Tipos de métodos espectrofotométricos

1. BENEMERITA UNIVERSIDAD AUTONOMA DE
PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
LICENCIATURA EN QUIMICOFARMACOBIOLOGO
ALUMNAS:
CUATECONTZI NAVA MARICELA
DEITA SANCHEZ ARELY
FLORES DE LA O JOSABET
GALINDO RAMOS KARINA
GOMEZ MONROY MAGDIEL VIRIDIANA
GRACIA HERNÁNDEZ ZARET IRAIS
HERRERA FRANCISCO TANIA F.
MENESES SEVILLA SANDRA
MENESES VALERIO ANA SILVIA
MUÑÍZ SOPERÁNEZ YASMÍN PERLA

2.  Objetivo
General:

Conocer y explicar los métodos de turbidimetría
y nefelometría mediante una serie de conceptos
básicos y técnicas experimentales.

Objetivos Particulares:



Conocer la aplicación de ambos métodos.
Resolver problemas empleados en el área profesional
empleando estos métodos.
Conocer el equipo necesario se lleva a cabo la
obtención de los diferentes datos de interés
empleando ambas técnicas.

3. Existen diversos métodos de análisis
dependiendo de las necesidades.
Aplicaciones de la
Turbidimetría y
Nefelometría:
Sistemas
naturalmente
turbios
Uso
disminuido.
Provocados
en
laboratorios

4. Radiación
Energía que
viaja en
forma de
ondas o
partículas de
alta velocidad
RADIACION
ELECTROMAGNETICA
RADIACION
MECANICA

5. Incidir una
radiación sobre
una superficie:
(s.l.g).
Distribución
y
Orientación
de las
moléculas
Dispersión
de la
radiación
Difracción y
Reflexión
Dispersa en
diferentes
direcciones

6. mide
Dispersión
de la luz
Nefelome
tria
Turbidime
tria
por
Obteniendo las mediciones de esta dispersión, por cualquiera de los 2
métodos se pueden expresar e interpretar mediante métodos gráficos

8.  Ocurre
cuando:
Choque
entre
Provoca
Intensidad
de la
radiación
Haz de
radiación
incidente
longitud de
onda (λ)
mayor
incrementa
con el
tamaño de
la partícula
Pequeñas
Fracción de
radiaciones
en todas
direcciones
Partículas
atómicas o
moleculares

9. Radiación
incidente
Radiación
Incidente
Transmitida
Dispersión de la luz

10. Mide la reducción de la
transmisión de luz debido
a partículas de una
suspensión y cuantifica la
luz residual transmitida
en concentraciones bajas
de suspensión de
partículas

11. DISPERSIóN
REFLEXIóN
• Partículas con
dimensiones menores
o iguales a la longitud
de onda.
• Partículas con
dimensiones superiores
a la longitud de onda.

12. Medidas turbidimétrica
Turbidimetro
de Parr
Colorímetro
Duboscq
Espectrofoto
metros
ordinarios

13. Este turbidímetro se basa en el hecho de
que la dispersión provoca un cambio en el
plano de polarización de la luz.

14. Luz polarizada
(polarizador
primario)
Respuesta Max. Y
Min. De la
suspensión en
fotocelula
Atraviesa la
muestra y
divide en 2
Disolución sin partículas
por
Se detecta en
2 fototubos
separados
Espejo
semiplateado

15. Señal 1
Señal 2
() de
particulas
en
suspensió
n
+
()
- F. 1
<
Turbidez
Relación de
ambas
fotocélulas
+ F. 2

16. Técnica no
destructiva
es
instantánea
Base termodinámica
para la obtención de
peros moleculares.
Sigue
reacciones
rápidas
ecuaciones
fundamental
de una
manera
rigurosa

18. Monitoreo del
crecimiento de
cultivos bacterianos
Contenido de
macromoléculas
La determinación de
aminoácidos, vitaminas y
antibióticos.
Control de calidad
de agua, bebidas y
productos
alimenticios
Reacciones de
precipitación

20. Basado en la
dispersión de la
radiación
Atravesando las
partículas de la
materia
Es atenuada en
intensidad
mediante
dispersión
La luz atraviesa
un medio con
partículas
dispersas
se mide la
intensidad de la
luz dispersada,.

21. Es la adición de luz en
ángulos rectos con el
haz incidente
Longitud
de onda
Mayor sensibilidad
Tamaño
de
partícula
Concentració
n
Concentraciones
menores de partículas
suspendidas.

22. Emplea una fotocelda puesta
en un ángulo recto con
respecto a la fuente de luz.

23. Correlación entre turbidez y solidos suspendidos
solución
light scatter
source of light
NEFELOMETRÍA
detector
Monitorea la luz reflejada por las partículas y no
a la disminución a causa de la turbidez

24. Análisis de proteínas
Determinar
concentraciones de
Determinación de levadura
Humo, polvo, niebla, aerosoles
Glicógeno y β- y γ- globulinas en
suero y plasma sanguíneos.
Ribonucleasa, sulfatos en orina
Trombina y fibrinógeno en plasma

25. Técnicas de
separación y
Análisis
• De las proteínas
Turbidimetría y
• Inmunoelectrofo
nefelometría.
resis en cohete
Inmunodifusión
• Inmunofijación
Electroforesis
• Cromatografía
Inmunoelectroforesis

26. Turbidimetría:
Medición de la disminución de la luz
transmitida a través de una solución.

28. Instrumento

30. Procedimiento
1. Preparación de
soluciones estándar.
2. Se toma una muestra.

31. 3. Se agregan 5 mL de
solución estabilizadora y
5mL de BaCl2
4. Se agita la muestra.
5. Se lee en el turbidímetro.

32. Lectura
1.Leer el valor de NTU's registrados con
la curva de calibración.
2.Obtener la concentración de la
muestra.
NTU=Unidades Nefelométricas de
Turbidez.

33. Ejemplo I:
Una muestra de agua registra una turbidez de 42 NTU's.
Las soluciones estándar registran los siguientes valores
de turbidez:
Estándar 5 ppm 12 NTU´s
Estándar 10 ppm 25 NTU´s
Estándar 15 ppm 36 NTU´s
Estándar 20 ppm 47 NTU´s
Estándar 25 ppm 62 NTU´s
¿Cuál es el
contenido de
sulfatos en la
muestra original?

34. Resolución
Se hace una interpolación
gráfica y se lee el valor el cual
corresponde a 18 ppm aprox.
(Figura A)
Se hace una interpolación
analítica y los cálculos
nos indican:
La solución de la ecuación
indica que X=17.7 ppm de
SO4-2

35. Ejemplo II:
El Espectrofotómetro mide la densidad óptica
(D.O.),que es la medida de la luz transmitida a
través de la suspensión.
Relacionar los valores de A con la masa bacteriana
en una muestra problema.

36. Resolución
Realizar una curva estándar.
Absorbancia vs concentración
Absorbancia vs peso seco

38. Obtener:
1. Los valores o puntos que
mejor se ajustan a nuestra
gráfica.
2. Porcentaje de error.
3. Los puntos que deberían ser
los correctos.

39. Ajuste por mínimos cuadrados
•Dos magnitudes X e Y se relacionan a través de una ecuación lineal.
•Las constantes b (ordenada en el origen) y a (pendiente) son los
parámetros que se pretende encontrar.
•El método de mínimos cuadrados determina los valores de los
parámetros a y b de la recta que mejor se ajusta a los datos
experimentales.

40. Interpretación
El coeficiente de correlación indica el grado de
dependencia entre las variables X e Y. Su valor puede
variar entre 1 y -1.
Si r = -1 todos los puntos se encuentran sobre la recta
existiendo una correlación que es perfecta e inversa.
Si r = 0 no existe ninguna relación entre las variables.
Si r = 1 todos los puntos se encuentran sobre la recta
existiendo una correlación que es perfecta y directa.

41. Conclusión
La turbidimetría y la nefelometría son
técnicas basadas en la dispersión de la
radiación que permiten la descripción y
análisis óptico de una muestra, por lo cual
han sido muy útiles en control de calidad.

43. Hernández, L., González, C., (2002), Introducción al Análisis Instrumental.
Editorial: Ariel Ciencia.
Wentworth, Ladner. (1975), Fundamentos de química física. Editorial
Reverté. España.
Olsen D. Eugene, (1990), Métodos ópticos de análisis. Editorial Reverté.
Barcelona, España.
Fundamentos del método. De:
http://www.iacinternacional.com.ar/index.php/productos/reactivos/inmu
noturbidimetria/fundamentos-del-metodo
Turbidimetria vs nefelometría. De:
http://www.iacinternacional.com.ar/index.php/productos/reactivos/inmu
noturbidimetria/turbidimetria-vs-nefelometria
Martínez Saldaña Elizabeth.(2012). Determinación de biomasa. De:
http://www.slideshare.net/yuricomartinez/labo2-peso-hmedo-pesoseco-turbidimetra
Fuentes, Castiñeiras, Queraltó. (1998) Bioquímica clínica y patología
molecular. Segunda edición. Editorial Reverté. Barcelona, España.
Nefelometría cualitativa. De:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003545.htm
Bibliografía