0.8 - 1.2 

23. Dilute semen 1+1 mit Formalin + Hoechst 33342 dye Fluorescence microscopy Leja 100 µm deep disposable chamber

25. WHO 1999 WHO 2009 Immotile Grade d IM Non-progressive Grade c NP Progressive PR -slow Grade b optional -fast (> 25 µm/s at 37°C) Grade a optional STANDARDIZZAZIONE FASE ANALITICA MOTILITA’ Valutare solo : spermatozoi immobili, non-progressivi e progressivi LA VALUTAZIONE DELLA VELOCITÀ PUÒ ESSERE INACCURATA

27. TEST DI VITALITA’

33. WHO 2009 cosa viene raccomandato ??? Riportare solo le forme morfologiche normali Valutare il preparato 2 volte Cambiamenti nella dimensione a fresco più piccoli Forza di distorsione espansione delle teste immature Insulto osmotico perdita di residui citoplasmatici ATTENZIONE AGLI ARTEFATTI !!!

34. WHO 2009 Valori di norma Valori di Riferimento

35. Distribuzione normale: Media e DS Distribuzione asimmetrica: Mediana e Percentili La distribuzione dei parametri seminali non è simmetrica ma asimmetrica

36. Un approccio alternativo per descrivere dati come questi è l’uso della MEDIANA. La MEDIANA è quel valore rispetto al quale, metà dei valori della popolazione risultano superiori e l’altra metà inferiori Dal momento che il 50% della popolazione cade al di sotto della mediana , questa è anche chiamata 50° percentile Si possono utilizzare il 5° e il 95° o indifferentemente il 5°, 25°, 50° e il 95° percentile

37. WHO year 1987 1992 1999 2009 designation normal normal reference Percentiles (non-parametric methods) 2.5 5 50 95 97.5 Semen vol. (ml) 2.0 2.0 2.0 1.2 1.5 3.7 6.8 7.6 Total numbers (M) 40 40 40 23 39 255 802 928 Sperm conc. (M/ml) 20 20 20 9 15 73 213 259 Progr. motility (%) 50 50 50 28 32 55 72 75 Vitality (%) 50 75 75 53 58 79 91 92 Normal forms (%) 50 30 (15) 2 3 11 21 24 WHO 2009 Valori di Norma , valori di Riferimento Valori di Riferimento : 8 Paesi, 3 Continenti IN FUTURO : studiare varianti geniche Uomini giovani fertili – meno di 12 mesi dalla gravidanza

38. Valori di Riferimento del Vol misurato in ml: descritti da mediana e percentili (metodi non-parametrici) Curva asimmetrica a destra VOLUME

39. Valori di Riferimento della Concentrazione misurata in milioni / ml Concentrazione/ml

40. Valori di Riferimento della Concentrazione misurata in milioni / eiaculato Concentrazione/Eiac.

41. Valori di Riferimento della Motilità misurata in % di motilità progressiva Motilità Progressiva

42. Valori di Riferimento della Morfologia misurata in % di forme normali Forme normali

43. WHO year 1987 1992 1999 2009 designation normal normal reference Percentiles (non-parametric methods) 2.5 5 50 95 97.5 Semen vol. (ml) 2.0 2.0 2.0 1.2 1.5 3.7 6.8 7.6 Total numbers (M) 40 40 40 23 39 255 802 928 Sperm conc. (M/ml) 20 20 20 9 15 73 213 259 Progr. motility (%) 50 50 50 28 32 55 72 75 Vitality (%) 50 75 75 53 58 79 91 92 Normal forms (%) 50 30 (15) 2 3 11 21 24 WHO 2009 Valori di Norma , valori di Riferimento Valori di Riferimento : 8 Paesi, 3 Continenti IN FUTURO : studiare varianti geniche Uomini giovani fertili – meno di 12 mesi dalla gravidanza

44. Normozoospermia Numero totale di spermatozoi, percentuale di motilità progressiva (PR) e morfologia nella norma, al di sopra del limite di riferimento più basso Oligozoospermia Numero totale di spermatozoi al di sotto del limite di riferimento più basso Astenozoospermia Percentuale di motilità progressiva (PR) al di sotto del limite di riferimento inferiore Teratozoospermia Percentuale di spermatozoi con forme normali al di sotto del limite inferiore di riferimento WHO 2009 Nomenclatura seminale