southern blot l'une des technique d'hybridation d'ADN

1. Southern blot
Préparé par:
HAMIDOU Selma
HADJERSI Amina

2. Introduction:
 Les blots sont des techniques de transfert d'ADN, d'ARN
et de protéines sur un support de sorte qu'ils peuvent
être séparés
 C'est une technique indirecte d'hybridation de l'ADN
mise au point en 1975 par le biochimiste Edwrad
Southern.
 La technique est connue comme le transfert d'ADN ou
«Southern blot »
 Le Southern est une technique longue qui est la base de
l'essor de la biologie moléculaire mais qui est souvent
remplacée par la PCR.

3. Le but de southern blot:
 Elle permet de détecter une séquence
d'ADN génomique dite unique
 Cette technique permet de localiser
une séquence d’ADN parmi les
fragments ayant migrés, grâce à une
sonde marquée

4. Principe :
 La clé de ce procédé est l'hybridation.
Hybridation: Il est le processus de formation
d'une molécule d'ADN double brin entre une
sonde d'ADN simple brin et un ADN cible
simple brin.
 Il ya 2 éléments importants de l'hybridation:
◦ Les réactions sont spécifiques à des sondes vont
seulement se lier à des cibles avec une
séquence complémentaire.
◦ La sonde peut trouver une molécule de cible
dans un mélange de millions de molécules
apparentées mais non complémentaires.

5. Protocole :
 Extraction de l’ ADN
 Restriction de l’ADN
 l’électrophorése
 Transfert
 Hybridation
 autoradiographie

6. Les outils :

7. EXTRACTION D’ADN:
Traitement par l’ARNase
PouréliminerlesARNs
précipitation de l’ADN
=addition d'éthanol ou d'isopropanol dans la phase aqueuse
déprotéinisationde la solution
=extraction / solvants organiques, en général du phénol +/-
chloroforme
Lyse des cellules ou des tissus
=broyage ou pas + extraction/détergents

8. Restriction de l'ADN génomique:

15. Champ d’application :
 Pour identifier l'ADN spécifique dans un
échantillon d'ADN
 Pour isoler l'ADN désiré pour la construction
d'ADNr
 Identifier les mutations, délétions et des
réarrangements de gènes
 Utilisé dans le pronostic du cancer,EX:MYCN
 Le diagnostic de VIH-1 et les maladies
infectieuses
 Dans RFLP Restriction Fragment Length
Polymorphism:
 Dans empreintes génétiques
 le diagnostic prénatal et des maladies
génétiques