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© J. L. Sánchez Guillén
                          1
I) Técnicas para el estudio fisicoquímico: sirven para conocer la
    composición y relacionar esta composición con las estructuras
    celulares. Estos métodos son:

    a)   Destilación
    b)   Filtración
    c)   Decantación
    d)   Centrifugación
    e)   Cromatografía
    f)   Electroforesis

II) Técnicas para el estudio morfológico de la célula. Nos permiten
     conocer cómo es su forma, su tamaño y su estructura. Son,
     fundamentalmente:

    a) Microscopía óptica
    b) Microscopía electrónica
        1) Microscopio electrónico de Trasmisión (MET)
        2) Microscopio electrónico de barrido (MEB)


                                                                      2
Destilación: Sirve para separar por evaporación y conden-
sación posterior, dos liquidos miscibles.




                                                            3
Decantación: Sirve para separar, por ejemplo, mezclas de
líquidos no solubles de densidad diferente.




                                                           4
FILTRACIÓN: Separa la fase líquida de la parte sólida.




                                                         5
Homogeneizador
Se trata de un aparato que sirve
para triturar y disgregar el material
biológico, rompiendo las
membranas celulares para dejar
libres los orgánulos y el resto del
contenido celular para posteriores
tratamientos.




                                        6
Centrifugación: Los materiales biológicos sometidos a fuertes
aceleraciones se desplazan hacia el fondo de los recipientes que los
contienen con velocidades que dependen de su masa, de su forma y
volumen, y de la naturaleza del medio en el que se realice la
centrifugación.




                                                                       7
8
9
Cromatografía sobre papel
Cromatografía sobre papel
Cromatografía sobre papel
Cromatografía de gases




                         13
ELECTROFORESIS
 En este método, la mezcla a separar se deposita en una cubeta sobre un
soporte de tipo poroso (acetato de celulosa o también gel de almidón). A
continuación se establece una diferencia de potencial entre los extremos del
soporte. Las sustancias que componen la mezcla se desplazarán en función
de su carga eléctrica.




                                                                               14
Cultivos in vitro:




  Bacterias en cápsulas de Petri


                                   Frascos para cultivos celulares




                                                                     15
16
El microscopio
electrónico,
desarrollado a
mediados del siglo
XX, permite más de
100 000 aumentos




                     17
Fundamento del microscopio óptico y del microscopio electrónico


                                                                       imagen
       Cañón de
       electrones
                                                             o
                 c


    electrones
                                                             b

                                       objeto                          objeto

                 b



    visor                                                    c
                 o
                                                             luz

                                  imagen


             Microscopio electrónico            Microscopio óptico



c) condensador; b) objetivo; o) ocular.                              interruptor
                                                                             18
Diferencias entre el microscopio óptico y del microscopio electrónico

          Microscopio óptico                Microscopio electrónico

     Fuente de iluminación: La luz     Fuente de iluminación: electrones

       Se pueden ver seres vivos        No se pueden ver los seres vivos

        Poco aumento (X1000)              Mucho aumento (X300 000)

        Se observa la estructura          Se observa la ultraestructura

        Preparaciones sencillas            Preparaciones complejas

     Aparato relativamente barato            Instrumento muy caro




                                                                           19
Unidades de medida en microscopía


1 micrometro*= 1 µm = 0,001 mm (milésima de milímetro)
1 nanometro = 1 nm = 0,000 001 mm (millonésima de milímetro)
1 amstrong = 1 Å = 0,1 nm (diez millonésima de milímetro)


* También se llama micra




                   Tamaños usuales en microscopía


átomo = 1 Å
virus = 25 nm a 300 nm
bacteria =1 µ
Célula = 10 µm a 100 µm


                                                               20
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B10 metodos pdf1

  • 1. © J. L. Sánchez Guillén 1
  • 2. I) Técnicas para el estudio fisicoquímico: sirven para conocer la composición y relacionar esta composición con las estructuras celulares. Estos métodos son: a) Destilación b) Filtración c) Decantación d) Centrifugación e) Cromatografía f) Electroforesis II) Técnicas para el estudio morfológico de la célula. Nos permiten conocer cómo es su forma, su tamaño y su estructura. Son, fundamentalmente: a) Microscopía óptica b) Microscopía electrónica 1) Microscopio electrónico de Trasmisión (MET) 2) Microscopio electrónico de barrido (MEB) 2
  • 3. Destilación: Sirve para separar por evaporación y conden- sación posterior, dos liquidos miscibles. 3
  • 4. Decantación: Sirve para separar, por ejemplo, mezclas de líquidos no solubles de densidad diferente. 4
  • 5. FILTRACIÓN: Separa la fase líquida de la parte sólida. 5
  • 6. Homogeneizador Se trata de un aparato que sirve para triturar y disgregar el material biológico, rompiendo las membranas celulares para dejar libres los orgánulos y el resto del contenido celular para posteriores tratamientos. 6
  • 7. Centrifugación: Los materiales biológicos sometidos a fuertes aceleraciones se desplazan hacia el fondo de los recipientes que los contienen con velocidades que dependen de su masa, de su forma y volumen, y de la naturaleza del medio en el que se realice la centrifugación. 7
  • 8. 8
  • 9. 9
  • 14. ELECTROFORESIS En este método, la mezcla a separar se deposita en una cubeta sobre un soporte de tipo poroso (acetato de celulosa o también gel de almidón). A continuación se establece una diferencia de potencial entre los extremos del soporte. Las sustancias que componen la mezcla se desplazarán en función de su carga eléctrica. 14
  • 15. Cultivos in vitro: Bacterias en cápsulas de Petri Frascos para cultivos celulares 15
  • 16. 16
  • 17. El microscopio electrónico, desarrollado a mediados del siglo XX, permite más de 100 000 aumentos 17
  • 18. Fundamento del microscopio óptico y del microscopio electrónico imagen Cañón de electrones o c electrones b objeto objeto b visor c o luz imagen Microscopio electrónico Microscopio óptico c) condensador; b) objetivo; o) ocular. interruptor 18
  • 19. Diferencias entre el microscopio óptico y del microscopio electrónico Microscopio óptico Microscopio electrónico Fuente de iluminación: La luz Fuente de iluminación: electrones Se pueden ver seres vivos No se pueden ver los seres vivos Poco aumento (X1000) Mucho aumento (X300 000) Se observa la estructura Se observa la ultraestructura Preparaciones sencillas Preparaciones complejas Aparato relativamente barato Instrumento muy caro 19
  • 20. Unidades de medida en microscopía 1 micrometro*= 1 µm = 0,001 mm (milésima de milímetro) 1 nanometro = 1 nm = 0,000 001 mm (millonésima de milímetro) 1 amstrong = 1 Å = 0,1 nm (diez millonésima de milímetro) * También se llama micra Tamaños usuales en microscopía átomo = 1 Å virus = 25 nm a 300 nm bacteria =1 µ Célula = 10 µm a 100 µm 20
  • 21. 21