Universidad Nacional de Loja

1. UNIVERSIDAD NACIONAL DE LOJA.
FACULTAD DE AGROPECUARIA Y DE RECURSOS NATURALES
RENOVABLES.
INGENIERÍA AMBIENTAL.
ESTUDIANTES DE TERCER CICLO.
PROYECTO INTEGRADOR DE SABERES.
Loja – Ecuador.

2. “Macro-microorganismos como
bioindicadores de la calidad de
agua de la Quebrada Turunuma de
la ciudad de Loja”

3. INTRODUCCIÓN
• El proyecto que se propone a continuación se centra en el estudio de la
contaminación, a través del análisis hidrográfico de la calidad del agua
de la Quebrada Turunuma de la ciudad de Loja y que en mayor parte
esta compuesta de aguas residuales de dicha ciudad.
• Como mencionó Leonardo da Vinci: «El agua es la fuerza motriz de toda la
naturaleza», y en efecto, sin este elemento no hay vida. La Organización
Mundial de la Salud define el agua contaminada como aquella que sufre
cambios en su composición hasta quedar inservible, es decir; agua toxica que no
se puede beber ni utilizar para otros fines como es la agricultura, en la actualidad
debido a la alta contaminación este elemento vital se está agotando y la
humanidad no hace nada para evitarlo. A lo largo del último siglo, estas
descargas de usos municipales, industriales, comerciales, de servicios, agrícolas,
pecuarios, domésticos, incluyendo fraccionamientos y en general de cualquier
otro uso, así como la mezcla de ellas han aumentado significativamente .

4. Bioindicadores
Seres vivos bastante susceptibles a los cambios climáticos capaces de brindar datos
sobre la contaminación del medio en su ámbito.
Artemia Salina
• Crustáceo diminuto de cuerpo delgado y largado de asexual y sexual
• Se encuentran en el zooplancton en varios hábitats de todo el mundo.
• Su longitud y aspecto varía según la especie o las condiciones ambientales en las
que viven
• Se alimentan de partículas orgánicas que forman parte del fitoplancton
La Artemia salina como bioindicador.
•
• La artemia salina ha demostrado ser un biomarcador ecotoxicológico adecuado
para ambientes acuáticos contaminados y es una herramienta importante para
futuros estudios toxicológicos.
Contaminación hídrica
Acumulación de una o más sustancias ajenas al agua que pueden generar una gran
cantidad de consecuencias, entre las que se incluye el desequilibrio en la vida de los
seres vivos

5. Medios de cultivo
Conjunto de componentes que crean las condiciones necesarias para el
desarrollo de los microorganismos.
Componentes:
• Agar
• Extractos
• Sistemas amortiguadores
Morfología colonial bacteriana en medios de cultivo
• Tamaño: Puntiforme, pequeña, mediana, grande-
• Forma: Circular, fusiforme, rizoide, filamentosa, irregular
• Borde: Entero, rizoide, filamentosa, ondulado, lobulado,
rizado.
• Transparencia: Opaca, transparente.
• Brillo: brillantes, sin brillo.
• Color: No pigmentadas o pigmentadas
• Elevación: Plana, elevada, elevada, convexa, pulvinada,
umbilicada
• Textura: Lisa, rugosa.
• Consistencia: Dura, suave, mucoide
• Agentes reductores
• Agentes selectivos
• Peptonas

6. Objetivo general
• Determinar la calidad del agua de la Quebrada Turunuma de la ciudad de Loja mediante el uso de la
Artemia Salina como bioindicador, la valoración de los parámetros físico-químicos y pruebas
bioquímicas.
Objetivos específicos
• Evaluar el grado de toxicidad de las muestras selectas de la Quebrada Turunuma de la ciudad de Loja
mediante pruebas toxicológicas por medio del bioindicador Artemia Salina
• Identificar el tipo de bacterias a través de pruebas de laboratorio como la Tinción de Gram, pruebas de
TS y pruebas de SIM.
• Determinar los parámetros físico-químicos de las muestras de agua recogida de la Quebrada Turunuma
OBJETIVOS

7. Metodología
Presentar gráficos,
tablas y resultados
relevantes

8. Delimitación geográfica:
Provincia: Loja
El área de estudio del punto 5 se encuentra situada en la
parroquia Suque en el barrio Turunuma, Quebrada
Turunuma de la provincia de Loja - Ecuador, dicho punto
se localiza con los siguientes datos:
 Latitud: -3.976777549482166.
 Longitud: -79.20333825051785.
 DMS: 3° 58′ 36.4″ S | 79° 12′ 12.02″ W.
 UTM: 699477.911 E 9560222.555 N 17M.
 MGRS: 17 MPR 99478 60223.
 EPSG:4326 -79.20333825 -3.97677755.
 Calles: C. Juan José Flores 1239, Loja, Ecuador.

9. Procedimiento
Macroorganismos: ARTEMIAS SALINAS
•Colocamos en una fuente agua
destilada y enjuagamos las cajas Petri,
luego en otra fuente colocamos agua
con cloro y volvemos a enjuagar las
cajas Petri. Finalmente, las colocamos
en una franela y las vamos secando
con papel una por una.
Día 1: Desinfección
de las cajas Petri.
•Con ayuda de una probeta medimos
20 ml de agua destilada y lo ubicamos
en una caja Petri luego con ayuda de
una cuchara o espátula colocar los
huevos de Artemias, finalmente
colocar la caja Petri en un lugar
oscuro y que esta no esté tapada
completamente. Esperar máximo 12
horas para la próxima hidratación.
Día 2. Primera
hidratación de los
huevos de Artemia
•Quitar las artemias que estan flotando,
luego con ayuda de una probeta
medimos 30 ml de agua de mar (pH
9) la cual se la iba colocando en la
caja Petri de 10 ml en 10 en cierto
tiempo, por ultimo colocamos la caja
en un lugar que oscilaba los 19 °C.
Esperar 24 horas para su eclosión
Día 3. Segunda
hidratación
•Una vez obtenida la muestra de río, empezaremos a
realizar las disoluciones en cajas Petri
•D -1. 1 ml de la muestra y 9 ml de agua destilada
•D -2. 9 ml de agua destilada y con ayuda de una pipeta
colocamos 1 ml de la disolución -1.
•D -3. 9 ml de agua destilada y con ayuda de una pipeta
colocamos 1 ml de la disolución -2
•D -4. 9 ml de agua destilada y con ayuda de una pipeta
colocamos 1 ml de la disolución -3
•D -5. 9 ml de agua destilada y con ayuda de una pipeta
colocamos 1 ml de la disolución -4 y desechamos 1 ml
•Colocamos con la ayuda de una pipeta Pasteur 10
Artemias en cada disolución.
1.Preparación de las cajas
para la siembra por dilución
seriada.

10. Microorganismos: MEDIOS DE CULTIVO
• Pesamos 50 gramos de agar y 100 ml de agua los colocamos en un
matraz y homogenizamos alrededor de 10 a 15 mn.
• Una vez que sale del agitador llevamos al matraz a la autoclave
para esterilizarlo durante 15 minutos a 121 °C y a 15 de presión.
• Una vez esterilizado el matraz, antes de que se solidifique el medio
debemos colocarlo en las 10 cajas Petri sin llenar mucho la caja.
• Por último, cerrar las cajas Petri, sellarlas con cinta Parafilm y
ponerlas en refrigeración.
Preparación de las disoluciones.
Estas disoluciones se van a preparar en la cámara de flujo
laminar y en tubos con tapa rosca
• Dilución – 1. 1 ml de la muestra de río y 9 ml de agua
autoclavada
• Dilución -2. 1 ml de la disolución -1 y 9 ml de agua
autoclavada.
• Dilución -3. 1 ml de la disolución -2 y 9 ml de agua
autoclavada.
• Dilución -4. 1 ml de la disolución -3 y 9 ml de agua
autoclavada.
• Dilución -5. 1 ml de la disolución -4 y 9 ml de agua
autoclavada, tapamos el tubo y lo colocamos en el vortex por
20 segundos, finalmente con ayuda de otra pipeta cogemos un
1 ml y lo desechamos.
• Control + : Colocar 0.1 ml de la muestra de río y se la
procederá a sellar.
• Control - : Solo será una caja con el medio de cultivo, la cual
no se debe abrir.
Medios de cultivo

11. Obtención de cultivos mixtos
 Siembra del cultivo
1) Colocar con ayuda de la pipeta 0,1 ml de muestra de cada
tubo.
2) Cuando ya tengamos nuestras cajas con el inoculo de 0.1
ml, ponemos el aza en el mechero hasta que presenté una
coloración roja con el fin de esterilizarla, dejamos que se
enfríe, después la colocamos sobre el 0.1 ml de muestra y la
comenzamos a arrastrar en forma de zic-zac llenando toca la
caja.
3) Esto se repite para cada una de las cajas en las que se puso
los 0.1 ml de muestra de río.
4) Por último, sellamos nuestras cajas con la cinta film y las
llevamos a la incubadora a unos aproximados 28 °C.
5) Se las deja en la incubadora durante 48 horas y se las revisa
cada 24 horas.

12. Obtención de los cultivos puros.
• Al finalizar el cultivo mixto debemos tener en total 10 cajas Petri en las cuales va a haber crecimiento microbiano, el cual se podrá diferenciar
por el color y tamaños de las colonias microbianas.
• Dentro de la cámara de flujo laminar vamos a aislar cada colonia microbiana en una nueva caja Petri que contenga medio de cultivo. Para esto
esterilizamos el asa con un mechero, luego con el asa tomo una muestra de la colonia y la siembro en la caja Petri en forma de estriado. Este
mismo proceso se repite para todas las colonias diferentes. Siempre tener el asa y las cajas Petri cerca del mechero para evitar contaminaciones.
• Finalizado esto vamos a poner las cajas a incubar durante 24 horas a ver si se da el crecimiento de las
Tinción Gram.
• Con ayuda de un asa recogemos de una caja una
muestra de colonias bacterianas y realizamos el
frotis en un portaobjetos y debemos fijar la
muestra para eso la acercamos al mechero
durante unos segundos.
• Después ponemos el portaobjeto en un lavado
con ayuda de unas rejillas y teñimos con cristal
violeta durante 30 segundos, tiramos el exceso de
colorante, añadimos Lugol, esperaremos un
minuto, decoloramos con etanol al 95%, 20
segundos, lavamos con agua, añadimos el
colorante de contraste, safranina, esperamos 1
minuto, lavamos con agua y observamos en el
microscopio para saber si es una bacteria gram-
negativa o gram-positiva

13. CONCLUSIONES.

14. Pruebas microbiológicas de los gram-negativos.
TSI (AGAR HIERRO- TRIPLE AZUCAR).
• Primero se sacó los medios de cultivo de la incubadora,
luego esterilizamos el asa en el mechero, enfriamos el
asa, destapamos la caja Petri con el cultivo y tomamos
una muestra de nuestro medio de cultivo -1. Luego
destapamos el tubo de ensayo con el medio TSI e
inoculamos en el medio en una sola punción en forma
de estriado, flameamos el tubo, sellamos y lo ponemos
en incubación.
• Repetimos el mismo procedimiento en el medio de
cultivo a la -4.
SIM (AGAR HIERRO- TRIPLE AZUCAR).
• Primero se sacó los medios de cultivo de la incubadora, luego
esterilizamos el asa en el mechero, enfriamos el asa,
destapamos la caja Petri con el cultivo y tomamos una
muestra de nuestro medio de cultivo -1. Luego destapamos el
tubo de ensayo con el medio SIM e inoculamos en el medio
en una sola punción en forma de estriado, flameamos el tubo,
sellamos y lo ponemos en incubación.
• Repetimos el mismo procedimiento en el medio de cultivo a
la -4.

15. Cátedra Integradora.
Ingeniería Ambiental.
Tercer Ciclo.
2020-2021.