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Journal of Cereal Science
Fenólicos são compostos que possem pelo menos um
anel aromático ligado a um grupo hidroxila.
- Formação a partir de diferentes rotas/ precursores.
Ácido benzóico: Ácido gálico, Protocatéquico, e
p-hidroxibenzóico;
Ácido cinâmico: Ácido caféico, p-cumárico, e ferúlico.
Ácido benzóico Ácido cinâmico
Ácidos fenólicos: Constituem aproximadamente 30% do
teor de fenólico dietético em plantas de forma livre
(isolada) e vinculada;
Forma vinculada: Mais encontrada
- Ésteres, glicosídeos (ligados a açúcares) e complexos
insolúveis (ligados a elementos da parede vegetal –
Lignina)
 Contribuem para o sabor, odor e coloração de
diversos tipos de vegetais – Importantes
economicamente pela utilização como flavorizantes e
corantes de alimentos e bebidas.
Atenção tem sido dada às atividades
antioxidantes exibidas por ácidos fenólicos e
os seus derivados contra radicais livres e
outras espécies reativas de oxigênio;
Benefícios para a saúde;
Prevenção de doenças crônicas (cancer,
doenças cardiovasculares, etc.).
México maior diversidade de recursos
genéticos de milho do mundo 59 tipos
vários pigmentados azul e vermelho;
Cereais Benefícios a saúde;
Fitoquímicos: Fenólicos, antocianinas.
Propriedades do milho: Anticarcinogênicas.
Nixtamalização: processo de cozimento do
milho em solução alcalina (cal) águas residuais
(nejayote) fitoquímicos;
Nixtamal (massa): tortilhas e salgadinhos.
Cozimento por extrusão: Altas temperaturas
(parede extrusor – Vapor) e pressão Não gera
águas residuais Nutrientes mantidos Produto
grão inteiro.
Avaliar o efeito do processo de
nixtamalização tradicional e cozimento por
extrusão no teor de compostos fenólicos,
ácido ferúlico e antocianinas;
Avaliar a atividade antioxidante de tortillas
produzidas a partir de milhos mexicanos
comuns e pigmentados.
Produção de farinha nixtamalizada
 100g de milho foram cozidos em solução 5.4 g de Ca(OH)
para 2/L de água destilada a 85 °C;
 8,1 horas de infusão;
 Água residual foi descartada;
 Massa lavada por 40s em água corrrente;
 Massa foi seca a 55 °C por 12 horas em forno de ar forçado;
 Massa estabilizou a temperatura ambiente após 30 min em
dessecador;
 Moagem da massa Armazenagem a -20 °C.
Controle
Vermelho Azul
Produção de farinha de milho extrusada
 Lotes de 1 kg de milho: Liquidificador (baixa velocidade) 2 mm
Liquidificador (alta velocidade) 0,074 mm
 Grãos finos: misturados com cal [0,21 g de Ca (OH)2 /100 de
milho] e condicionado com água destilada teor de humidade de
28%
 Cada lote foi embalado em sacos de polietileno e armazenadas
durante 12 horas a 4 º C;
 Antes da extrusão: grânulos foram submetidos a 25 º C durante 8
h.
 Amostras foram extrudidas e arrefecidas a temperatura ambiental;
 Moagem;
 Armazenagem a -20 º C.
Preparação de Tortillas a partir de farinhas de milho nixtamalizado e
extrudido
 Mistura de 200 g da farinha de milho nixtamalizado/ extrudido com 200
mL de água (consistência)
 Pedaços de massa fresca (30g) foram prensados ​​e moldados em discos
planos (15 cm);
 Discos foram assados ​​em uma frigideira quente de 260 – 280º C por 15
s de um lado - 30 s, do outro lado e novamente no primeiro lado;
 Tortilhas prontas/ secas foram moídas, embaladas e armazenadas em
sacos plásticos a - 20 º C até à sua utilização.
Extração de fenólicos livres
 1g de amostra misturada com 10 mL de solução
resfriada etanol/ água (80:20, v / v) por 10 min;
 Centrifugação a 2, 500 g por 10 min;
 Sobrenadante evaporado para 2 mL a 45º C;
 Armazenado a -80º C até utilização.
Extração de fenólicos ligados (insolúveis)
Após a extração de fenólicos livres:
 Resíduo digerido com 10 mL de hidróxido de sódio 2 M em banho de maria a 95º
C durante 30 minutos com remoção de O2, usando N2;
 Amostra foi agitada durante 1 hora na mesma temperatura do banho;
 Mistura acidificada (pH <2,0) com 2 mL de ácido clorídrico;
 Extração com hexano para remover os lípidos;
 Solução final: extraída cinco vezes com 10 mL de acetato de etila;
 Frações reunidas e evaporadas em rotaevaporador a 35 º C
 ;
 Ressuspensos em 2 mL de solução água/ metanol (50:50, v / v).
Extração de fenólicos conjugados (esterificados e
glicosilados)
 Extrato de fenólicos livres (0,5 mL) foi digerido com 2 mL de
hidróxido de sódio 2M por 1h à temperatura ambiente;
 Mistura foi acidificada (pH <2,0) com 2 mL de ácido clorídrico
2M e extraída com hexano para remover os lípidos;
 Extração 5 vezes com 2 mL de acetato de etila;
 Frações foram reunidas e evaporadas em rotaevaporador, a
35º C;
 Ressuspensos em 2 mL de solução acetonitrila/ água (20:80,
v / v) para a análise cromatográfica do ácido ferúlico.
Determinação de fenólicos totais
 20 mL de diluições adequadas de extratos
misturadas com 180 mL de reagente de Folin-
Ciocalteu;
 Após 20 min absorbância foi medida a 750 nm
utilizando um leitor de microplacas;
 A curva de calibração foi elaborada
utilizando ácido gálico.
Determinação de antocianinas
 1 g de amostra foi misturado com 10 mL de solução de metanol
acidificado (metanol 95% e 1 N HCl 85:15, v/ v) num tubo de
centrífuga de 50 mL;
 Tubo sob agitação por 30 min;
 Centrifugação a 3000g por10 minutos;
 Sobrenadante foi recolhido;
 Leituras a 535 nm foram colhidas e corrigidas para o fundo
absorbância a 700 nm (devido a turbidez) utilizando leitor de
microplaca.
Análise de ácido ferúlico
Extratos de fenólicos livres, conjugados e
ligados foram utilizados para quantificar o
ácido ferúlico utilizando HPLC;
Injeções de vinte microlitros foram
utilizados para todas as análises.
Atividade antioxidante
Capacidade de absorção do radical de oxigênio (ORAC)
 Verifica a capacidade sequestradora de um antioxidante frente a
um radical peroxila induzido pelo 2-amidinopropano
dihidrocloreto a 37º C;
 Radical peroxila reage com um composto fluorescente formando
um produto não fluorescente;
 Efeito antioxidante Cálculo da área formada abaixo da curva
de decréscimo da fluorescência amostra x tempo quando
comparada ao branco.
 Milho branco branco contém o maior teor de fenólicos totais: 167,4 mg de ácido
gálico/100 g de matéria seca;
 As outras variedades não foram estatisticamente diferentes.
Genética – Estrutura dos grãos (pericarpo/ Aleurona = Alto teor de fenólicos)
A maioria dos compostos fenólicos
(> 80%) em grãos de milho e suas
tortillas ocorreu no limite ou anexo a
forma da parede celular (ligados à
hemicelulose nas paredes de células
da camada de aleurona do pericarpo e
germe)
Teor de
fenólicos
 Nixtamalização convencional e cozimento por extrusão causaram perdas de
compostos fenólicos totais;
 Teores totais em farinhas nixtamalizadas foram menores que com farinhas
extrusadas;
 Tortillas nixtamalizadas de milho amarelo possuem maior teor de fenólicos do que as
outras nixtamalizadas.
Teor de
fenólicos
Cozimento por extrusão permitiu a
retenção da maioria dos compostos
fenólicos.
 De 97 e 99% do ácido ferúlico está na forma ligada;
 Maior concentração: Grão vermelho branco amarelo;.
 Todos os tipos de milho: Concentrações de ácido ferúlico livres em tortilhas com
farinhas nixtamalizadas = significativamente maiores que em extrusadas;
 Tortillas nixtamalizadas de milho branco, amarelo e azul continham 6, 5 e 2 vezes
mais ácido ferúlico livre comparado com seus homólogos de farinha extrusada.
Ácido ferúlico
 Maiores concentrações: Azul Vermelho Amarelo Branco;
 Nixtamalização e extrusão reduziram o valor de antocianinas em tortilhas de
milho azul.
Antocianinas
PH Antocianinas
Ambos os processos degradam parte das antocianinas presentes em grãos crus.
 Milhos branco, vermelho e milho amarelo = Maior capacidade antioxidante que o
milho azul ( concentração de antocianinas concentração de ácido ferúlico)
 A maioria das tortilhas produzidos a partir de farinhas extrusadas retém mais do que
90% do valor antioxidante observada em grãos crus.
Cozimento por extrusão pode ser um instrumento para manter níveis mais
elevados de fitoquímicos, como ácido ferúlico e atividade antioxidante em tortilla
Capacidade antioxidante
 Tortillas nixtamalizadas e extrusadas retém de maneira diferente compostos
fenólicos, o ácido ferúlico, antocianinas e atividade antioxidante;
 Ambos os processos promoveram a perda de fenólicos e antioxidantes,
mas o processo de extrusão teve menores perdas;
 O total de ácido ferúlico de tortillas produzidas a partir de farinhas
extrusadas foi significativamente maior em comparação com tortillas
tradicionais;
 O conteúdo de antocianinas foi igualmente afetado por ambos os
processos de tortilla;
 Comparando com tortillas nixtamalizadas, o cozimento de extrusão
proposto processo teve um impacto positivo sobre as quantidades de
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mantença dessas propriedades!

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Fenólicos em diferentes variedades de milho mexicano e efeito do processamento na composição e atividade antioxidante de tortillas

  • 2. Fenólicos são compostos que possem pelo menos um anel aromático ligado a um grupo hidroxila. - Formação a partir de diferentes rotas/ precursores. Ácido benzóico: Ácido gálico, Protocatéquico, e p-hidroxibenzóico; Ácido cinâmico: Ácido caféico, p-cumárico, e ferúlico. Ácido benzóico Ácido cinâmico
  • 3. Ácidos fenólicos: Constituem aproximadamente 30% do teor de fenólico dietético em plantas de forma livre (isolada) e vinculada; Forma vinculada: Mais encontrada - Ésteres, glicosídeos (ligados a açúcares) e complexos insolúveis (ligados a elementos da parede vegetal – Lignina)  Contribuem para o sabor, odor e coloração de diversos tipos de vegetais – Importantes economicamente pela utilização como flavorizantes e corantes de alimentos e bebidas.
  • 4. Atenção tem sido dada às atividades antioxidantes exibidas por ácidos fenólicos e os seus derivados contra radicais livres e outras espécies reativas de oxigênio; Benefícios para a saúde; Prevenção de doenças crônicas (cancer, doenças cardiovasculares, etc.).
  • 5. México maior diversidade de recursos genéticos de milho do mundo 59 tipos vários pigmentados azul e vermelho; Cereais Benefícios a saúde; Fitoquímicos: Fenólicos, antocianinas. Propriedades do milho: Anticarcinogênicas.
  • 6. Nixtamalização: processo de cozimento do milho em solução alcalina (cal) águas residuais (nejayote) fitoquímicos; Nixtamal (massa): tortilhas e salgadinhos. Cozimento por extrusão: Altas temperaturas (parede extrusor – Vapor) e pressão Não gera águas residuais Nutrientes mantidos Produto grão inteiro.
  • 7. Avaliar o efeito do processo de nixtamalização tradicional e cozimento por extrusão no teor de compostos fenólicos, ácido ferúlico e antocianinas; Avaliar a atividade antioxidante de tortillas produzidas a partir de milhos mexicanos comuns e pigmentados.
  • 8. Produção de farinha nixtamalizada  100g de milho foram cozidos em solução 5.4 g de Ca(OH) para 2/L de água destilada a 85 °C;  8,1 horas de infusão;  Água residual foi descartada;  Massa lavada por 40s em água corrrente;  Massa foi seca a 55 °C por 12 horas em forno de ar forçado;  Massa estabilizou a temperatura ambiente após 30 min em dessecador;  Moagem da massa Armazenagem a -20 °C. Controle Vermelho Azul
  • 9. Produção de farinha de milho extrusada  Lotes de 1 kg de milho: Liquidificador (baixa velocidade) 2 mm Liquidificador (alta velocidade) 0,074 mm  Grãos finos: misturados com cal [0,21 g de Ca (OH)2 /100 de milho] e condicionado com água destilada teor de humidade de 28%  Cada lote foi embalado em sacos de polietileno e armazenadas durante 12 horas a 4 º C;  Antes da extrusão: grânulos foram submetidos a 25 º C durante 8 h.  Amostras foram extrudidas e arrefecidas a temperatura ambiental;  Moagem;  Armazenagem a -20 º C.
  • 10. Preparação de Tortillas a partir de farinhas de milho nixtamalizado e extrudido  Mistura de 200 g da farinha de milho nixtamalizado/ extrudido com 200 mL de água (consistência)  Pedaços de massa fresca (30g) foram prensados ​​e moldados em discos planos (15 cm);  Discos foram assados ​​em uma frigideira quente de 260 – 280º C por 15 s de um lado - 30 s, do outro lado e novamente no primeiro lado;  Tortilhas prontas/ secas foram moídas, embaladas e armazenadas em sacos plásticos a - 20 º C até à sua utilização.
  • 11. Extração de fenólicos livres  1g de amostra misturada com 10 mL de solução resfriada etanol/ água (80:20, v / v) por 10 min;  Centrifugação a 2, 500 g por 10 min;  Sobrenadante evaporado para 2 mL a 45º C;  Armazenado a -80º C até utilização.
  • 12. Extração de fenólicos ligados (insolúveis) Após a extração de fenólicos livres:  Resíduo digerido com 10 mL de hidróxido de sódio 2 M em banho de maria a 95º C durante 30 minutos com remoção de O2, usando N2;  Amostra foi agitada durante 1 hora na mesma temperatura do banho;  Mistura acidificada (pH <2,0) com 2 mL de ácido clorídrico;  Extração com hexano para remover os lípidos;  Solução final: extraída cinco vezes com 10 mL de acetato de etila;  Frações reunidas e evaporadas em rotaevaporador a 35 º C  ;  Ressuspensos em 2 mL de solução água/ metanol (50:50, v / v).
  • 13. Extração de fenólicos conjugados (esterificados e glicosilados)  Extrato de fenólicos livres (0,5 mL) foi digerido com 2 mL de hidróxido de sódio 2M por 1h à temperatura ambiente;  Mistura foi acidificada (pH <2,0) com 2 mL de ácido clorídrico 2M e extraída com hexano para remover os lípidos;  Extração 5 vezes com 2 mL de acetato de etila;  Frações foram reunidas e evaporadas em rotaevaporador, a 35º C;  Ressuspensos em 2 mL de solução acetonitrila/ água (20:80, v / v) para a análise cromatográfica do ácido ferúlico.
  • 14. Determinação de fenólicos totais  20 mL de diluições adequadas de extratos misturadas com 180 mL de reagente de Folin- Ciocalteu;  Após 20 min absorbância foi medida a 750 nm utilizando um leitor de microplacas;  A curva de calibração foi elaborada utilizando ácido gálico.
  • 15. Determinação de antocianinas  1 g de amostra foi misturado com 10 mL de solução de metanol acidificado (metanol 95% e 1 N HCl 85:15, v/ v) num tubo de centrífuga de 50 mL;  Tubo sob agitação por 30 min;  Centrifugação a 3000g por10 minutos;  Sobrenadante foi recolhido;  Leituras a 535 nm foram colhidas e corrigidas para o fundo absorbância a 700 nm (devido a turbidez) utilizando leitor de microplaca.
  • 16. Análise de ácido ferúlico Extratos de fenólicos livres, conjugados e ligados foram utilizados para quantificar o ácido ferúlico utilizando HPLC; Injeções de vinte microlitros foram utilizados para todas as análises.
  • 17. Atividade antioxidante Capacidade de absorção do radical de oxigênio (ORAC)  Verifica a capacidade sequestradora de um antioxidante frente a um radical peroxila induzido pelo 2-amidinopropano dihidrocloreto a 37º C;  Radical peroxila reage com um composto fluorescente formando um produto não fluorescente;  Efeito antioxidante Cálculo da área formada abaixo da curva de decréscimo da fluorescência amostra x tempo quando comparada ao branco.
  • 18.  Milho branco branco contém o maior teor de fenólicos totais: 167,4 mg de ácido gálico/100 g de matéria seca;  As outras variedades não foram estatisticamente diferentes. Genética – Estrutura dos grãos (pericarpo/ Aleurona = Alto teor de fenólicos) A maioria dos compostos fenólicos (> 80%) em grãos de milho e suas tortillas ocorreu no limite ou anexo a forma da parede celular (ligados à hemicelulose nas paredes de células da camada de aleurona do pericarpo e germe) Teor de fenólicos
  • 19.  Nixtamalização convencional e cozimento por extrusão causaram perdas de compostos fenólicos totais;  Teores totais em farinhas nixtamalizadas foram menores que com farinhas extrusadas;  Tortillas nixtamalizadas de milho amarelo possuem maior teor de fenólicos do que as outras nixtamalizadas. Teor de fenólicos Cozimento por extrusão permitiu a retenção da maioria dos compostos fenólicos.
  • 20.  De 97 e 99% do ácido ferúlico está na forma ligada;  Maior concentração: Grão vermelho branco amarelo;.  Todos os tipos de milho: Concentrações de ácido ferúlico livres em tortilhas com farinhas nixtamalizadas = significativamente maiores que em extrusadas;  Tortillas nixtamalizadas de milho branco, amarelo e azul continham 6, 5 e 2 vezes mais ácido ferúlico livre comparado com seus homólogos de farinha extrusada. Ácido ferúlico
  • 21.  Maiores concentrações: Azul Vermelho Amarelo Branco;  Nixtamalização e extrusão reduziram o valor de antocianinas em tortilhas de milho azul. Antocianinas PH Antocianinas Ambos os processos degradam parte das antocianinas presentes em grãos crus.
  • 22.  Milhos branco, vermelho e milho amarelo = Maior capacidade antioxidante que o milho azul ( concentração de antocianinas concentração de ácido ferúlico)  A maioria das tortilhas produzidos a partir de farinhas extrusadas retém mais do que 90% do valor antioxidante observada em grãos crus. Cozimento por extrusão pode ser um instrumento para manter níveis mais elevados de fitoquímicos, como ácido ferúlico e atividade antioxidante em tortilla Capacidade antioxidante
  • 23.  Tortillas nixtamalizadas e extrusadas retém de maneira diferente compostos fenólicos, o ácido ferúlico, antocianinas e atividade antioxidante;  Ambos os processos promoveram a perda de fenólicos e antioxidantes, mas o processo de extrusão teve menores perdas;  O total de ácido ferúlico de tortillas produzidas a partir de farinhas extrusadas foi significativamente maior em comparação com tortillas tradicionais;  O conteúdo de antocianinas foi igualmente afetado por ambos os processos de tortilla;  Comparando com tortillas nixtamalizadas, o cozimento de extrusão proposto processo teve um impacto positivo sobre as quantidades de produtos nutracêuticos, especialmente os antioxidantes. Necessidade de estudos/ novas técnicas de processamento para mantença dessas propriedades!