Avaluació d'un nou reactiu comercial per la confirmació de la infecció per t.cruzi (malaltia de chagas)

1. AVALUACIÓ D’UN NOU REACTIU COMERCIAL PER LA CONFIRMACIÓ DE LA
INFECCIÓ PER TRYPANOSOMA CRUZI (MALALTIA DE CHAGAS)
M. ANGELS MUÑOZ, EVA BLANCO, MARTA BES, SILVIA SAULEDA , MARIA PIRON
LABORATORI DE SEGURETAT TRANSFUSIONAL, BANC DE SANG I TEIXITS. BARCELONA
OBJECTIU
La Malaltia de Chagas és una malaltia infecciosa i inflamatòria provocada pel paràsit protozou
Trypanosoma cruzi (TC). És endèmica a 21 països d'Amèrica Llatina. El cribratge dels donants de
sang de risc és obligatori a Espanya desde 2005 per prevenir la transmissió de la infecció per transfusió
sanguínia.
L’objectiu és avaluar el nou reactiu comercial CHAGAS Western blot (WB) LDBIO Diagnostics de detecció
d’IgG enfront TC comparant amb els mètodes actualment utilitzats al BST. El reactiu Chagas Western
blot està dissenyat com test confirmatori d’un resultat inicial reactiu observat en una tècnica de
cribratge, conté antígens (Ag) natius del paràsit TC transferits a bandes de nitrocel·lulosa.
MATERIAL I MÈTODE
El reactiu presenta tires individuals de nitrocel·lulosa que
contenen antígens (Ag) natius de TC prèviament separats per
electroforesi i transferits a la superfície de la membrana de
nitrocel·lulosa, 10 mL de sèrum de cada mostra s’incuba per
separat amb una tira, els anticossos IgG enfront a TC
presents a la mostra es detecten després de un procés de 4h
(Figura 1).
61 mostres (donants reactius al cribratge i prèviament
caracteritzats) van ser analitzades amb el reactiu CHAGAS
WB, adaptat a l’analitzador automàtic Auto-LIPA (FUJIREBIO).
Els resultats es van comparar amb els resultats obtinguts
prèviament amb el reactiu de Bioelisa Chagas (Biokit, conté
Ag recombinants enfront TC) i el Elisa T. cruzi Test Systems
(Ortho Diagnostics, conté Ag natius), mètodes utilitzats
conjuntament per confirmar el resultat del cribratge.
RESULTATS
De les 61 mostres testades 37 mostres han sigut negatives, 23 mostres positives i 1 indeterminada
(Figura 2). La concordança amb el mètode Elisa Ortho, també basat en Ag natius, ha sigut del 88,5%
(29+4+4+17)/61), més alta que la concordància del 80% observada amb el mètode Bioelisa Biokit,
basat en Ag recombinants.
CONCLUSIONS
El WB és un test immunoblot qualitatiu de diagnòstic serològic (IgG) i es proposa com a únic test
confirmatori d’un resultat inicial reactiu al cribratge, per substituir els dos mètodes utilitzats actualment.
FIGURA 1: Imatge de mostres reactives i no reactives
per CHAGAS WB.
A la Esquerra están representats els controls POS i NEG
de la tècnica.
La presència simultània de dos bandes ben definides entre
P15-16, P21-22, P27-28, P42 i P45-47 indica la
presència d’anticossos específics anti-Trypanosoma cruzi.
FIGURA 2: Quadre concordances entre diferents tècniques utilitzades
Dues mostres han sigut positives amb el
CHAGAS WB però negatives amb les
altres dues tècniques confirmatòries
(Fig.2 a).
Una mostra ha donat negativa quan
havia donat positiva amb les altres dues
tècniques confirmatòries (Fig.2 b). La
Figura 3 presenta els resultats observats
amb aquestes 3 mostres. Les dues WB
POS/Ortho NEG són del mateix donant
que presenta mostres anteriors amb
resultat positiu per Ortho, amb valors
molt a prop del cut-off. La mostra WB
NEG/Ortho POS presenta uns valors de
S/CO molt prop al llindar de positivitat
establert, i només una banda del WB
positiva. Seria interessant poder avaluar
una nova mostra d’aquest donant B.
BIOKIT ORTHO NEG IND POS
POS NEG NEG 29 0 2a
POS NEG POS 3 0 4
POS POS NEG 4 1 0
POS POS POS 1b
0 17
WBCRIBRATGE
ARCHITECT
FIGURA 3: Detalls dels resultats de les mostres discordants de la fig.2. Donant A:
diferents dies d’extracció. Donant B: una única mostra
Donant Data mostra ARCHITECT BIOKIT ORTHO P45-47 P42 P27-28 P21-22 P15-16
A 23/05/2016 POS 1,51 NEG 0,06 POS 0,93 POS+/- NEG POS+/- NEG NEG
06/07/2016 POS 1,48 NEG 0,09 POS 0,98 POS+/- NEG POS+/- NEG NEG
03/08/2017 POS 1,34 NEG 0,12 NEG 0,73 POS+/- NEG POS+/- NEG NEG
28/02/2018 POS 1,22 NEG 0,07 NEG 0,74 POS+/- NEG POS+/- NEG NEG
B 13/10/2016 POS 1,84 POS 1,66 POS 1,39 NEG NEG POS+/- NEG NEG
S/CO observat per cada tècnica Lectura WB