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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA 
FACULTAD DE CIENCIAS 
INFORME Nº 2 
TEMA : “ CURVA ESPECTRAL Y LEY DE BEER ” 
CURSO : INSTRUMENTACION QUIMICA I 
PROFESOR (A) : ISRAEL JIMENEZ 
ALUMNO(S) : POMA LLANTOY VICTOR RAÚL 
FECHA DE REALIZACIÓN : 08-09-2009 
FECHA DE PRESENTACIÓN : 15-09-2009 
2009
1.- OBJETIVOS : 
 Graficar las curvas espectrales y determinar los máximos de absorción 
 Determinar la longitud de onda de máxima absorción 
 Graficar la correspondiente curva de calibración 
Determinar la cantidad de la correspondiente sustancia absorbente ( analito) 
2.- MARCO TEÓRICO: 
2.1.- Introducción 
Un método espectrofotométrico está basado en la medida directa de la absorción de 
radiación electromagnética por parte de una muestra, cuantificable a través de la 
Absorbancia, y la correlación de esta variable con la concentración de la especie de interés 
en dicha muestra. 
Todo analito molecular tiene la capacidad de absorber ciertas longitudes de onda 
características de la radiación electromagnética. En este proceso, la radiación es 
transferida temporalmente a la molécula y, como consecuencia, disminuye la intens idad 
de la radiación . Dicha disminución, debida a la absorción experimentada por el analito, 
puede ser cuantificada utilizando diversas magnitudes, siendo la Absorbancia , A , la más 
comúnmente utilizada en la espectrofotometría de UV-VIS. Dicha absorbancia se define 
por la expresión: 
donde A es la Absorbancia, P0 la potencia del haz de radiación incidente y P la potencia 
de dicho haz tras atravesar la muestra. 
2.2.- Ley de Beer 
De acuerdo con la ley de Beer, la absorbancia está relacionada linealmente con la 
concentración de la especie absorbente, c, y con la longitud de la trayectoria de la 
radiación en el medio absorbente o camino óptico, b. Esto es: 
donde a es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. Cuando la 
concentración c se expresa en moles por litro, y b en centímetros, la constante de 
proporcionalidad se denomina absortividad molar, y se designa por el símbolo e, y, puesto 
que la absorbancia es una magnitud adimensional, tendrá unidades de L cm-1 mol-1. En 
este caso, la ley de Beer adquiere la forma: 
2.3.- Transmitancía y Absorbancia 
Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide 
perpendicularmente sobre una disolución de un compuesto químico que absorbe luz o 
cromóforo, el compuesto absorberá una parte de la radiación incidente (Ia) y dejará pasar 
el resto (It), de forma que se cumple: Io = Ia + It
La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz 
transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad 
de luz que incidió sobre ella, Io, y se representa normalmente en tanto por ciento: 
% T = It/Io x 100 
La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y 
transmitida al pasar por la muestra. La relación entre %T y la concentración no es lineal, 
pero asume una relación logarítmica inversa. 
La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica 
la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en 
consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/ Io. 
Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 
100% e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces 
A vale log 1 = 0. 
La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a través de la 
solución del cromóforo y de la concentración de éste. 
2.4.- Espectros de absorción 
Un espectro de absorción es una representación gráfica de la absorbancia de un analito (o 
de otra magnitud equivalente) en función de la longitud de onda de la radiación , l , 
(o de otro parámetro relacionado con la energía de la radiación utilizada). El máximo de 
absorbancia obtenido en el espectro de absorción de un analito, nos dará la longitud de 
onda que proporciona la mayor sensibilidad posible, y por tanto será la que se utilizará en 
el análisis espectrofotométrico de dicho 
analito. Todas las disoluciones que presentan color, absorben radiación electromagné t ica 
perteneciente al espectro visible, el cual puede dividirse en varias zonas según se muestra 
en la tabla 
siguiente:
En dicha tabla, la columna del "color" indica la porción del espectro que es absorbida, 
mientras que la correspondiente al "color complementario" indica la porción de radiación 
electromagnética que no absorbe la muestra y que por tanto es transmitida a través de ella 
y puede ser captada por el ojo humano (color de la disolución). Así, por ejemplo, una 
disolución de color amarillo absorbe la radiación de color azul, y por tanto cabe esperar 
que presente un máximo de absorbancia en la zona de longitud de onda en la banda de 
435-480 nm 
3.- PARTE EXPERIMENTAL 
3.1 .- Materiales 
 Espectrofotómetro UV-Visible-1201V-SHIMADZU, con celdas de 1cm 
 
 05 fiolas 
 01 bureta de 50 ml 
 01 Vaso de 50 ml 
 02 vasos de 100ml 
 01 bagueta 
 01 piceta 
3.2 .- Reactivos 
 Permanganato de potasio ( KMnO4).. 3X10-4 M 
 Acido sulfúrico concentrado ( H2SO4) 18M 
 Acido sulfúrico 0.1 M 
3.3 .- Procedimiento Experimental 
Preparación de soluciones 
 Se preparo una solución de KMnO4 3X10-4 M. Añadiendo H2SO4 (CC) antes del 
enrase 
 Se preparo una solución de H2SO4 0.1 M 
Curva espectral 
 Desde la bureta se agrego 5 ml de la solución de KMnO4 a una fiola de 25 ml y 
se enraso con un cierto volumen de H2SO4 0.1 M 
 Se vació una pequeña cantidad de esta solución a la celda espectrofotométrica 
y se registro respecto al blanco las absorbancias, usando longitudes de onda en el 
rango de 400 a 620 nm
 Las mediciones realizadas fueron tomadas de la siguiente manera: 10 en 10 
nm de 400-500 nm, 5 en 5nm de 500-560 y nuevamente de 10 en 10nm de 500- 
560 nm 
Corrección de absorbancia 
 Se llenaron las 2 celdas con la solución de H2SO4 0.1 M hasta unos ¾ de su 
altura. Se toma una de ellas como el blanco y se midió la absorbancia de la otra 
como muestra. Se repitió el procedimiento girando la celda 180°. 
Curva de calibración 
 Desde la bureta se agregó 2,4,6,8 y 10 ml de la solución de KMnO4 a fiolas 
diferentes de 25 ml marcadas previamente con las letras E1,E2,E3,E4,E5 
respectivamente, luego se enrasaron dichas fiolas con H2SO4 0.1 M por ultimo 
se registro las absorbancias de cada uno de estos estándares a una longitud 
de onda que es la de máxima absorción 
4.- TABULACION DE DATOS OBTENIDOS Y GRAFICOS 
4.1.- Datos 
Preparación de soluciones 
Tabla N°1 
Masa del KMnO4 0.01185g 
Volumen de agua para diluir el H2SO4(cc) 5.55 ml 
4.2.- Curva espectral 
Tabla N°2 
Absorbancia λmax (nm) 
0.126 528.5 
0.119 548.5 
4.3.- Curva de calibración 
Tabla N°3 
Soluciones Absorbancia λ (nm) 
[E1] = 0.24 x10-4 M 0 0 
[E2] = 0.48x10-4 M 0 0 
[E3] = 0.72 x10-4 M 0.049 
0.052 
549.5 
529.5 
[E4] = 0.96 x10-4 M 0.159 
0.167 
548.5 
529.5 
[E5] = 1.20 x10-4 M 0.202 
0.212 
548.5 
529.5
0.161 512.5 
Tabal Nº 4 
L(nm) ABS 
410 0.006 
420 0.006 
430 0.009 
450 0.013 
460 0.023 
480 0.035 
500 0.088 
520 0.115 
530 0.127 
540 0.12 
550 0.112 
570 0.078 
580 0.041 
590 0.016 
600 0.007 
620 0.006 
4.4.- graficos : 
Grafico Nº 1 
curva espectral del permanganato 
ABS max(0.126) 
0.14 
0.12 
0.1 
0.08 
0.06 
0.04 
0.02 
0 
λmax =528.5 
400 450 500 550 600 650 700 
A 
B 
S 
O 
R 
B 
A 
N 
C 
I 
A 
LONGITUD DE ONDA (nm)
Curva de calibración 
Tabla N°5 
Soluciones Absorbancia λ (nm) 
[E1] = 0.24 x10-4 M 0 0 
[E2] = 0.48x10-4 M 0 0 
[E3] = 0.72 x10-4 M 0.049 
0.052 
549.5 
529.5 
[E4] = 0.96 x10-4 M 0.159 
0.167 
548.5 
529.5 
[E5] = 1.20 x10-4 M 0.202 
0.212 
0.161 
548.5 
529.5 
512.5 
Tabla Nº 6 
Concentracion M Absorbancia 
0.24 0 
0.48 0 
0.72 0.049 
0.96 0.159 
1.2 0.202 
CURVA DE CALIBRACION DEL PERMANGANATO 
y = 0.2463x - 0.0911 
R² = 0.909 
0.25 
0.2 
0.15 
0.1 
0.05 
0 
-0.05 
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 
ABSORBANCIA 
CONCENTRACION 10-4 M
Tabla Nº 7 
Concentración M Absorbancia 
0.24 0 
0.48 0 
0.72 0.052 
0.96 0.167 
1.2 0.212 
0.25 
0.2 
0.15 
0.1 
0.05 
0 
CURVA DE CALIBRACION DEL PERMANGANATO 
 Para calcular las curvas de calibración se convierte las concentraciones de 
cada solución en ppm y μg/100ml 
Tabla N°8 
Concentración ppm μg/100ml 
[E1] = 0.24 x10-4 M 1.318 131.8 
[E2] = 0.48x10-4 M 2.637 263.7 
[E3] = 0.72 x10-4 M 3.956 395.6 
[E4] = 096 x10-4 M 5.274 527.4 
[E5] = 1.20 x10-4 M 6.597 659.7 
Ahora graficamos las curvas de calibración: 
y = 0.2463x - 0.0911 
R² = 0.909 
-0.05 
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 
ABSORBANCIA 
CONCENTRACION 10-4 M
Tabla Nº 9 
ppm Absorbancia 
0 0 
3.956 0.052 
5.274 0.167 
6.597 0.212 
CURVA DE CALIBRACION DEL PERMANGANATO 
Tabla Nº 10 
y = 0.032x - 0.0189 
Concentracion ABS 
0 0 
395.6 0.049 
527.4 0.159 
659.7 0.202 
0.25 
0.2 
0.15 
0.1 
0.05 
0 
-0.05 
0 1 2 3 4 5 6 7 
ABSORBANCIA 
CONCENTRACION ppm
0.25 
0.2 
0.15 
0.1 
0.05 
0 
CURVA DE CALIBRACION DEL PERMANGANATO 
5.- CALCULOS ANALÍTICOS 
Ley de Beer: A= bc 
Despejando: 
A 
bc 
  
A: Absorbancia 
b : Paso óptico= 1cm. 
C: concentración de la solución de permanganato de potasio ( 0.0003M ) 
Amax = 0.126 
Entonces: ξ = A / b. c = 0.126 / ( 1 cm ). ( 0.0003 M ) 
ξ = 410.0 ( 1 1 .   M cm ) 
y = 0.0003x - 0.0181 
-0.05 
0 100 200 300 400 500 600 700 
ABSORBANCIA 
CONCENTRACION μg/100mL
Determine los siguientes datos estadísticos: coeficiente de correlación r, la recta de 
regresión de y sobre x y limite de detección (LDD) del método. 
Resumen 
Estadísticas de la regresión 
Coeficiente de correlación 
múlt iple 0.99792586 
Coeficiente de determinación 
R^2 0.995856023 
R^2 ajustado 0.994474697 
Error t ípico 0.007879337 
Observaciones 5 
ANÁLISIS DE VARIANZA 
Grados de 
libertad Suma de cuadrados 
Promedio de los 
cuadrados F Valor crítico de F 
Regresión 1 0.044758948 0.044758948 720.942239 0.000113359 
Residuos 3 0.000186252 6.2084E-05 
Total 4 0.0449452 
Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% 
Intercepción -0.013081701 0.008263087 -1.583149271 0.21154625 -0.039378532 0.013215131 
Variable X 1 2465.80125 91.83491597 26.85036758 0.00011336 2173.541561 2758.060939 
  x x  y y 
 
 
 
 
    
2 
1 
2 2 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
  
 
 
 
 
 
 
 
  
 
  
i 
i 
i 
i 
i 
i i 
x x y y 
r 
y = 2391.7x - 0.0057 
R2 = 0.9962 
0.35 
0.3 
0.25 
0.2 
0.15 
0.1 
0.05 
0 
0.00E+00 2.00E-05 4.00E-05 6.00E-05 8.00E-05 1.00E-04 1.20E-04 1.40E-04 1.60E-04 
Y 
Variable X 1 Curva de regresión ajustada 
Y 
Pronóstico para Y 
Linear (Y)
Calculando el Límite de Detección (LDD): 
La ecuación de la regresión y = 2391.7x - 0.0057 
Calculando el Y = YB + 3SB 
YB = 0.0057 para X = 0 
El Limite de detección es SB = Sy/x 
Entonces Y = YB + 3 Sy/x ... (1) 
Calculando la desviación estándar Sy/x : 
1 
2 
 
 
y  
y 
y : valor pronosticado n :numero de datos. En nuestro caso n=5 
Sy/x = 0.007879337 Desviación estándar debido a la regresión. 
En (1): 
Y = 0.0057 + 3 x (0.007879337) 
Y = 0.02934 
Remplazando en la ecuación de la regresión: 0.02934= 2391.7x - 0.0057 
Entonces el LDD es 
6.- DISCUSIONES: 
X 1.465x10 5   
5 X 1.465x10  
En esta practica se tomo en cuenta la corrección de la absorbancia de la celda por lo 
tanto los datos que obtenemos del espectrofotómetro tendrán mínima desviación del 
valor verdadero. 
De los resultados obtenidos de la rectas de regresión notamos q el valor de R2 o R 
son aproximadamente la unidad lo q nos da una buena aproximación a la recta 
pronosticada. Esto es, tenemos una buen recta de calibración para calcular la 
concentración de una muestra problema cuya matriz es similar a la preparadas en 
nuestro laboratorio, 
7.- RECOMENDACIONES: 
  2 
/ 2 
ˆ 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
n 
s i 
i 
y x
La precisión de las medidas de absorbancia depende mucho del uso y del 
mantenimiento que se haga de las celdas. Las huellas dactilares, la grasa u otras 
señales sobre las paredes de las celdas alteraran notablemente las características de 
transmisión. Por ello es recomendable una limpieza completa antes y después de su 
uso; la superficie de las ventanas no debe tocarse durante su manipulación. Las 
cubetas contrastadas nunca deben secarse mediante la acción del calor, en un horno 
o sobre una llama este tratamiento puede causar daños físicos o cambios en el camino 
óptico. Las cubetas deberían calibrarse regularmente entre si con una disolución 
absorbente. 
La luz monocromática tiene "un solo color" (una longitud de onda). Aunque es 
imposible producir luz monocromática, cuanto mejor es el monocromador más 
estrecho es el intervalo de longitudes de onda del haz emergente. 
8.- CONCLUSIONES : 
9.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICA: 
- Skoog, D. A. y West, D. M., Análisis Instrumental, McGraw Hill, 1993 
- Meloan, Clifton y Kiser, Robert, Problemas y Experimentos en Anális is 
Instrumental, editorial Reverte Mexicana, S. A., 1973 
- Miller, J. C. Y Miller, J. N., Estadística para Química Analítica, Adisson-Wesle y 
Iberoamericana, 1999. 
10.- CUESTIONARIO 
1. Son pocas las excepciones a la relación línea entre la absorbancia y la longitud de 
trayecto a una concentración fija. Sin embargo es frecuente que se observen 
desviaciones respecto de la proporcionalidad directa entre la absorbancia y 
concentración cuando la longitud de trayecto b es constante. Entre ellas tenemos: 
desviaciones reales, desviaciones instrumentales y desviaciones químicas. Describa 
cada una de éstas desviaciones. 
Las desviaciones a la Ley de Beer caen en tres categorías: reales, instrumentales y 
químicas. Dichas desviaciones pueden ser positivas ; si la absorbancia medida es mayor 
que la real (+ ) o negativas (-) si la absorbancia medida es menor que la real , y llevan a 
que no se obtengan relaciones lineales entre la absorbancia y la concentración. 
Las desviaciones reales : provienen de los cambios en el índice de refracción del sistema 
analítico, pues como e depende del índice de refracción de la muestra, la ley de Beer sólo 
se cumple para bajas concentraciones, en donde el índice de refracción es esencialme nte 
constante, ya que no es la absortividad la que es constante sino la expresión: 
e = e verdadero h /(h 2+2)2 
donde h es el índice de refracción de la solución. 
Las desviaciones instrumentales provienen, en primer lugar de la utilización de luz no 
monocromática, ya que la pureza espectral del haz de radiación proveniente de la fuente, 
depende del ancho de banda espectral del monocromador. La deducción de la ley de Beer
supone radiación monocromática y los monocromadores en realidad proporcionan una 
banda de longitudes de onda. 
Cuando se hace una medida de transmitancia con luz de varias longitudes de onda, l' ,l'' 
... la intensidad del haz que emerge de la solución de muestra será ( Il' + Il'' ...) y la 
intensidad del haz que emerge de la celda de referencia será ( I0l' + I0l '' ...) por lo que la 
transmitancia leída será : 
T = ( Il' + Il'' ...) / ( I0l ' + I0l'' ...) = ( Il' + Il '' ...) / ( I0l '10-e'bc + I0l ''10-e''bc...) 
Entonces, la ley de Beer puede cumplirse con pequeños intervalos de error, si la variación 
de la absortividad con la longitud de onda es constante en el intervalo de longitudes de 
onda que el selector del instrumento deja pasar, siempre que el ajuste de la longitud de 
onda nominal sea muy reproducible. 
En el máximo de la curva del espectro de absorción, el coeficiente de absortividad cambia 
más lentamente que en el resto de la banda, igualmente la sensibilidad a la concentración 
es mayor en el máximo de la banda de absorción, porque la absortividad tiene el valor 
máximo en ese punto. Es por esto, que normalmente se selecciona la longitud de onda en 
el máximo de la banda para realizar las medidas espectrofotométricas cuantitativas. 
Se presentan también desviaciones instrumentales por luz desviada, entendiendo por 
esta, la luz de otras longitudes de onda que se superponen a la banda de luz utilizada . 
Cuando en los instrumentos se fija una longitud de onda nominal ,lx, el ancho de banda 
espectral del monocromador condiciona la banda de luz que pasa, que corresponderá a la 
región lx ± D l llamada región de la luz útil. La intensidad de esta banda de luz disminuirá 
cuando ocurra la absorción de luz por parte de la muestra, al igual que puede disminuir la 
intensidad de la luz desviada, sobre todo para l Ð 230 nm. 
La luz que proviene de la celda de referencia induce una corriente fotoeléctrica en el 
detector al igual que la luz que proviene de la muestra pero la luz desviada también induce 
una corriente adicional en el detector, lo que lleva a una transmitancia falsa, T'' , que tiene 
el valor: 
T'' = ( I + If ) / ( I0 + If ) donde If es la intensidad de la luz desviada. 
Las desviaciones químicas a la ley de Beer también se llaman desviaciones aparentes 
porque dependen de la naturaleza química del sistema en estudio y si se trabaja bajo 
ciertas condiciones ( pH, concentración de reactivos, etc. ) es posible hacer que el sistema 
cumpla dicha ley. Las desviaciones son causadas, generalmente, por equilibrios en 
solución que involucran a la especie absorbente y alteran su concentración originando 
desviaciones positivas o negativas. 
Si alguna reacción química que ocurra en el sistema origina un producto que absorba más 
fuertemente que la sustancia ensayada, a la longitud de onda a la cual se hace la medida 
o longitud de onda analítica, se producirá una desviación positiva. Si, al contrario, se 
origina un producto que no absorbe a la longitud de onda analítica, la concentración de la 
sustancia se verá disminuida y se originará una desviación negativa. 
Entre los tipos de reacciones químicas que llevan a desviaciones de la ley de Beer están: 
reacciones de asociación-disociación, reacciones ácido-base, reacciones de 
polimerización, reacciones de formación de complejos y reacciones con el solvente. 
2. Evalúe las cantidades restantes de la tabla adjunta. Cuando sea necesario use 200 
como masa molar del analito.
Solución A %T 
b (cm) 
C 
 (Lmol-1cm- 
1) 
a (ppn-1cm-1) M ppm 
0,172 
0,52 
0,798 
0,179 
44,9 
39,6 
83,6 
11,1 
5,23 
4,23x103 
7,95x103 
3,73x103 
1,35x104 
9,78x103 
0,0258 
0,0912 
1.00 
1,00 
0,100 
1,00 
1,50 
1,00 
1,35x10-4 
1,71x10-4 
8,07x10-6 
7,07x10-5 
7,19x10-5 
1,76 
33,6 
5,24 
Solucion: 
Solución A %T 
b 
(cm) 
C 
 (Lmol- 
1cm-1) 
a (ppn-1cm-1) M ppm 
0,172 
0.348 
0,52 
0.40 
0.064 
0,078 
0,798 
0,954 
0,281 
0,179 
67,3 
44,9 
30,2 
39,6 
86,3 
83,6 
15,9 
11,1 
5,23 
66,2 
4,23x103 
5.15 x103 
7,95x103 
18,3 x103 
3,73x103 
9,67x103 
3,16x103 
1,35x104 
9,78x103 
2,49 x103 
0.0210 
0,0258 
0.0400 
0,0912 
0,0187 
0,0484 
0.3155 
0,0688 
0,0486 
0,0124 
1.00 
0.50 
1,00 
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8.20 
27.0 
13.0 
1,76 
34,2 
1,61 
33,6 
14,14 
5,24 
14,38 
3. Un compuesto X se determina mediante espectrofotometría UV/visible. Se prepara 
una curva de calibración a partir de las soluciones patrón de X, con los resultados 
siguientes: 0,50 ppm, A=0,24; 1,5 ppm, A=0,36; 2,5 ppm, A=0,44; 3,5 ppm, A=0,59 
y 4,5 ppm, A=0,70. Halle la pendiente e intersección de la curva de calibración, el 
error estándar de y, la concentración de la solución X desconocida que reporta una 
absorbancia de 0,5. 
C(ppm) Absorbancia 
0.5 0.24 
1.5 0.36 
2.5 0.44 
3.5 0.59 
4.5 0.7
Solución desconocida X: absorbancia=0.5 
Reemplazando en la ecuación de la grafica: 0.5=0.115 x + 0.1785 
X= 2.79 ppm 
Entonces la concentración de la solución desconocida es 2.79 ppm. 
Error estándar de y: 
1 
2 
  2 
 
 
 
 
 
y  
y 
s i 
 
 
i 
y x 
/ 2 
ˆ 
 
n 
Sy /x= {0.133/3}1/2 = 0.2107 
 
 
 
 
 
4. Un método de análisis de Fe3+ que puede ser usado para una variedad de matrices, 
forma complejos altamente coloreados de Fe3+-ácido tioglicólico. El complejo 
absorbe fuertemente a 535 nm. La estandarización del método es difícil usando 
estándares internos. Un estándar de trabajo con 10.00 ppm de Fe+3 es preparado 
transfiriendo 10 mL de una solución stock de 100 ppm de Fe+3. Estándares de 
calibración de 1.00, 2.00, 3.00, 4.00, and 5.00 ppm son preparados para luego 
transferir cantidades apropiadas de solución stock de 100.00 ppm en una fiola 
volumétrica de 50 mL conteniendo cada una 5mL de ácido tioglicólico, 2mL de 20 
w/v de citrato de amonio y 5mL de 0.22M NH3. Después de diluir a un volume n 
determinado y mezclar, los valores de absorbancia de los estándares externos son 
medidos vs un blanco de trabajo apropiado. Las muestras son preparadas para anális is 
tomando una porción de aproximadamente 0.1 g de Fe+3 , disolviendo con una mínima 
cantidad de HNO3 y diluir a un volumen de 1L en una fiola volumétrica. 1 mL de 
alícuota es la cantidad que es transferida a una fiola de 50 mL, con 5 mL de ácido 
tioglicólico, 2 mL de 20% w/v de citrato de amonio y 5 mL de 0.22 M de amoniac o
y diluido a volumen. La absorbancia de la solución es usada para determinar la 
concentración de Fe+3 en la muestra. 
(a) Cuál es el blanco apropiado para esta muestra 
(b) Citrato de amonio es agregado para prevenir la precipitación de Al+3. Cómo afectará 
la presencia de trazas de Fe+3 en citrato de amonio en la concentración reportada de 
Fe en la muestra. 
(c) Porqué el procedimiento usa una cantidad de aproximadamente 0.1g de Fe+3 en la 
muestra 
(d) Es desconocido para el analista, que 100 mL volumétricos del estándar de trabajo de 
Fe+3 con 10.00 ppm tiene un volumen significativamente menor que 100.00 mL 
Cómo se afectaría la concentración reportada de Fe+3 en la muestra 
5. Se desarrolló un método espectrofotométrico para análisis de analgésicos conteniendo 
aspirina, fenacitina y cafeína, La muestra es disuelta en CHCl3 y extraída con una 
solución acuosa de NaHCO3 para remover la aspirina. Después de terminar la 
extracción, el cloroformo es transferido a una fiola volumétrica de 250 mL y diluido 
a volumen de CHCl3. Una porción de la solución de 2 mL con CHCl3 es diluida a un 
volumen de 200 mL con CHCl3 en una fiola volumétrica. La absorbancia de la 
solución final medida a longitudes de onda de 250 nm y 275 nm en las cuales las 
absorbancias: en ppm-1cm-1, para cafeína y fenacitina son a250 = 0.0131 y a275 = 
0.0485 fenacitina: a250 = 0.0702 y a275 = 0.0159. La aspirina es determinada por la 
neutralización de NaHCO3 en la solución acuosa y extrayendo la aspirina con CHCl3. 
Los extractos son combinados y diluidos a 500 mL en una fiola volumétrica. Una 
porción de 20 mL de la solución es colocada en una fiola de 100mL y diluida a 
volumen con CHCl3. La absorbancia de esta solución es medida a 227 nm, donde el 
valor que corresponde a la aspirina es 0.00682 ppm-1cm-1. Un tableta de analgés ico 
tratada para este procedimiento es encontrado con absorbancias de 0.466 a 250 nm, 
0.164 a 275 nm, y 0.600 a 277 nm cuando usamos una celda de 1.00 cm de paso de 
luz. Reportar los miligramos de aspirina, cafeína y fenacina en la tableta de analgés ico

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Ley de beer

  • 1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA FACULTAD DE CIENCIAS INFORME Nº 2 TEMA : “ CURVA ESPECTRAL Y LEY DE BEER ” CURSO : INSTRUMENTACION QUIMICA I PROFESOR (A) : ISRAEL JIMENEZ ALUMNO(S) : POMA LLANTOY VICTOR RAÚL FECHA DE REALIZACIÓN : 08-09-2009 FECHA DE PRESENTACIÓN : 15-09-2009 2009
  • 2. 1.- OBJETIVOS :  Graficar las curvas espectrales y determinar los máximos de absorción  Determinar la longitud de onda de máxima absorción  Graficar la correspondiente curva de calibración Determinar la cantidad de la correspondiente sustancia absorbente ( analito) 2.- MARCO TEÓRICO: 2.1.- Introducción Un método espectrofotométrico está basado en la medida directa de la absorción de radiación electromagnética por parte de una muestra, cuantificable a través de la Absorbancia, y la correlación de esta variable con la concentración de la especie de interés en dicha muestra. Todo analito molecular tiene la capacidad de absorber ciertas longitudes de onda características de la radiación electromagnética. En este proceso, la radiación es transferida temporalmente a la molécula y, como consecuencia, disminuye la intens idad de la radiación . Dicha disminución, debida a la absorción experimentada por el analito, puede ser cuantificada utilizando diversas magnitudes, siendo la Absorbancia , A , la más comúnmente utilizada en la espectrofotometría de UV-VIS. Dicha absorbancia se define por la expresión: donde A es la Absorbancia, P0 la potencia del haz de radiación incidente y P la potencia de dicho haz tras atravesar la muestra. 2.2.- Ley de Beer De acuerdo con la ley de Beer, la absorbancia está relacionada linealmente con la concentración de la especie absorbente, c, y con la longitud de la trayectoria de la radiación en el medio absorbente o camino óptico, b. Esto es: donde a es una constante de proporcionalidad llamada absortividad. Cuando la concentración c se expresa en moles por litro, y b en centímetros, la constante de proporcionalidad se denomina absortividad molar, y se designa por el símbolo e, y, puesto que la absorbancia es una magnitud adimensional, tendrá unidades de L cm-1 mol-1. En este caso, la ley de Beer adquiere la forma: 2.3.- Transmitancía y Absorbancia Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io incide perpendicularmente sobre una disolución de un compuesto químico que absorbe luz o cromóforo, el compuesto absorberá una parte de la radiación incidente (Ia) y dejará pasar el resto (It), de forma que se cumple: Io = Ia + It
  • 3. La transmitancia (T) de una sustancia en solución es la relación entre la cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra, It, y la cantidad de luz que incidió sobre ella, Io, y se representa normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100 La transmitancia nos da una medida física de la relación de intensidad incidente y transmitida al pasar por la muestra. La relación entre %T y la concentración no es lineal, pero asume una relación logarítmica inversa. La absorbancia (A) es un concepto más relacionado con la muestra puesto que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el logaritmo de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/ Io. Cuando la intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del 100% e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de onda, y entonces A vale log 1 = 0. La cantidad de luz absorbida dependerá de la distancia que atraviesa la luz a través de la solución del cromóforo y de la concentración de éste. 2.4.- Espectros de absorción Un espectro de absorción es una representación gráfica de la absorbancia de un analito (o de otra magnitud equivalente) en función de la longitud de onda de la radiación , l , (o de otro parámetro relacionado con la energía de la radiación utilizada). El máximo de absorbancia obtenido en el espectro de absorción de un analito, nos dará la longitud de onda que proporciona la mayor sensibilidad posible, y por tanto será la que se utilizará en el análisis espectrofotométrico de dicho analito. Todas las disoluciones que presentan color, absorben radiación electromagné t ica perteneciente al espectro visible, el cual puede dividirse en varias zonas según se muestra en la tabla siguiente:
  • 4. En dicha tabla, la columna del "color" indica la porción del espectro que es absorbida, mientras que la correspondiente al "color complementario" indica la porción de radiación electromagnética que no absorbe la muestra y que por tanto es transmitida a través de ella y puede ser captada por el ojo humano (color de la disolución). Así, por ejemplo, una disolución de color amarillo absorbe la radiación de color azul, y por tanto cabe esperar que presente un máximo de absorbancia en la zona de longitud de onda en la banda de 435-480 nm 3.- PARTE EXPERIMENTAL 3.1 .- Materiales  Espectrofotómetro UV-Visible-1201V-SHIMADZU, con celdas de 1cm   05 fiolas  01 bureta de 50 ml  01 Vaso de 50 ml  02 vasos de 100ml  01 bagueta  01 piceta 3.2 .- Reactivos  Permanganato de potasio ( KMnO4).. 3X10-4 M  Acido sulfúrico concentrado ( H2SO4) 18M  Acido sulfúrico 0.1 M 3.3 .- Procedimiento Experimental Preparación de soluciones  Se preparo una solución de KMnO4 3X10-4 M. Añadiendo H2SO4 (CC) antes del enrase  Se preparo una solución de H2SO4 0.1 M Curva espectral  Desde la bureta se agrego 5 ml de la solución de KMnO4 a una fiola de 25 ml y se enraso con un cierto volumen de H2SO4 0.1 M  Se vació una pequeña cantidad de esta solución a la celda espectrofotométrica y se registro respecto al blanco las absorbancias, usando longitudes de onda en el rango de 400 a 620 nm
  • 5.  Las mediciones realizadas fueron tomadas de la siguiente manera: 10 en 10 nm de 400-500 nm, 5 en 5nm de 500-560 y nuevamente de 10 en 10nm de 500- 560 nm Corrección de absorbancia  Se llenaron las 2 celdas con la solución de H2SO4 0.1 M hasta unos ¾ de su altura. Se toma una de ellas como el blanco y se midió la absorbancia de la otra como muestra. Se repitió el procedimiento girando la celda 180°. Curva de calibración  Desde la bureta se agregó 2,4,6,8 y 10 ml de la solución de KMnO4 a fiolas diferentes de 25 ml marcadas previamente con las letras E1,E2,E3,E4,E5 respectivamente, luego se enrasaron dichas fiolas con H2SO4 0.1 M por ultimo se registro las absorbancias de cada uno de estos estándares a una longitud de onda que es la de máxima absorción 4.- TABULACION DE DATOS OBTENIDOS Y GRAFICOS 4.1.- Datos Preparación de soluciones Tabla N°1 Masa del KMnO4 0.01185g Volumen de agua para diluir el H2SO4(cc) 5.55 ml 4.2.- Curva espectral Tabla N°2 Absorbancia λmax (nm) 0.126 528.5 0.119 548.5 4.3.- Curva de calibración Tabla N°3 Soluciones Absorbancia λ (nm) [E1] = 0.24 x10-4 M 0 0 [E2] = 0.48x10-4 M 0 0 [E3] = 0.72 x10-4 M 0.049 0.052 549.5 529.5 [E4] = 0.96 x10-4 M 0.159 0.167 548.5 529.5 [E5] = 1.20 x10-4 M 0.202 0.212 548.5 529.5
  • 6. 0.161 512.5 Tabal Nº 4 L(nm) ABS 410 0.006 420 0.006 430 0.009 450 0.013 460 0.023 480 0.035 500 0.088 520 0.115 530 0.127 540 0.12 550 0.112 570 0.078 580 0.041 590 0.016 600 0.007 620 0.006 4.4.- graficos : Grafico Nº 1 curva espectral del permanganato ABS max(0.126) 0.14 0.12 0.1 0.08 0.06 0.04 0.02 0 λmax =528.5 400 450 500 550 600 650 700 A B S O R B A N C I A LONGITUD DE ONDA (nm)
  • 7. Curva de calibración Tabla N°5 Soluciones Absorbancia λ (nm) [E1] = 0.24 x10-4 M 0 0 [E2] = 0.48x10-4 M 0 0 [E3] = 0.72 x10-4 M 0.049 0.052 549.5 529.5 [E4] = 0.96 x10-4 M 0.159 0.167 548.5 529.5 [E5] = 1.20 x10-4 M 0.202 0.212 0.161 548.5 529.5 512.5 Tabla Nº 6 Concentracion M Absorbancia 0.24 0 0.48 0 0.72 0.049 0.96 0.159 1.2 0.202 CURVA DE CALIBRACION DEL PERMANGANATO y = 0.2463x - 0.0911 R² = 0.909 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 -0.05 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 ABSORBANCIA CONCENTRACION 10-4 M
  • 8. Tabla Nº 7 Concentración M Absorbancia 0.24 0 0.48 0 0.72 0.052 0.96 0.167 1.2 0.212 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 CURVA DE CALIBRACION DEL PERMANGANATO  Para calcular las curvas de calibración se convierte las concentraciones de cada solución en ppm y μg/100ml Tabla N°8 Concentración ppm μg/100ml [E1] = 0.24 x10-4 M 1.318 131.8 [E2] = 0.48x10-4 M 2.637 263.7 [E3] = 0.72 x10-4 M 3.956 395.6 [E4] = 096 x10-4 M 5.274 527.4 [E5] = 1.20 x10-4 M 6.597 659.7 Ahora graficamos las curvas de calibración: y = 0.2463x - 0.0911 R² = 0.909 -0.05 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 ABSORBANCIA CONCENTRACION 10-4 M
  • 9. Tabla Nº 9 ppm Absorbancia 0 0 3.956 0.052 5.274 0.167 6.597 0.212 CURVA DE CALIBRACION DEL PERMANGANATO Tabla Nº 10 y = 0.032x - 0.0189 Concentracion ABS 0 0 395.6 0.049 527.4 0.159 659.7 0.202 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 -0.05 0 1 2 3 4 5 6 7 ABSORBANCIA CONCENTRACION ppm
  • 10. 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 CURVA DE CALIBRACION DEL PERMANGANATO 5.- CALCULOS ANALÍTICOS Ley de Beer: A= bc Despejando: A bc   A: Absorbancia b : Paso óptico= 1cm. C: concentración de la solución de permanganato de potasio ( 0.0003M ) Amax = 0.126 Entonces: ξ = A / b. c = 0.126 / ( 1 cm ). ( 0.0003 M ) ξ = 410.0 ( 1 1 .   M cm ) y = 0.0003x - 0.0181 -0.05 0 100 200 300 400 500 600 700 ABSORBANCIA CONCENTRACION μg/100mL
  • 11. Determine los siguientes datos estadísticos: coeficiente de correlación r, la recta de regresión de y sobre x y limite de detección (LDD) del método. Resumen Estadísticas de la regresión Coeficiente de correlación múlt iple 0.99792586 Coeficiente de determinación R^2 0.995856023 R^2 ajustado 0.994474697 Error t ípico 0.007879337 Observaciones 5 ANÁLISIS DE VARIANZA Grados de libertad Suma de cuadrados Promedio de los cuadrados F Valor crítico de F Regresión 1 0.044758948 0.044758948 720.942239 0.000113359 Residuos 3 0.000186252 6.2084E-05 Total 4 0.0449452 Coeficientes Error típico Estadístico t Probabilidad Inferior 95% Superior 95% Intercepción -0.013081701 0.008263087 -1.583149271 0.21154625 -0.039378532 0.013215131 Variable X 1 2465.80125 91.83491597 26.85036758 0.00011336 2173.541561 2758.060939   x x  y y         2 1 2 2                        i i i i i i i x x y y r y = 2391.7x - 0.0057 R2 = 0.9962 0.35 0.3 0.25 0.2 0.15 0.1 0.05 0 0.00E+00 2.00E-05 4.00E-05 6.00E-05 8.00E-05 1.00E-04 1.20E-04 1.40E-04 1.60E-04 Y Variable X 1 Curva de regresión ajustada Y Pronóstico para Y Linear (Y)
  • 12. Calculando el Límite de Detección (LDD): La ecuación de la regresión y = 2391.7x - 0.0057 Calculando el Y = YB + 3SB YB = 0.0057 para X = 0 El Limite de detección es SB = Sy/x Entonces Y = YB + 3 Sy/x ... (1) Calculando la desviación estándar Sy/x : 1 2   y  y y : valor pronosticado n :numero de datos. En nuestro caso n=5 Sy/x = 0.007879337 Desviación estándar debido a la regresión. En (1): Y = 0.0057 + 3 x (0.007879337) Y = 0.02934 Remplazando en la ecuación de la regresión: 0.02934= 2391.7x - 0.0057 Entonces el LDD es 6.- DISCUSIONES: X 1.465x10 5   5 X 1.465x10  En esta practica se tomo en cuenta la corrección de la absorbancia de la celda por lo tanto los datos que obtenemos del espectrofotómetro tendrán mínima desviación del valor verdadero. De los resultados obtenidos de la rectas de regresión notamos q el valor de R2 o R son aproximadamente la unidad lo q nos da una buena aproximación a la recta pronosticada. Esto es, tenemos una buen recta de calibración para calcular la concentración de una muestra problema cuya matriz es similar a la preparadas en nuestro laboratorio, 7.- RECOMENDACIONES:   2 / 2 ˆ            n s i i y x
  • 13. La precisión de las medidas de absorbancia depende mucho del uso y del mantenimiento que se haga de las celdas. Las huellas dactilares, la grasa u otras señales sobre las paredes de las celdas alteraran notablemente las características de transmisión. Por ello es recomendable una limpieza completa antes y después de su uso; la superficie de las ventanas no debe tocarse durante su manipulación. Las cubetas contrastadas nunca deben secarse mediante la acción del calor, en un horno o sobre una llama este tratamiento puede causar daños físicos o cambios en el camino óptico. Las cubetas deberían calibrarse regularmente entre si con una disolución absorbente. La luz monocromática tiene "un solo color" (una longitud de onda). Aunque es imposible producir luz monocromática, cuanto mejor es el monocromador más estrecho es el intervalo de longitudes de onda del haz emergente. 8.- CONCLUSIONES : 9.- REFERENCIAS BIBLIOGRAFICA: - Skoog, D. A. y West, D. M., Análisis Instrumental, McGraw Hill, 1993 - Meloan, Clifton y Kiser, Robert, Problemas y Experimentos en Anális is Instrumental, editorial Reverte Mexicana, S. A., 1973 - Miller, J. C. Y Miller, J. N., Estadística para Química Analítica, Adisson-Wesle y Iberoamericana, 1999. 10.- CUESTIONARIO 1. Son pocas las excepciones a la relación línea entre la absorbancia y la longitud de trayecto a una concentración fija. Sin embargo es frecuente que se observen desviaciones respecto de la proporcionalidad directa entre la absorbancia y concentración cuando la longitud de trayecto b es constante. Entre ellas tenemos: desviaciones reales, desviaciones instrumentales y desviaciones químicas. Describa cada una de éstas desviaciones. Las desviaciones a la Ley de Beer caen en tres categorías: reales, instrumentales y químicas. Dichas desviaciones pueden ser positivas ; si la absorbancia medida es mayor que la real (+ ) o negativas (-) si la absorbancia medida es menor que la real , y llevan a que no se obtengan relaciones lineales entre la absorbancia y la concentración. Las desviaciones reales : provienen de los cambios en el índice de refracción del sistema analítico, pues como e depende del índice de refracción de la muestra, la ley de Beer sólo se cumple para bajas concentraciones, en donde el índice de refracción es esencialme nte constante, ya que no es la absortividad la que es constante sino la expresión: e = e verdadero h /(h 2+2)2 donde h es el índice de refracción de la solución. Las desviaciones instrumentales provienen, en primer lugar de la utilización de luz no monocromática, ya que la pureza espectral del haz de radiación proveniente de la fuente, depende del ancho de banda espectral del monocromador. La deducción de la ley de Beer
  • 14. supone radiación monocromática y los monocromadores en realidad proporcionan una banda de longitudes de onda. Cuando se hace una medida de transmitancia con luz de varias longitudes de onda, l' ,l'' ... la intensidad del haz que emerge de la solución de muestra será ( Il' + Il'' ...) y la intensidad del haz que emerge de la celda de referencia será ( I0l' + I0l '' ...) por lo que la transmitancia leída será : T = ( Il' + Il'' ...) / ( I0l ' + I0l'' ...) = ( Il' + Il '' ...) / ( I0l '10-e'bc + I0l ''10-e''bc...) Entonces, la ley de Beer puede cumplirse con pequeños intervalos de error, si la variación de la absortividad con la longitud de onda es constante en el intervalo de longitudes de onda que el selector del instrumento deja pasar, siempre que el ajuste de la longitud de onda nominal sea muy reproducible. En el máximo de la curva del espectro de absorción, el coeficiente de absortividad cambia más lentamente que en el resto de la banda, igualmente la sensibilidad a la concentración es mayor en el máximo de la banda de absorción, porque la absortividad tiene el valor máximo en ese punto. Es por esto, que normalmente se selecciona la longitud de onda en el máximo de la banda para realizar las medidas espectrofotométricas cuantitativas. Se presentan también desviaciones instrumentales por luz desviada, entendiendo por esta, la luz de otras longitudes de onda que se superponen a la banda de luz utilizada . Cuando en los instrumentos se fija una longitud de onda nominal ,lx, el ancho de banda espectral del monocromador condiciona la banda de luz que pasa, que corresponderá a la región lx ± D l llamada región de la luz útil. La intensidad de esta banda de luz disminuirá cuando ocurra la absorción de luz por parte de la muestra, al igual que puede disminuir la intensidad de la luz desviada, sobre todo para l Ð 230 nm. La luz que proviene de la celda de referencia induce una corriente fotoeléctrica en el detector al igual que la luz que proviene de la muestra pero la luz desviada también induce una corriente adicional en el detector, lo que lleva a una transmitancia falsa, T'' , que tiene el valor: T'' = ( I + If ) / ( I0 + If ) donde If es la intensidad de la luz desviada. Las desviaciones químicas a la ley de Beer también se llaman desviaciones aparentes porque dependen de la naturaleza química del sistema en estudio y si se trabaja bajo ciertas condiciones ( pH, concentración de reactivos, etc. ) es posible hacer que el sistema cumpla dicha ley. Las desviaciones son causadas, generalmente, por equilibrios en solución que involucran a la especie absorbente y alteran su concentración originando desviaciones positivas o negativas. Si alguna reacción química que ocurra en el sistema origina un producto que absorba más fuertemente que la sustancia ensayada, a la longitud de onda a la cual se hace la medida o longitud de onda analítica, se producirá una desviación positiva. Si, al contrario, se origina un producto que no absorbe a la longitud de onda analítica, la concentración de la sustancia se verá disminuida y se originará una desviación negativa. Entre los tipos de reacciones químicas que llevan a desviaciones de la ley de Beer están: reacciones de asociación-disociación, reacciones ácido-base, reacciones de polimerización, reacciones de formación de complejos y reacciones con el solvente. 2. Evalúe las cantidades restantes de la tabla adjunta. Cuando sea necesario use 200 como masa molar del analito.
  • 15. Solución A %T b (cm) C  (Lmol-1cm- 1) a (ppn-1cm-1) M ppm 0,172 0,52 0,798 0,179 44,9 39,6 83,6 11,1 5,23 4,23x103 7,95x103 3,73x103 1,35x104 9,78x103 0,0258 0,0912 1.00 1,00 0,100 1,00 1,50 1,00 1,35x10-4 1,71x10-4 8,07x10-6 7,07x10-5 7,19x10-5 1,76 33,6 5,24 Solucion: Solución A %T b (cm) C  (Lmol- 1cm-1) a (ppn-1cm-1) M ppm 0,172 0.348 0,52 0.40 0.064 0,078 0,798 0,954 0,281 0,179 67,3 44,9 30,2 39,6 86,3 83,6 15,9 11,1 5,23 66,2 4,23x103 5.15 x103 7,95x103 18,3 x103 3,73x103 9,67x103 3,16x103 1,35x104 9,78x103 2,49 x103 0.0210 0,0258 0.0400 0,0912 0,0187 0,0484 0.3155 0,0688 0,0486 0,0124 1.00 0.50 1,00 2.49 0,100 1,00 1,50 0,98 1,10 1,00 0.41x10-4 1,35x10-4 0.65x10-4 0.088x10-4 1,71x10-4 8,07x10-6 1,68x10-4 7,07x10-5 2,62x10-5 7,19x10-5 8.20 27.0 13.0 1,76 34,2 1,61 33,6 14,14 5,24 14,38 3. Un compuesto X se determina mediante espectrofotometría UV/visible. Se prepara una curva de calibración a partir de las soluciones patrón de X, con los resultados siguientes: 0,50 ppm, A=0,24; 1,5 ppm, A=0,36; 2,5 ppm, A=0,44; 3,5 ppm, A=0,59 y 4,5 ppm, A=0,70. Halle la pendiente e intersección de la curva de calibración, el error estándar de y, la concentración de la solución X desconocida que reporta una absorbancia de 0,5. C(ppm) Absorbancia 0.5 0.24 1.5 0.36 2.5 0.44 3.5 0.59 4.5 0.7
  • 16. Solución desconocida X: absorbancia=0.5 Reemplazando en la ecuación de la grafica: 0.5=0.115 x + 0.1785 X= 2.79 ppm Entonces la concentración de la solución desconocida es 2.79 ppm. Error estándar de y: 1 2   2      y  y s i   i y x / 2 ˆ  n Sy /x= {0.133/3}1/2 = 0.2107      4. Un método de análisis de Fe3+ que puede ser usado para una variedad de matrices, forma complejos altamente coloreados de Fe3+-ácido tioglicólico. El complejo absorbe fuertemente a 535 nm. La estandarización del método es difícil usando estándares internos. Un estándar de trabajo con 10.00 ppm de Fe+3 es preparado transfiriendo 10 mL de una solución stock de 100 ppm de Fe+3. Estándares de calibración de 1.00, 2.00, 3.00, 4.00, and 5.00 ppm son preparados para luego transferir cantidades apropiadas de solución stock de 100.00 ppm en una fiola volumétrica de 50 mL conteniendo cada una 5mL de ácido tioglicólico, 2mL de 20 w/v de citrato de amonio y 5mL de 0.22M NH3. Después de diluir a un volume n determinado y mezclar, los valores de absorbancia de los estándares externos son medidos vs un blanco de trabajo apropiado. Las muestras son preparadas para anális is tomando una porción de aproximadamente 0.1 g de Fe+3 , disolviendo con una mínima cantidad de HNO3 y diluir a un volumen de 1L en una fiola volumétrica. 1 mL de alícuota es la cantidad que es transferida a una fiola de 50 mL, con 5 mL de ácido tioglicólico, 2 mL de 20% w/v de citrato de amonio y 5 mL de 0.22 M de amoniac o
  • 17. y diluido a volumen. La absorbancia de la solución es usada para determinar la concentración de Fe+3 en la muestra. (a) Cuál es el blanco apropiado para esta muestra (b) Citrato de amonio es agregado para prevenir la precipitación de Al+3. Cómo afectará la presencia de trazas de Fe+3 en citrato de amonio en la concentración reportada de Fe en la muestra. (c) Porqué el procedimiento usa una cantidad de aproximadamente 0.1g de Fe+3 en la muestra (d) Es desconocido para el analista, que 100 mL volumétricos del estándar de trabajo de Fe+3 con 10.00 ppm tiene un volumen significativamente menor que 100.00 mL Cómo se afectaría la concentración reportada de Fe+3 en la muestra 5. Se desarrolló un método espectrofotométrico para análisis de analgésicos conteniendo aspirina, fenacitina y cafeína, La muestra es disuelta en CHCl3 y extraída con una solución acuosa de NaHCO3 para remover la aspirina. Después de terminar la extracción, el cloroformo es transferido a una fiola volumétrica de 250 mL y diluido a volumen de CHCl3. Una porción de la solución de 2 mL con CHCl3 es diluida a un volumen de 200 mL con CHCl3 en una fiola volumétrica. La absorbancia de la solución final medida a longitudes de onda de 250 nm y 275 nm en las cuales las absorbancias: en ppm-1cm-1, para cafeína y fenacitina son a250 = 0.0131 y a275 = 0.0485 fenacitina: a250 = 0.0702 y a275 = 0.0159. La aspirina es determinada por la neutralización de NaHCO3 en la solución acuosa y extrayendo la aspirina con CHCl3. Los extractos son combinados y diluidos a 500 mL en una fiola volumétrica. Una porción de 20 mL de la solución es colocada en una fiola de 100mL y diluida a volumen con CHCl3. La absorbancia de esta solución es medida a 227 nm, donde el valor que corresponde a la aspirina es 0.00682 ppm-1cm-1. Un tableta de analgés ico tratada para este procedimiento es encontrado con absorbancias de 0.466 a 250 nm, 0.164 a 275 nm, y 0.600 a 277 nm cuando usamos una celda de 1.00 cm de paso de luz. Reportar los miligramos de aspirina, cafeína y fenacina en la tableta de analgés ico