bordetella, pasteurella, legionella

1. 1
Dr. Antonio Vásquez Hidalgo, Ph.D.
Médico/ Microbiólogo/Salubrista / Scientific Research/Catedrático
UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
Depto de Microbiología
Facultad de Medicina

2. Manejo NIVEL DE BIOSEGURIDAD III Y IV
2
………………….… BEFORE TO DIE
Bordetella
III
IV

3. I: Genero Bordetella
Bordetella
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4. Bordetella pertussis
• Aerobico estricto, Gramnegativo cocobacilos. 0.2 a 0.5 micras,
muy pequeño, único o pares , racimos, inmov.
• Alcaligenaceae Familia.
• Especifico para humanos.
• Coloniza tracto respiratorio
– Tos exagerada (Pertussis)
• No fermentadores HIDRATOS DE CARBONO.
Bordetella
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5. 7 especies. 3 son del humano:
1. Bordetella pertussis: tosferina
2. Bordetella parapertussis: leve
3. Bordetella bronchiseptica.: animales. Única especie móvil.
• Son bacterias gramnegativas, cocobacilos ,aerobias y
anaerobias facultativas, no productoras de esporas, con
fimbrias, capsulados .
Bordetella
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6. 6

7. Factores de virulencia
Bordetella
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8. Virulencia.
• I. ADHESINAS.
• -Inicia e inhibe la fagocitosis.
• -Toxina pertussis. La subunidad S2 se une a los glucolipidos en la
superficie de las células respiratorias.
• -Fimbrias. Se une a las células de los mamíferos.
• II: TOXINAS.
• -Toxina pertussis. Inhibe SU muerte por fagocitosis e impide la
migración de los monocitos.
• -Toxina dermonecrotica. Produce lesiones cutáneas.
• -Citoxina traqueal. Estimula la fiebre ( interleucina-1).
• -Lipopolisacarido. Estimula la liberación de citocinas.
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Bordetella

9. Toxinas
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Bordetella

10. Características diferenciales especies.
Bordetella
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11. Transmisión
• Muy contagioso.
• Transmisión vía respiratoria principalmente.
Bordetella
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12. Bordetella pertussis
B. bronchiseptica
Bordetella
Medio de cultivo debe tener
carbón, almidón, sangre o
albúmina. Incubación prolongada
de 7 días.
Colonias puntiformes, lisas,
convexas, brillantes, casi
transparentes de aspecto
perlado.
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13. Fisiopatogenia.
• El microorganismo llega al tracto respiratorio y se adhiere a la
superficie epitelial (cilios) de la tráquea y bronquios.
• Esta unión esta mediada, fundamentalmente, por la hemaglutinina,
aunque también intervienen la pertactina, las fimbrias y la toxina
pertusis.
• Allí se multiplica con rapidez e interfiere con la acción ciliar pero
no invade la sangre.
• Produce toxinas y sustancias que irritan las células superficiales
(toxina dermonecrotica, citotoxina traqueal) produciendo tos y
linfocitosis. La citotoxina traqueal produce también ciliostasis, por lo
que se altera la defensa mucociliar.
• Aparecen zonas de necrosis en el epitelio e infiltración
polimorfonuclear, inflamación peribronquial y neumonía
intersticial.
• Los bronquios más pequeños se obstruyen con moco y producen
atelectasia y disminución de la oxigenación, lo cual determina la
aparición de convulsiones.
• La toxina pertusis y la adenilato ciclasa son capaces de inhibir a las
células fagocíticas.
• Una complicación tardía en algunos casos es la encefalitis.
Bordetella
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Bordetella pertussis en epitelio
ciliado

15. Patogenia
• La patogenia de la enfermedad depende de cuatro etapas:
• 1.Fijación o adherencia.
• 2.Evasión de defensas del huésped,
• 3. Daño local al tejido
• 4. Enfermedad sistémica.
• La aparición de la enfermedad, que implica la unión al epitelio respiratorio,
la existencia de lesiones locales y la absorción sistémica de toxinas depende
de la alteración y desaparición de los mecanismos de defensa del huésped
(cilios y neutrófilos).
• En realidad, la bacteria no atraviesa las capas epiteliales, es la toxina la que
ingresa al torrente sanguíneo y produce los efectos locales o sistémicos .
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Bordetella

16. 16
Hemaglutinina filamentosa. B. pertussis tienen la capacidad de adherirse a
los cilios del epitelio respiratorio. El mecanismo de adherencia se relaciona con
una proteína denominada hemaglutinina filamentosa la cual es capaz de
aglutinar diversos tipos de eritrocitos.

17. Epidemiología
• Es una enfermedad endémica de distribución
mundial, con brotes epidémicos cada 4 años.
• Es mas frecuentes en el sexo femenino y en los
meses más fríos del año.
• Los niños menores de 7 años son los mas
predispuestos a la enfermedad y en los menores
de 2 se observa el mayor numero de casos
fatales.
• La enfermedad se adquiere por vía respiratoria al
inhalar las pequeñas gotitas de secreciones
respiratorias producidas en forma de aerosoles
al toser el enfermo.
• La enfermedad es más transmisible durante la fase
catarral, pero es posible la transmisión hasta tres
semanas después del inicio de la etapa paroxística.
• Se consideran que los adultos con formas leves o
atípicas de la enfermedad e incluso asintomático
son los principales reservorios de la misma.
Bordetella
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Bordetella

19. Exámenes de laboratorio.
• (NIVEL DE BIOSEGURIDAD III)
• Cultivos: medio Bordet-Gengou otro Medio de Regan-Lowe con
carbon mas glicerol, peptonas y sangre de caballo.
• Técnica anticuerpos fluorescentes directos
• Pruebas serologicas: dificil.
• Pruebas de Aglutinación.
• ELISA.
• Prueba cutánea: eritema,edema e induración.
La muestra optima es un aspirado
nasofaríngeo o Biopsia.
Bordetella
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20. 20

21. • Muestras: lavado nasal con solución salina, hisopados nasofaringeos,
gotitas de tos expectoradas en lamina portaobjetos colocada frente a la
boca del paciente.
• Cultivo: se realiza en medios enriquecidos (Bordet Gengou), que
contienen antibióticos para inhibir la flora respiratoria. La identificación
se realiza por medio de coloración inmunofluorescente o aglutinación en
portaobjetos con el antisuero especifico.
• Diagnóstico rápido: Inmunofluorescencia directa se puede realizar
directamente de las muestras, pero la sensibilidad es del 60 %.
• Las pruebas serológicas no tienen valor diagnóstico ya que los anticuerpos
aumentan durante la tercera semana de la enfermedad.
Bordetella
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22. PCR
• PCR. Sensibilidad 100 %
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Bordetella

23. Obtención de la muestra
• Nasofaringe por aspiración o con hisopo (de dacrón o alginato-calcio ?),
• Transporte en medio de cultivo (Regan-Lowe modificado).
• Medio de cultivo especial (Bordet y Gengou o agar Regan-Lowe
modificado).
• Requiere que se tome la muestra de nasofaringe por lavado nasal o con
hisopo de dacrón; deben evitarse los hisopos de alginato de calcio ya que
inhiben la PCR.
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Bordetella

24. Medio Regan Lowe
• El medio Regan-Lowe Agar es un medio selectivo utilizado para el
aislamiento de Bordetella pertussis de muestras clínicas.
• MEDIO. En este medio, el extracto de carne y la peptona de gelatina
proporcionan nutrientes. El almidón y el carbón adsorben los ácidos grasos
tóxicos, los radicales y peróxidos, reemplazando la infusión de patata por el
agar del Bordet-Gengou.
• La Niacina es una vitamina que favorece el crecimiento. La sangre
de caballo proporciona factores de crecimiento complejos y reduce aun más
el efecto tóxico de los peróxidos.
• Se añade Cefalexina como agente selectivo para suprimir parcialmente la
flora normal de las vías respiratorias.
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Bordetella

25. Cultivo
• En cultivo, son microorganismos bastante exigentes, por lo que el
aislamiento de Bordetella requiere medios de cultivo enriquecidos con
ácidos grasos saturados y sangre, preparación llamada agar de Bordet-
Gengou. La temperatura de cultivo óptima está comprendida entre 35 y 37
°C. Los cultivos necesitan la presencia de nicotinamida y de derivados
sulfurados, como la cisteína y factores X y V.
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Bordetella

26. Características del crecimiento.
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Bordetella

27. 27
Bordetella

28. 28
Bordetella

29. 29
Enfermedades clínicas.
Bordetella

30. Prevención y control
• Inmunización activa . Vacuna. Bordetella pertussis
• Pasiva de madre a hijo es baja.
• DPT toxoide diftérico y tetánico, pertussis.
• Tratamiento en personas inmunizadas portadoras .
• Evitar contacto con enfermos .
• Existe profilaxis especifica con la vacuna elaborada con bacterias
muertas.
• Se administra conjuntamente con el toxoide diftérico y el tetánico, a los
2, 4 y 6 meses, y luego refuerzos a los 18 meses y a los 5-6 años.
• También se puede realizar quimioprofilaxis con Eritromicina durante 5
días a los contactos no inmunizados de enfermos con Tos ferina.
Bordetella
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31. II. GENERO BRUCELLA
La brucelosis es una enfermedad infecciosa producida por el género
brucella. Es una zoonosis (antropozoonosis) transmisible
ocasionalmente al hombre a partir de animales infectados, los cuales
eliminan gran número de bacterias a través de los genitales, la
leche y las heces.
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32. Generalidades
• Marston 1861 .
• Malestar general,
anorexia, fiebre,
debilidad muscular
• Bang en 1897 abortos
infecciosos.
• Enf. Zoonótica que
producen enf. en el
humano.
• Enf. Brucelosis.
Brucella
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33. • Actualmente seis especies :
1. melitensis cabras,ovejas
2. abortus bovinos
3. suis cerdos
4. ovis
5. neotomae ratas
6. canis perros, zorros y coyotes
Brucella
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34. 34

35. Morfología.
• Bacilos gramnegativos pequeños, cocobacilos. 0.5 a 1.5 micras. No
encapsulados e inmóviles.
• Aislados o en grupo.
• M.o crece lentamente en cultivo.
• Aerobio estricto. No fermenta hidratos de carbono.
• Patógeno intracelular resistente.
Brucella
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36. Fisiología .
• Producen catalasa +.
• Oxidasa positivos. (Significa que la bacteria si posee citocromo C
oxidasa, usa oxigeno en la producción de energía ).
• Crecimiento lento.
• Medios complejos : suero, sangre.
• Aerobios estrictos.
• No fermenta carbohidratos.
Brucella
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37. 37
Reactivo de oxidasa

38. Patogenia.
• No produce ninguna exotoxina y su endotoxina es
menos toxica.
• Parásito intracelular del sistema retículo endotelial.
• Induce la formación de granulomas en bazo, hígado
y medula ósea.
• EPIDEMIOLOGIA.
• Contacto directo por exposición, ingestión e
inhalación.
• Endémica en Latinoamérica.
• Bioterrorismo por inhalación.
• Produce esterilidad, abortos o portadores
asintomáticos.
• Abunda en leche, orina.
Brucella
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39. • Epidemiología.
• Distribución universal. Mediterráneo, Asia Occidental, algunas partes de
África y América (Costa Rica, Estados Unidos, México, Brasil, Perú,
Colombia, Uruguay y Argentina).
• Frecuente en Latinoamérica
• Contacto con animales o sus productos
• Inhalación personal de laboratorio
• Ingestión oral. Leche contaminada
• Guerra bacteriológica por inhalación.
Brucella
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40. • La brucelosis es una enfermedad
que puede afectar a cualquier
órgano o sistema. No hay ninguna
agrupación síndrómica que sea
específica.
• El período de incubación es de 1-8
semanas (o más). Los síntomas
aparecen comúnmente 1 a 2 meses
después de la exposición. Se
presenta de forma aguda en un 50%
de los casos y subaguda en el resto.
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Brucella

41. Brucella
Enf brucelosis.
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Brucella

42. Exámenes de laboratorio
• NIVEL DE BIOSEGURIDAD III
• Muestras: varias muestras de sangre para hemocultivos.
• Muestras de leche.
• METODO DIRECTO.
1. Cultivo bacteriológico.
2. Tipificación.
3. PCR para la identificación de especie.
• METODO INDIRECTO
1. Prueba de Aglutinación Rosa de Bengala (RB)
2. Prueba de Fijación del Complemento (FC)
3. Técnica Inmunoenzimatica Indirecta (ELISA-i) .
4. Prueba de Fluorescencia Polarizada para la detección de anticuerpos contra
Brucella abortus en suero de bovinos y búfalos. 42
Brucella

43. 43
Brucella

44. …..Exámenes de laboratorio
• Cultivo: agar sangre, agar MacConkey. Hemocultivo.
• Reacción positiva para oxidasa y ureasa.
• PCR.
Brucella
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45. 45
Brucella

46. Colonias
• 2-7 mm de diámetro.
• Colonias lisas traslucidas homogéneas y rugosas opacas,
granulares o pegajosas.
• 2-5 días.
• Húmedas, traslúcidas, opalescentes
• B. abortus 5-10 % CO2.
• Las bacterias se transportan hasta el bazo, hígado y medula
ósea, ganglios linfáticos y riñones.
Brucella
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47. • Prevención y control
• Control de la enfermedad en el ganado
• Vacunación en animales cepa rugosa de RB51 de Brucella abortus
• VACUNAS VIVAS ATENUADAS.****
• Incineración de animales infectados
• No existe vacuna para el humano
Brucella
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48. III: GENERO PASTEURELLA
Género que comprende distintas especies de patógenos primarios de
animales. Únicamente la especie Pasteurella multocida produce
infecciones en el hombre.
Las infecciones locales: celulitis, abscesos, osteomielitis son
las más frecuentes.
48
Pasteurella

49. 49
Pasteurella

50. • Cocobacilos gramnegativos.
• No móviles.
• Aerobios o anaerobios facultativos.
• Crecen con facilidad.
Pasteurella
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51. • Producen catalasa y oxidasa positivos.
• Bucofaringe de animales sanos
• Mordeduras y arañazos de gatos y perros en 50 %.
• Alimentos compartidos.
• COCOBACILOS.
Pasteurella
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52. • Especies de Pasteurella
• P. multocida (muchos asesinatos): infección en mordeduras,
enfermedad pulmonar crónica, bacteremia meningitis. Mas
frecuente aislada en humanos.
• P. canis : infección en mordeduras por contacto con perros.
Pasteurella
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53. Cultivos
• Agar sangre y agar chocolate
Pasteurella en AgarS con luz transmitida no hemólisis
Pasteurella
colonias redondas y grisaseas con
diámetro de 1 a 3 mm lisas o
rugosas.
53
No hemolisis
Pasteurella

54. • 24 horas de incubación .
• MORFOLOGIA. Colonias grandes, aspecto mantequilloso,
redondas grisáceas, lisas.
• Olor producido por el indol.
• Son fermentadoras DE GLUCOSA.
• Oxidasa positivos. (Significa que la bacteria si posee citocromo c oxidasa, usa
oxigeno en la producción de energía ).
Pasteurella
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55. Otras
pruebas.
• 1. PCR
• 2. ELISA
55
Pasteurella

56. Epidemiología
Flora normal en animales.
P. multocida en nasofaringe del
gato, amígdalas de perros.
Prevención
• Lavar la herida, evitar la sutura.
• limitar contacto con animales
salvajes y domésticos.
Pasteurella
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Septicemia hemorrágica

57. IV. GENERO LEGIONELLA
La legionelosis o legionella es una enfermedad bacteriana de
origen ambiental, parecida a una neumonía, que afecta de dos
a tres veces más a hombres que a mujeres y es rara en niños.
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Legionella

58. • Se compone de un genero legionella.
• Brote de neumonía Legión americana en Filadelfia 1976
• Legionella pneumophila . 85% infecciones.
• Tinción defectuosa .
• No crece en medios de cultivo habituales.
• Saprofito acuático ubicuo.
• Resiste 139 días en agua destilada .
• Parásitos intracelulares facultativos: crecen en macrófagos
alveolares.
• Especies móviles catalasa positivas.
• 48 especies y mas 70 serogrupos.
Legionella
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59. • Morfología
• Bacilos gramnegativos delgados y pleomorfos ( bacilos,
cocobacilos ).
• Fucsina en lugar de safranina.
• No son fermentadores.
• Serotipos 1 y 6 mas frecuentes.****
Legionella
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60. Fisiología.
• Aerobias obligadas. Bacilos gramnegativos
delgados y pleomorfos.
• Exigentes.
• No fermentadores.
• Móviles.
• Catalasa positivas. Licuan gelatina. producir
enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas)..
• Obtienen energía del metabolismo de aa
• No reducen nitratos ni hidrolizan urea.
• Necesitan l-cisteina y sales de hierro para
su crecimiento.
Legionella
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61. • Captan Fe de los medios o la célula huésped.
• Evitan la fusión del fagosoma.
• Se replica en macrófagos alveolares.
• Proliferan en vacuola intracelular y producen enzimas
proteolitica, fosfatasas, lipasas y nucleasas que matan a la
célula anfitriona.
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62. Exámenes de laboratorio
• Microscopía: se tiñen mal al gram.
• Prueba de Anticuerpos fluorescentes.
• Prueba de Amplificación de ácidos nucleicos.
• Cultivos : Agar CBYE (agar tamponado con extracto de
levadura de carbón)****
Legionella
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63. Cultivos
• Medios complejos CBYE ( agar extracto levadura y carbón ).
• La enzimoinmuno análisis EIA.
• Crecen lentamente, 3 días.
• Color, azul, rosa, translúcidas.
Legionella
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64. • Patogenia
• Parásito intracelular facultativo.
• Fagocitado por neutrófilos y macrófagos pulmonares.
• Prolifera en leucocitos.
• No fusión de fagosoma con lisosomas.
• Daño pulmonar por enzimas celulares del huésped. Proliferación
intracelular.
Legionella
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65. Epidemiología
• Mundial. Humedad favorece.
• Factores ambientales y del paciente. Prolifera en aguas, ríos, lagos, torres de
refrigeración y aire acondicionado, duchas bañeras.
• Fumadores, inmunodeprimidos, alcohólicos.
• Diálisis, trasplante renal.
• Suministros de agua potable, aire acondicionado.******
Legionella
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66. Prevención y control
• No se pueden eliminar del ambiente.
• Uso de cloro y desinfectantes en sistema de agua.
• Tratamiento del agua.
Legionella
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67. … gracias
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