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La extracción de ADN de Legionella es
especialmenteproblemática cuandodistintostipos
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Cleanpid® Easy Purification kit es un
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concentra la muestra en un pequeño
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PCR
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ADN libre (exógeno).
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potencialmente viables, proporcionando una reducción de
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Triptico Cleanpid Easy Purification Kit

  • 1. Minimice el coste de... Resultados No Concluyentes Inhibición de la detección Matrices complejas Microbiota Cleanpid® le proporciona la muestra purificada que necesita para la mejor detección de Legionella Biótica Bioquímica Analítica S.L. ParqueCientíficoTecnológicoyEmpresarial delaUniversidadJaumeI Campus Riu Sec - Espaitec 2 planta baja, Laboratorio 2 12071 - Castellón de la Plana Tel.:+34964108131Fax:+34964737790 info@biotica.es www.biotica.es La extracción de ADN de Legionella es especialmenteproblemática cuandodistintostipos de microorganismos o inhibidores pueden estar presentes en la muestra de agua. Limpie su muestra y trabaje sólo con Legionella. Cleanpid® Easy Purification kit es un método simple para separar y purificar Legionella en muestras de agua
  • 2. La PCR es sensible a las sustancias inhibidoras, que pueden estar presentes en la muestra ambiental y afectar la sensibilidad del ensayo o incluso producir falsos negativos. Además, para detectar Legionella, se concentra la muestra en un pequeño volumen y esto resulta en una concentración de los inhibidores y de su interferencia con la PCR. Diluir la muestra o el ADN extraído comporta diluir los inhibidores pero también disminuye la sensibilidad. El descarte de los inhibidores de PCR en un paso mediante Cleanpid permite obtener una gran cantidad de ADN de las muestras de agua y evitar la dilución, ayudando en consecuencia a reducir los falsos negativos. Mezcle las partículas captoras con la muestra en el tubo por pipetting repetido y suave. Incubar 60 min con agitación suave. Introduzca el tubo en el soporte magnético para separar las partículas. Descarte el sobrenadante y reserve el pellet. Resuspendaelpelleteneltampónde trabajoporpipettingrepetidoysuave. Retenga de nuevo las partículas y descarteelsobrenadante(3x). Cleanpid® mejora la sensibilidad y reproducibilidad de la qPCR Reduccióndelosfalsospositivosdela PCR Reduccióndelosfalsosnegativosdela PCR El falso positivo se debe a que la PCR cuantifica el ADN total de Legionella en una muestra, no sólo el que procede de células vivas, sino también el de células muertas o dañadas, y también el ADN libre (exógeno). El falso positivo podría también ser debido a la reactividad cruzada del ensayo de PCR con otros microorganismos acompañantes en la muestra. La separación selectiva de células intactas mediante Cleanpid centra la detección en el ADN de las células de Legionella potencialmente viables, proporcionando una reducción de falsos positivos. Número de ciclos de amplificación Ct Número de tests Contenido del kit Funcionalidad Tiempo Dedicación Robustez Instrumentación específica Almacenamiento Reactivos para 50 test (Ref. 611-10-00) Reactivo de captura, Tampón de trabajo El organismo purificado es adecuado para la extracción de ADN mediante ciclos de frío/calor (método simple y eficiente de lisis) 60 minutos para cualquier número de muestras Rápido y fácil de usar Resultados reproducibles y consistentes El kit sólo requiere un soporte magnético 2 - 8ºC Partículasmagnéticasquecapturanlas célulasdeLegionella (separacióninmunomagnética) c maracterísticastécnicas entajasétodo tubo complejos partícula Legionella imán Resuspender las partículas magnéticas Ciclos Frío/Calor Retención magnética Partículas magnéticas Sobrenadante(ADN) Listo para PCR! Schrader C, Schielke A, Ellerbroek L and Johne R: PCR inhibitors – occurrence,propertiesandremoval.2012,JournalofAppliedMicrobiolo- gy, 113, 1014—1026.doi:10.1111/j.1365-2672.2012.05384.x ANTES DESPUÉS 40 35 30 25 20 15