Materia: Bacteriología 5to Semestre Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces de crecer con citrato como única fuente de carbono y sales amónicas inorgánicas como única fuente de nitrógeno, provocando la alcalinización del medio.

1. UNIVERSIDAD ESTATAL DEL
SUR DE MANABÍ
MATERIA: BACTERIOLOGÍA
TEMA: DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO AGARES Y PRUEBA
BIOQUÍMICAS
DOCENTE: TERESA VELIZ
ESTUDIANTE: RODRIGUEZ CASTILLO ANGIE LUCCIOLA
CURSO: 5TO C
SEGUNDO PERIODO ACADÉMICO

2. DIAGNÓSTICO BACTERIOLÓGICO AGARES
Y PRUEBA BIOQUÍMICAS

3. FUNDAMENTO
• Esta prueba nos permite diferenciar un grupo de bacterias que son capaces
de crecer con citrato como única fuente de carbono y sales amónicas
inorgánicas como única fuente de nitrógeno, provocando la alcalinización
del medio.
El medio a utilizar es agar Citrato de Simons, que contiene citrato de
sodio, fosfato de amonio y azul de bromotimol como indicador de pH.

4. AGAR CITRATO
• Sembrado
• Partiendo de un cultivo puro, del microorganismo en
estudio, tomar una colonia, bien aislada, y estriar
sobre la superficie inclinada del tubo
PROCEDIMIENTO
La utilización del citrato por la bacteria que se va a probar se
detecta en el medio de citrato por la producción de, subproductos
alcalinos.
El medio contiene citrato de sodio, que es un anión, como única
fuente de carbono, y fosfato de amonio como única fuente de
nitrógeno

5. El medio para citrato utilizado con mayor frecuencia es la formula de Simmons. El medio se coloca
en tubos inclinados (agar en pico de flauta).
PROCEDIMIENTO Se toma una colonia bien aislada de la superficie de un medio de aislamiento primario
y se siembra en forma de estría única en el pico de flauta (agar inclinado) del tubo de agar citrato
 La prueba también puede considerarse positiva sin que haya color azul, si hay desarrollo visible en la
estría de siembra. Esto es valido porque para que el desarrollo sea visible, el microorganismo debió haber
ingresado en la fase logarítmica de crecimiento, lo que solo es posible si ha asimilado carbono y nitrógeno.
Material
Un tubo con medio agar citrato Simmons y un cultivo bacteriano
Procedimiento
Sembrar con un asa de siembra en la superficie inclinada del medio e incubar a 37 ºC durante 24-48
horas.
Revelado
Las bacterias capaces de usar el citrato provocarán el cambio de color del medio de verde a azul intenso,
por viraje del indicador de pH, azul de bromotimol, a la vez que se
observa crecimiento en la superficie.

6. Tras el periodo de inbación se procede a la lectura
de los resultados. Si el medio vira a color azul será
citrato positivo, de lo contrario será citrato negativo.
Incubación
Colocar en estufa de cultivo a 35-37 ºC durante 24-48
hs, en aerobiosis. Hay microorganismos que requieren
hasta 6 días de incubación.
EXPRESION DE RESULTADOS
Positivo: se observa crecimiento en el medio, con un intenso color azul.
Negativo: se observa ausencia o muy poco crecimiento y el medio permanece de color verde
El indicador es el azul de bromotimol, que es amarillo por debajo de pH 6 y azul por encima de pH 7,6.
La prueba positiva esta representada por la producción de color azul oscuro en el termino de 24 a 48 horas,
que indica que el microorganismo en prueba ha sido capaz de utilizar el citrato contenido en el medio, con
formación de productos alcalinos

7. Microorganismos Positivos • Salmonella • Arizona • Citrobacter • Enterobacter •
Klebsiella • Serratia licuefaciensis • Pseudomonas cepacia Microorganismos
Negativos • Edwarsiella • Yersinia enterocolítica • Escherichia coli • Shigella •
Yersinia pseudotuberculosis • Otras especies de Moraxella • Proteus morganii
Sólo las bacteriascapaces de metabolizar el citrato podrán multiplicarse en este medio y liberarán iones
amonio lo que, junto con la eliminación del citrato (ácido), generará una fuerte alcalinización del medio que
será aparente por un cambio de color del indicador de pH, de verde a azul.

8. Este Agar es utilizado como prueba bioquímica de identificación de
microorganismos
El medio Citrato de Koser consistía en un caldo que contenía fosfato de sodio, fosfato de amonio,
fosfato monopotásico, sulfato de magnesio y citrato de sodio.
La bacteria inoculada en ese medio solo puede reproducirse si es capaz de tomar el carbono del
citrato. La prueba era positiva si había turbidez en el medio, sin embargo tenía el inconveniente de
que podía ocurrir turbidez no específica.
En esta prueba la única fuente de carbono ofrecida es el citrato.
Interpretación
Si el medio queda del color original (verde) y no hay crecimiento visible, la prueba es negativa, pero
si el medio cambia a color azul, indica la presencia de productos alcalinos, que es detectado por el
indicador de pH. En este caso la prueba es positiva.

9. Consideraciones finales
El medio citrato de Simmons es una prueba muy delicada, pues se pueden
obtener falsos positivos si se cometen ciertos errores.
Son dos los aspectos que confirman la positividad de la prueba:
a) La observación de crecimiento sobre el pico de flauta.
b) La variación de coloración de verde a azul, debido a la alcalinización del medio,
producida por la liberación de sodio del citrato utilizado, sodio, que con las moléculas de
agua presentes formará Na(OH).
Interpretación de los resultados
Determina la capacidad que poseen algunos microorganismos de utilizar como única fuente de
carbono el citrato, produciendo alcalinidad. El medio utilizado es el agar citratado de Simmons. Se
inocula en estría, en el pico de flauta, empezando desde el fondo hasta la parte más alta e incubar a
37° C durante veinticuatro a cuarenta y ocho horas.
PRUEBA DEL CITRATO

10. CONCLUSIÓN
Las reacciones de cada agar y de las pruebas bioquímicas, se basan en componentes específicos que
inhiben o permiten el crecimiento de bacterias, lo que proporciona una amplia gama de opciones para el
aislamiento e identificación del microorganismo involucrado en procesos infecciosos.
Aun bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en dos especies diferentes con base a pruebas
bioquímicas. Por ejemplo, las bacterias entéricas gram negativas, forman un grupo muy grande y
heterogéneo cuyo hábitat natural es el tracto gastrointestinal de humanos y otros animales. Esta
familia, Enterobacteriaceae, incluye a varios patógenos que causan síndromes diarreicos

11. Referencias
1.-Mac Faddin J. (2003). Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias
de importancia clínica. 3era ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires.
Argentina.
2.-Laboratorios Valtek Diagnostic. Agar Citrato de Simmons. 2016. Disponible
en: andinamedica.com.