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Técnicas de CE
Electroforesis capilar de Zona
               (CZE)
• Tiene la disposición más simple del
  electrolito de fondo (BGE).
• Descripción cuantitativa por dos
  fenómenos: migración y dispersión.
• Presencia o ausencia del flujo
  electroosmotico (EOF).
• Moléculas cargadas
CZE
Aplicaciones
•   Química Clínica
•   Separación del suero humano
•   Insulina
•   Hemoglobinas
•   Nucleósidos
•   Nucleótidos
•   Aminoácidos
•   Vitaminas
•   Drogas iónicas
Cromatografía electrocinética
        micelar (CEKC, MEKC)
•   Moléculas con carga y si carga
•   Combinación de CZE y RPLC
•   Utilización de agentes surfactantes
•   Formación de micelas de diferentes tipos
•   Utilización de ciclodextrinas
•   Combinación de agentes surfactantes y
    ciclodextrinas
Aplicaciones
•   Separación de vitaminas
•   Uriacimida
•   Piridoxina
•   Riboflavina
•   Ácido ascórbico
•   Cianocobalamina
•   Ácido nicotínico
•   Tiamina
Isotacoforesis capilar (CITP)
En esta modalidad de electroforesis las bandas de
  los analitos migran todas a la misma velocidad;
  por eso recibe este nombre de iso, igual, y taco,
  velocidad.
La muestra ha de inyectarse entre dos tampones:
  el frontal, que contiene los iones de mayor
  movilidad (esta movilidad ha de ser mayor que
  la de los componentes a analizar), y el terminal
  en el que van los iones de menor movilidad que
  los iones de la muestra.
• La selección de los electrolitos guías y terminales
  depende del conocimiento de los valores de las
  movilidades y del pKa para todos los componentes
  de la muestra.



• En un principio, los iones migran a distintas velocidades,
  según v = μeE, y la diferencia en las velocidades de
  migración da lugar a la separación de los distintos
  analitos en bandas adyacentes, con la especie más
  rápida situada en la banda más próxima al tampón
  conductor y la especie más lenta inmediatamente por
  delante del terminal.
• Una vez que se han formado las bandas,
  todas se mueven a la misma velocidad.

• Esto ocurre porque el potencial se hace
  más reducido para las bandas más
  móviles y se hace más intenso para las
  bandas más lentas, de manera que la
  corriente es la misma en todas las zonas
  del tampón. Las separaciones entre
  bandas son nítidas.
• Si un soluto empieza a difundir a la banda
  próxima más rápida, se encuentra con un
  campo más bajo, lo cual reduce su
  velocidad hasta hacerle caer, de nuevo,
  en su banda original.
• Las diferentes bandas de analitos están
  situadas a continuación las unas de las
  otras, y no hay bandas de tampón entre
  ellas que las separen.
• El resultado no es un electroferograma
  con los distintos picos, sino un diagrama
  en función del tiempo con forma de
  escalera.
Aplicaciones
• Separación de proteínas
• Separación de fármacos(antiinflamatorios)
• Separación de cationes y aniones en
  corridas diferentes
• Análisis del color/sabor de los alimentos:
• - Determinación de colorantes sintéticos
  mediante CITP (muestras de diversos
• alimentos sólidos: puddings, golosinas)
Aplicaciones
Análisis de iones inorgánicos:
- Análisis cualitativo de aniones presentes
  en cerveza, salsa de soja, té y café.
- Determinación semicuantitativa de calcio,
  sodio, cloruros, fosfatos y citratos en
muestras de leche
• Generalmente se ha efectua bajo condiciones
  de cero EOF aunque nos es una restricción..
  Los Isotacoferogramas pueden mostrar
  diferencias en el orden de migración en
  presencia o no de EOF.

• La detección en es usualmente con detectores
  de "bulk property" de la solución electrolítica. Se
  ha utilizado detección de conductividad .
  También se han utilizado detectores térmicos
  ( medida del calor de Joule producido dentro de
  cada zona) o detectores que miden la caída de
  voltaje de cada zona.
Electrocromatografía capilar
• La electrocromatografía capilar es un híbrido
  entre la HPLC y la CE donde se reúnen algunas
  de las mejores características de cada técnica
  por separado, por lo que tiene ventajas sobre
  ellas. De esta manera la electrocromatografía
  capilar puede usarse para la separación de
  especies no cargadas.
• Proporciona una elevada eficacia en las
  separaciones de microvolúmenes de disolución
  de muestra, sin necesidad de aplicar un bombeo
  de alta presión.
• En la electrocromatografía capilar la fase
  móvil se transporta a través de la fase
  estacionaria por el bombeo ejercido por el
  flujo electroosmótico y no por un bombeo
  mecánico, lo que simplifica
  significativamente el equipo.
• Ademas, el sistema de bombeo
  electroosmotico origina un perfil de flujo
  plano. en lugar de un perfil de flujo
  hidrodinamico. El perfil de flujo plano
  conduce a un menor ensanchamiento de
  banda que en el flujo hidrodinamico, y por
  tanto la eficacia de la separacion es
  mucho mayor.
Aplicaciones


   •Microvolumenes
  •Especies cargadas
•Especies no cargadas
Referencias
• Morteza G. Khaledi. High-Performance
  Capillary Electrophoresis. United States of
  America: Jhon Wiley & Sons; 1998
• Philippe S.K. Capillary Electrophoresis
  methods and protocols. Germany: Human
  Press; 2008

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Electroforesis capilar

  • 2. Electroforesis capilar de Zona (CZE) • Tiene la disposición más simple del electrolito de fondo (BGE). • Descripción cuantitativa por dos fenómenos: migración y dispersión. • Presencia o ausencia del flujo electroosmotico (EOF). • Moléculas cargadas
  • 3.
  • 4. CZE
  • 5.
  • 6. Aplicaciones • Química Clínica • Separación del suero humano • Insulina • Hemoglobinas • Nucleósidos • Nucleótidos • Aminoácidos • Vitaminas • Drogas iónicas
  • 7. Cromatografía electrocinética micelar (CEKC, MEKC) • Moléculas con carga y si carga • Combinación de CZE y RPLC • Utilización de agentes surfactantes • Formación de micelas de diferentes tipos • Utilización de ciclodextrinas • Combinación de agentes surfactantes y ciclodextrinas
  • 8.
  • 9.
  • 10.
  • 11.
  • 12.
  • 13.
  • 14. Aplicaciones • Separación de vitaminas • Uriacimida • Piridoxina • Riboflavina • Ácido ascórbico • Cianocobalamina • Ácido nicotínico • Tiamina
  • 15. Isotacoforesis capilar (CITP) En esta modalidad de electroforesis las bandas de los analitos migran todas a la misma velocidad; por eso recibe este nombre de iso, igual, y taco, velocidad. La muestra ha de inyectarse entre dos tampones: el frontal, que contiene los iones de mayor movilidad (esta movilidad ha de ser mayor que la de los componentes a analizar), y el terminal en el que van los iones de menor movilidad que los iones de la muestra.
  • 16.
  • 17. • La selección de los electrolitos guías y terminales depende del conocimiento de los valores de las movilidades y del pKa para todos los componentes de la muestra. • En un principio, los iones migran a distintas velocidades, según v = μeE, y la diferencia en las velocidades de migración da lugar a la separación de los distintos analitos en bandas adyacentes, con la especie más rápida situada en la banda más próxima al tampón conductor y la especie más lenta inmediatamente por delante del terminal.
  • 18. • Una vez que se han formado las bandas, todas se mueven a la misma velocidad. • Esto ocurre porque el potencial se hace más reducido para las bandas más móviles y se hace más intenso para las bandas más lentas, de manera que la corriente es la misma en todas las zonas del tampón. Las separaciones entre bandas son nítidas.
  • 19. • Si un soluto empieza a difundir a la banda próxima más rápida, se encuentra con un campo más bajo, lo cual reduce su velocidad hasta hacerle caer, de nuevo, en su banda original. • Las diferentes bandas de analitos están situadas a continuación las unas de las otras, y no hay bandas de tampón entre ellas que las separen.
  • 20.
  • 21. • El resultado no es un electroferograma con los distintos picos, sino un diagrama en función del tiempo con forma de escalera.
  • 22.
  • 23. Aplicaciones • Separación de proteínas • Separación de fármacos(antiinflamatorios) • Separación de cationes y aniones en corridas diferentes • Análisis del color/sabor de los alimentos: • - Determinación de colorantes sintéticos mediante CITP (muestras de diversos • alimentos sólidos: puddings, golosinas)
  • 24. Aplicaciones Análisis de iones inorgánicos: - Análisis cualitativo de aniones presentes en cerveza, salsa de soja, té y café. - Determinación semicuantitativa de calcio, sodio, cloruros, fosfatos y citratos en muestras de leche
  • 25. • Generalmente se ha efectua bajo condiciones de cero EOF aunque nos es una restricción.. Los Isotacoferogramas pueden mostrar diferencias en el orden de migración en presencia o no de EOF. • La detección en es usualmente con detectores de "bulk property" de la solución electrolítica. Se ha utilizado detección de conductividad . También se han utilizado detectores térmicos ( medida del calor de Joule producido dentro de cada zona) o detectores que miden la caída de voltaje de cada zona.
  • 26. Electrocromatografía capilar • La electrocromatografía capilar es un híbrido entre la HPLC y la CE donde se reúnen algunas de las mejores características de cada técnica por separado, por lo que tiene ventajas sobre ellas. De esta manera la electrocromatografía capilar puede usarse para la separación de especies no cargadas. • Proporciona una elevada eficacia en las separaciones de microvolúmenes de disolución de muestra, sin necesidad de aplicar un bombeo de alta presión.
  • 27. • En la electrocromatografía capilar la fase móvil se transporta a través de la fase estacionaria por el bombeo ejercido por el flujo electroosmótico y no por un bombeo mecánico, lo que simplifica significativamente el equipo.
  • 28. • Ademas, el sistema de bombeo electroosmotico origina un perfil de flujo plano. en lugar de un perfil de flujo hidrodinamico. El perfil de flujo plano conduce a un menor ensanchamiento de banda que en el flujo hidrodinamico, y por tanto la eficacia de la separacion es mucho mayor.
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  • 32. Aplicaciones •Microvolumenes •Especies cargadas •Especies no cargadas
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  • 35. Referencias • Morteza G. Khaledi. High-Performance Capillary Electrophoresis. United States of America: Jhon Wiley & Sons; 1998 • Philippe S.K. Capillary Electrophoresis methods and protocols. Germany: Human Press; 2008