El documento proporciona una introducción al microscopio óptico básico, describiendo sus partes principales, como el objetivo, ocular y fuente de luz. Explica que utiliza lentes para formar imágenes ampliadas de objetos pequeños mediante la refracción de la luz. También describe conceptos clave como el aumento y poder de resolución, e introduce diferentes tipos de microscopios como de campo claro, campo oscuro y contraste de fases.
3. El microscopio óptico básico está compuesto
por partes mecánicas, ópticas y de iluminación:
Ópticas Iluminación Mecánicas
Lente objetivo Fuente de luz Revólver
Lente ocular Condensador* Platina
Prismas Diafragma Macrométrico
Micrométrico
Tornillo del carro
Tubo
Base
Pinzas
6. El microscopio utiliza la propiedad de la
refracción de la luz para formar imágenes
Índice de refracción (n)
Agua = 1.3300
Aceite de inmersión = 1.5150
Fluorita = 1.4340
Vidrio (crown) = 1.5200
8. La Luz
Puede ser descrita mediante dos modelos:
Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James Clerk
Maxwell)
Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza corpuscular
ó fotónica (Albert Einstein)
9. La Luz visible
Corresponde sólo a una pequeña fracción del espectro
electromagnético que va desde longitudes de onda del
color violeta de 400 nm hasta el rojo de 750 nm
10. Los Lentes
convergentes: concentran los rayos del haz de luz
hacia el punto del foco.
divergentes: dispersan los rayos del haz de luz.
12. Aumento y Poder de Resolución
Aumento: relación lineal entre el tamaño de la
imagen formada y el objeto
Aumento lateral del objetivo Aumento angular del ocular
Aumento total = aumento objetivo x aumento ocular
13. Aumento Vacío: incremento de la imagen sin que pueda
percibirse mayores detalles.
Amplificación Amplificación vacía
14. Poder de resolución (d): distancia mínima
entre dos puntos del objeto que permite que
se observen separados
λ ≈ 560 nm
Apertura numérica (NA) e Índice de
refracción (n)
15.
16. Modo de uso del microscopio
Objetivo de menos
aumento en el eje
central
Platina en su posición
mas baja
Prender
Diafragma abierto
18. Proceso de enfoque
Subir la platina con
el macrométrico
Observar con objetivo
menor
Usar micrométrico
Una vez enfocado pasar el
siguiente aumento
19. Enfocar:
Hacer coincidir plano focal
del condensador con el del
objetivo
La muestra debe quedar en
el plano focal
20. Enfocar con
micrométrico.
* Pasar a lente de
inmersión
Luego de usar limpiar el
objetivo
21. ¿Por qué usar objetivo de inmersión?
Angulo de apertura.
Angulo de apertura en
objetivo seco es mayor
en que en inmersión.
*Ley de Snell
23. Tipos de microscopios
Campo claro
Campo oscuro
Contraste de fases
Interferencia
Polarización
* Fluorescencia
24. Campo claro
Usado con más
frecuencia
Resolución para
estructuras mayor a 0,2
μm
Células teñidas y con
pigmentos
Fácil de usar y costo
accesible
25. Campo oscuro
Estructura iluminada sobre
fondo oscuro
Para observar células vivas ,
de pequeño tamaño o que
no se pueden teñir.
Desventajas: mayor costo
por condensador especial,
preparación más compleja
de la muestra y no permite
ver muchas estructuras
celulares internas.
26. Campo oscuro
fundamentos
Condensador especial
Apertura numérica del
condensador mayor
que la del lente objetivo
27. Contraste de fases
Facilita la observación de
estructuras internas,
permite ver células vivas de
forma inmediata.
Transforma la diferencia
entre los distintos índices
de refracción de la muestra
en diferencias de intensidad
lumínica.
31. Contraste de interferencia
diferencial (de Nomarski)
Filtro polarizador: hace vibrar el haz
en un solo plano
Prisma Wollaston #1: separa el haz en
dos y en planos distintos en 90°
Objeto: desfasa el haz que lo
atraviesa, y el que no servirá como
referencia
Prisma Wollaston #2: desfase final de
¼ de longitud de onda (no se
interfieren porque están en planos
diferentes)
Filtro analizador: rota el plano de las
dos ondas luminosas, los hace
coincidir y se produce la interferencia
32. Contraste de interferencia
diferencial (de Nomarski)
Determinación dela masa
por unidad de superficie
del material observado
33. Microscopio de polarización
Identificación de sustancias
cristalinas o fibrosas con
alto orden molecular
*Birrefringente: varios
índices de refracción,
dependiendo de la
orientación molecular del
objeto, interacciona de
diferente forma con la onda
luminosa