Diese Präsentation wurde erfolgreich gemeldet.
Wir verwenden Ihre LinkedIn Profilangaben und Informationen zu Ihren Aktivitäten, um Anzeigen zu personalisieren und Ihnen relevantere Inhalte anzuzeigen. Sie können Ihre Anzeigeneinstellungen jederzeit ändern.
Resul ÖZBİLGİÇ
İstanbul Üniversitesi
Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü
• Moleküler Biyolojinin en temel
tekniklerinden biridir.
• Hücre membranını ve duvarını
yıkarak DNA’yı ayırma işlemidir.
D...
Neden DNA İzolasyonu?
• DNA parmak izi (fingerprint) analizi
• PCR
Neden DNA İzolasyonu?
• Dizi Analizi, Fragment Analizi
Neden DNA İzolasyonu?
• Klonlama , Genomik DNA Kütüphanesi, RFLP
Neden DNA İzolasyonu?
DNA NEREDE?
• DNA hücre içerisinde,
-Çekirdek
-Mitokondri
-Kloroplastlarda bulunur.
• Bakteri ve Virüslerde DNA
DNA NEREDE?
DNA TİPLERİ
• Genomik (Kromozomal)
• Organel
• Plazmit (Ekstrakromozomal)
DNA’NIN TEMEL ÖZELLİKLERİ
• Adenin, Guanin, Sitozin
ve Timin bazlarını içerir.
• Dayanıklı bir yapısı vardır.
• Negatif yü...
İZOLASYON YÖNTEMİNİN BELİRLENMESİ
• DNA’sı izole edilecek hücre tipi
• İstenilen DNA miktarı
• İstenilen Saflık Derecesi
•...
DNA EKSTRAKSİYONU
• 1-Lysis
• 2-Purifikasyon
• 3-Presipitasyon
1-Lysis
• Tris
• EDTA
• Sodyum Dodesil Fosfat
• Proteinaz K
PÜRİFİKASYON
• Pürifikasyon yöntemleri,
1-Organik Ekstraksiyon
2-Tuzla Çöktürme
3-Sezyum Klorid Yoğunluk Gradiyenti
4-DNA’...
ORGANİK EKSTRAKSİYON
Fenolle karıştırılır
Üst faz:
DNA veya RNA
Orta faz: Proteinler
Alt faz:Fenol
Santrüfüjleme sonunda
F...
PRESİPİTASYON
• Absolut soğuk etanol ile presipitasyon yapılır.
• Ve DNA soğuk %70 lik etanol ile yıkanır.
• DNA Tris-Edta...
Sezyum Klorid Yoğunluk Gradienti
DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması
1-Manyetik Ekstraksiyon
Silika Yöntemi
Anyon Değişim Kromotografisi
depo
(tampon)
sabit faz
(katı porlu matriks)
mobil faz
(tampon)
elüent
Protein
karışımı
Sıvı Kültürden DNA Ekstraksiyonu
• KAYNATMA PATLATMA YÖNTEMİ
İZOLASYON YÖNTEMLERİNİN KARŞILAŞTIRILMASI
DNA’NIN MİKTARI VE SAFLIĞI
DNA Miktarı=260nmODxSulandırma OranıxKatsayı
Katsayı;
Çift iplikçikli DNA=50
Tek iplikçikli DNA...
KAYNAKLAR
1-Dr. Zekiye BAKKALOĞLU DNA İZOLASYON YÖNTEMLERİ
RSHMB, SHAM, Moleküler Mikrobiyoloji Araştırma ve Uygulama Labo...

Nächste SlideShare
Wird geladen in …5
×

DNA İzolayonu Yöntemleri

13.815 Aufrufe

Veröffentlicht am

DNA İsolation

Veröffentlicht in: Wissenschaft
  • Als Erste(r) kommentieren

DNA İzolayonu Yöntemleri

  1. 1. Resul ÖZBİLGİÇ İstanbul Üniversitesi Moleküler Biyoloji ve Genetik Bölümü
  2. 2. • Moleküler Biyolojinin en temel tekniklerinden biridir. • Hücre membranını ve duvarını yıkarak DNA’yı ayırma işlemidir. DNA İZOLASYONU
  3. 3. Neden DNA İzolasyonu? • DNA parmak izi (fingerprint) analizi
  4. 4. • PCR Neden DNA İzolasyonu?
  5. 5. • Dizi Analizi, Fragment Analizi Neden DNA İzolasyonu?
  6. 6. • Klonlama , Genomik DNA Kütüphanesi, RFLP Neden DNA İzolasyonu?
  7. 7. DNA NEREDE? • DNA hücre içerisinde, -Çekirdek -Mitokondri -Kloroplastlarda bulunur.
  8. 8. • Bakteri ve Virüslerde DNA DNA NEREDE?
  9. 9. DNA TİPLERİ • Genomik (Kromozomal) • Organel • Plazmit (Ekstrakromozomal)
  10. 10. DNA’NIN TEMEL ÖZELLİKLERİ • Adenin, Guanin, Sitozin ve Timin bazlarını içerir. • Dayanıklı bir yapısı vardır. • Negatif yüklüdür. • Suda çözünebilir ama alkolde çözünmez.
  11. 11. İZOLASYON YÖNTEMİNİN BELİRLENMESİ • DNA’sı izole edilecek hücre tipi • İstenilen DNA miktarı • İstenilen Saflık Derecesi • İzolasyon Sonrası Kullanılacak Yöntemler • Zaman • Ekonomik Durum
  12. 12. DNA EKSTRAKSİYONU • 1-Lysis • 2-Purifikasyon • 3-Presipitasyon
  13. 13. 1-Lysis • Tris • EDTA • Sodyum Dodesil Fosfat • Proteinaz K
  14. 14. PÜRİFİKASYON • Pürifikasyon yöntemleri, 1-Organik Ekstraksiyon 2-Tuzla Çöktürme 3-Sezyum Klorid Yoğunluk Gradiyenti 4-DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması *Anyon Değişim Kromotografisi *Silika Bazlı Kolonlar *Manyetik Ekstraksiyon
  15. 15. ORGANİK EKSTRAKSİYON Fenolle karıştırılır Üst faz: DNA veya RNA Orta faz: Proteinler Alt faz:Fenol Santrüfüjleme sonunda Fenol;Kloroform;İzoamil Alkol Ekstraksiyonu
  16. 16. PRESİPİTASYON • Absolut soğuk etanol ile presipitasyon yapılır. • Ve DNA soğuk %70 lik etanol ile yıkanır. • DNA Tris-Edta ile çözdürülür ve saklanır.
  17. 17. Sezyum Klorid Yoğunluk Gradienti
  18. 18. DNA’nın Katı Yüzeye Bağlanması 1-Manyetik Ekstraksiyon
  19. 19. Silika Yöntemi
  20. 20. Anyon Değişim Kromotografisi depo (tampon) sabit faz (katı porlu matriks) mobil faz (tampon) elüent Protein karışımı
  21. 21. Sıvı Kültürden DNA Ekstraksiyonu • KAYNATMA PATLATMA YÖNTEMİ
  22. 22. İZOLASYON YÖNTEMLERİNİN KARŞILAŞTIRILMASI
  23. 23. DNA’NIN MİKTARI VE SAFLIĞI DNA Miktarı=260nmODxSulandırma OranıxKatsayı Katsayı; Çift iplikçikli DNA=50 Tek iplikçikli DNA ve RNA için=40 OD; DNA=1,8 RNA=2
  24. 24. KAYNAKLAR 1-Dr. Zekiye BAKKALOĞLU DNA İZOLASYON YÖNTEMLERİ RSHMB, SHAM, Moleküler Mikrobiyoloji Araştırma ve Uygulama Laboratuvarı 2-Genetik Mühendisliğine Giriş ,Doç.Dr.Nurettin Yörek 3-DNA Pürifikasyon Yöntemleri,Dr.Ayla Avcıkurt 4-DNA Ekstraksiyonu ve Saflaştırması,Gıda Örneklerinde GDO.M.SOMMA 5- 7.Prof. Dr. Rıza DURMAZ,UYGULAMALI MOLEKÜLER MİKROBİYOLOJİ,İnönü Üniversitesi Tıp Fakültesi,Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı,MALATYA
  25. 25. 

×