Utilisation du modèle de coculture cellules endothéliales humaines/P. falciparum pour l'analyse de la pathogénicité des isolats plasmodiaux - Conférence de la 5e édition du Cours international « Atelier Paludisme » - Fousseyni TOURE - CIRMF, Franceville, Gabon - fousseyni@yahoo.fr
Utilisation du modèle de coculture cellules endothéliales humaines/P. falciparum pour l'analyse de la pathogénicité des isolats plasmodiaux
1. Utilisation du modèle de co-culture
cellules endothéliales/Plasmodium
falciparum pour l’étude de la
pathogénicité des isolats plasmodiaux
CIRMF & INSERM 511
Fousseyni Touré-Ndouo, A Siau, O Oukem, U Bisvigou, O Moussa, S Bisser, D Mazier
3. Séquestration au cours du neuropaludisme
Flux sanguin
Autoagglutination
des HP
1 2
1
Blocage mécanique
des capillaires
Cytoadhérence des HP Rosette
cytokines proinflammatoires (1),
toxines (2).
Modèle Lékana-Douki et al. 2003
4. Apoptose
P. falciparum 3D7 (souche de laboratoire)
induit l’apoptose de la cellule endothéliale
pulmonaire humaine par contact physique
(cytoadhérence)
Pino et al. 2003
6. Objectifs spécifiques
• Analyser la capacité des isolats plasmodiaux à
cytoadhérer et à induire des modifications (apoptose
etc.) de la cellule endothéliale
• Etablir une corrélation entre ces modifications et
l’état clinique des patients
• Identifier les ligands et récepteurs impliqués dans la
pathogénicité pour la perspective vaccinale et/ou
thérapeutique
7. Matériels et méthodes
Recrutement de patients, collecte de
données cliniques et d’ isolats plasmodiaux
Culture de cellules endothéliales
pulmonaires humaines (HLEC)
Maturation des isolats P.f
Co-cultures HLEC-Isolats P.f
Réalisation des tests (cytoadhérence,
ELISA apoptose, préparation des ARNm,
DNA microarray ou Biopuce)
8. Collection des isolats plasmodiaux et formes sanguines
Goutte épaisse A Goutte épaisse B
680.000 anneaux / l de sang 250.000 trophozoïtes / l de sang
17. L’apoptose n’est pas associée à la
gravité du paludisme (p=0,11)
Les isolats apoptotiques se rencontrent
aussi bien dans les cas simples que
dans les cas sévères
18. L’apoptose est associée aux signes neurologiques
Fisher exact test p= 0,02
Isolats Pf Apoptose Critères de sévérité
(OMS 2000)
F3 + Prostration
F31 + Prostration
F69 + Coma
F32 + Hyperparasitémie
F37 - Hyperparasitémie
F42 - Hyperparasitémie
F53 - Hyperparasitémie
F62 - Prostration
F63 - Hyperparasitémie
F26 - Anémie
23. Recherche PlasmoDB
Ces gènes codent en grande majorité
pour des antigènes de surface dont
certains sont impliqués dans la
cytoadhérence
24. Résumé
• Environ 20% des isolats plasmodiaux de
Franceville (Gabon) induisent l’apoptose de
la cellule endothéliale
• L’apoptose est associée aux signes
neurologiques
• 23 gènes associés à la pathogénicité des
isolats plasmodiaux ont été identifiés
25. Perspectives
• Expression d’antigènes recombinants
correspondant à certains de ces gènes
• Analyses immunologiques (recherche de
candidats vaccins potentiels)
• Co-culture cellules endothéliales
cérébrales/P. falciparum
26. Remerciements (1)
• Patients et leurs parents
• Hôpital AMISSA BONGO
• CIRMF
• INSERM 511
27. Remerciements (2)
• Directeur de l’Institut Pasteur de
Madagascar
• Initiateurs et organisateurs de l’Atelier
Paludisme
• Peuple Malgache