Progetto Amici di Duccio: la terapia genica alla sconfitta della leucemia

1. Progetto Amici di Duccio 2015:
la terapia genica alla sconfitta
della leucemia
C.F. Magnani, S. Tettamanti, A. Biondi, E. Biagi
Centro M.Tettamanti, Clinica Pediatrica Università Milano-Bicocca
Ospedale S. Gerardo, Monza, Italy
Milano, HangarBicocca
22 Giugno, 2015

2. Le nostre armi di difesa
Perchè il sistema immunitario non reagisce e
combatte contro la cellula leucemica?
Il sistema immunitario
ha lo scopo di difenderci
dagli attacchi esterni
e dalle malattie
Linfocita T

3. La leucemia per crescere e
manifestarsi attua dei meccanismi
di evasione dal sistema immunitario:
• si nasconde e non si fa riconoscere
• scappa in luoghi non facilmente
raggiungibili
• inibisce il sistema immunitario
stesso, con le sue armi
La leucemia sfugge alle nostre difese

4. I CAR sono molecole prodotte in laboratorio mediante le tecniche di
ingegneria genetica che vengono “montate” sui linfociti e funzionano
come un RADAR:
sono in grado di riconoscere la cellula leucemica come un bersaglio e di
uccidere il tumore.
Come rafforzare le nostre difese?
I recettori chimerici artificiali (CAR)
CAR
modified from Kershaw M.H. (2005), Nature Reviews Immunology, 5, 928-940
Linfocita T
Super Linfocita T con il CAR

5. Grazie ai CAR i linfociti diventano Killers tumorali
Linfocita T CAR+ riconosce la cellula leucemica
Uccisione ed eliminazione della cellula leucemica
Linfocita T CAR+ Cellula leucemica
Flusso sanguigno

6. Il “Breakthrough” dell’anno 2013

7. I CAR di ultima generazione!
Le scelte da fare sono tante:
Quale linfocita T usare?
Come montare il bazooka?
Scelta del bersaglio tumorale…

8. Il nostro contributo nel panorama internazionale!
Le cellule CIK, le nostre “super” cellule T,
potenti ma sicure
Risultati pubblicati nel 2007 ne dimostrano la loro sicurezza:
una “joint venture” con il gruppo di ematologia di Bergamo

9. modified from Koseki H. (2008), Riken Research, 3, 7
Il metodo non virale per montare il bazooka
I trasposoni, un metodo non virale per rendere la terapia genica
più economica, semplice e applicabile, offrono una valida
alternativa ai metodi che utilizzano i virus come vettori
Modificato da Hackett
P.B. (2010), Molecular
Therapy, 18, 674-683
TRANSPOSON
IR/DR IR/DR
TRANSPOSASE
scFvCD123.28OX40Z
scFvCD123
scFvCD123
Il DNA contenente il CAR
Il DNA contenente l’enzima che taglia e incolla

10. CAR + CIK + metodo non virale
Cellule CIK
potenti ma
sicure
Il metodo non
virale
Meno complicato
dei vettori virali
CAR
il bazooka rapido,
potente e diretto
contro il tumore

11. Le cellule del
tumore sono
state eliminate!
Cellule del
tumore
Cellule del
tumore Controllo CIK + CAR
Controllo CIK + CAR
LEUCEMIA
MIELOIDE
LEUCEMIA
LINFOIDE
CAR + CIK + metodo non virale: ottimi risultati!
Il cocktail strategico per curare anche in Italia i nostri piccoli pazienti
LLA
LMA

12. Nucleofezione
INFUSIONE
CELLULE DEL DONATORE
+
Giorno 0
Espansione
verso CIK
Criopreservazione
Giorno 21
Transgene
CAR
TERAPIA GENICA
Il cocktail CAR + CIK + metodo non virale
depositato come brevetto
Stiamo sviluppando il protocollo per la linfoblastica acuta
tramite il CD19 CAR

13. Per la LLA, la strada è ben avviata!
Il protocollo per la linfoblastica acuta tramite il CD19 CAR
sarà presto disponibile al nostro ospedale

14. Investitori e company hanno dimostrato
grande interesse per la piattaforma CAR
Il nostro brevetto ha suscitato l’interesse di una company americana

15. L’arrivo sulla scena di Formula Pharmaceutical

16. Figura 1
FILTRO D
CLASSE
D FILTRO C
ARMADIO
Non classificato Classe D Classe C Classe B Classe A – cabina a flusso laminare
Laboratorio di Terapia Cellulare Stefano Verri

17. Interventi di modifica
strutturale
- Impianti di circolazione aria
- modifica dei passa-materiali
- acquisto di nuovi arredi e
apparecchiature
01/09/14
01/10/14
Verifiche
- Convalide ambientali
- convalide di processo
- collaudi impianti
- procedure
01/11/14
01/12/14
Ispezione AIFA (20-23/01)
- 3 ispettori/4 giorni
- ispezione impianti
- ispezione documenti (>150)
- risultato: 11 deviazioni non-
critiche
01/01/15
Follow-up dell’ispezione
- Primo invio di documenti: 22/02/15
- Secondo invio: 08/04/15
- Terzo invio: 27/04/15
- Approvazione: 18/06/15
L’adeguamento del laboratorio:
breve cronistoria

18. Nuova stanza di manipolazione genica

19. Che cosa ci aspetta per il futuro…
Non solo LLA ma anche LMA!
CD19 CAR per la
linfoblastica acuta
CD123 CAR per la
mieloide acuta
Sfida ancora aperta nella mieloide acuta
su cui stiamo investendo molto dal 2010

20. Il CD123 CAR è selettivo per la cellula leucemica

21. Super CIK con il CD123 CAR
Super CIK con il CD123 CAR
eliminano le cellule di LMA!

22. Grazie a tutti… INSIEME si vince!
Andrea Biondi
Ettore Biagi
Chiara F Magnani
Sarah Tettamanti
Silvia Arcangeli
Nice Turazzi
Maria Caterina Roti Roti
Claudia Mezzanotte
Greta Giordano
Virna Marin
Fondazione
M.Tettamanti
LA Cooper
Montini Eugenio
Benedicenti Fabrizio
Andrea Calabria
Erika Tenderini
Aiuti Alessandro
Comitato Maria
Letizia Verga
Quelli che…
con Luca
Luca Varani’s lab
Bellinzona –Switzerland-
Dr. Dominique Bonnet
London, UK)
Daniela Belotti
Benedetta Cabiati
Stefania Cesana
Giada Matera
Arianna Incontri
Paolo Perseghin
Giuseppe Gaipa