En el siguiente archivo se desarrolla la práctica para la identificación de proteínas, en el cual se encuentran las técnicas llevadas a cabo y sus respectivos resultados.

1. CETis No.62
Práctica No.6: Identificación
de proteínas.
Especialidad: Laboratorio clínico.
Asignatura: Bioquímica.
Profesora: Marta Gabriela Aceves
Morales.
Equipo No.5:
Moreno Vidal Manuel Alejandro.
Quintanilla Moreno Jennifer.
Razo Arredondo Ramón Emmanuel.
Romero Vázquez Leslie.
Vidal Ramírez Ramiro.
Grado y grupo: “6°E

2. OBJETIVO.
Realizar experimentos para identificar las proteínas, como la configuración y la
identificación por el reactivo BIURET.
MARCO TEORICO.
Proteína, cualquiera de los numerosos compuestos orgánicos constituidos por
aminoácidos unidos por enlaces peptídicos que intervienen en diversas funciones
vitales esenciales, como el metabolismo, la contracción muscular o la respuesta
inmunológica. Se descubrieron en 1838 y hoy se sabe que son los componentes
principales de las células y que suponen más del 50% del peso seco de los
animales. El termino proteína deriva del griego proteico, que significa primero.
El plasma sanguíneo normal contiene de 6.5 a 7.5gr de proteínas por 100al. Las
proteínas plasmáticas pueden dividirse en 3 grupos: a) fibrinógenos; b) globulinas;
c) albuminas. Cada una de estas variedades pueden ser precipitadas en bases a
su solubilidad en soluciones salinas, y se logra una separación simple o burda
mediante precipitación salina de dichas proteínas o fuerzas iónicas diferentes.
La precipitación salina con sulfato de amonio es una etapa preliminar útil en
muchas técnicas de aislamiento de proteínas en particular de enzimas. Existen 2
tipos de lograr esta etapa de purificación o bien sea añadiendo sulfato de amonio
sólido, o bien sea con una solución saturada (100 por 100) neutra del mismo. En el
primer caso, existe ventaja de mantener en un mínimo el aumento de volumen; en
cambio la solución saturada presenta la ventaja de una manipulación más
cómoda.
Las moléculas proteicas van desde las largas fibras insolubles que forman el tejido
conectivo y el pelo, hasta los glóbulos compactos solubles, capaces de atravesar
la membrana celular y desencadenar reacciones metabólicas. Tienen un peso
molecular elevado y son específicas de cada especie y de cada uno de sus
órganos. Se estima que el ser humano tiene unas 30.000 proteínas distintas, de
las que solo un 2% se ha descrito con detalle. Las proteínas sirven sobre todo
para construir y mantener las células, aunque su descomposición química también
proporciona energía, con un rendimiento de 4 kilocalorías por gramo, similar al de
los hidratos de carbono.
Las enzimas son proteínas, al igual que la insulina y casi todas las demás
hormonas, los anticuerpos del sistema inmunológico y la hemoglobina.

3. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET).
MATERIAL.
-1 gradilla
-Pescado

4. -Espinaca
-Levadura
-Tubos de ensaye
-Albúmina
-Grenetina

5. -Caseína
REACTIVOS.
-NaOH al 10%
-Sulfato cúprico al 1% en gotero
PROCEDIMIENTO.
1. En cada tubo de ensaye colocar 2ml de solución de proteína (diluida al 1%).
2. Añadir a cada tubo 2ml de NaOH al 10% y agitar.
3. Agregar gota a gota solución de sulfato cúprico al 1% hasta la aparición de un
color rosa o violeta (máximo 10 gotas).
4. Reportar a que gota aparece el color.

6. RESULTADOS.
ProteÍna Gotas Utilizadas
Espinacas 10 Gotas
Levadura 6 Gotas
Grenetina 4 Gotas
Pescado 3 Gotas
Albúmina 3 Gotas
Leche 3 Gotas
REACCIÓN XANTOPROTEICA.
MATERIAL.
-Tubos de ensaye

7. -Gradilla
-Baño maría
REACTIVOS.
-Proteínas.
- NaOH concentrado (gotero)

8. - HNO3 concentrado
PROCEDIMIENTO.
1. Colocar en cada tubo de ensaye 3ml de proteína.
2. Añadir con cuidado y lentamente 1ml de HNO3 concentrado.
3. Calentar en baño maría por 2min, y enfriar a chorro de agua.
4. Agregar gota a gota solución de NaOH concentrado (máximo 10 gotas) a él
vire de color. Observar y reportar resultados.
RESULTADOS.
Proteína Gotas Utilizadas Coloración
Espinaca 5 Gotas Verde
Levadura 4 Gotas Amarillo fuerte
Grenetina 10 Gotas Verde
Pescado 10 Gotas Amarillo fuerte
Albumina 3 Gotas Amarillo fuerte
Leche 7 Gotas Amarillo fuerte

9. COAGULACIÓN POR CALOR.
MATERIAL.
-16 tubos de ensaye.
-Gradilla.
-Baño maría.
REACTIVOS.
-Ácido acético al 1%

10. -Acetona
-Éter
-Tetracloruro de carbono
-Butanol

11. -Proteínas
-NaOH concentrado con gotero
PROCEDIMIENTO.
1. Calentar a hervir 5ml de solución de proteína
2. Añadir 2 gotas de ácido acético al 1%
3. Colocar en 4 tubos, la solución repartida por igual y agregar de la siguiente
manera:
Tubo1= 1ml acetona
Tubo2= 1ml de éter
Tubo3= 1ml de butanol
Tubo4= 1ml tolueno
4. Agitar fuertemente para tratar de disolver el coagulo. Reportar en tabla.
5. Los tubos que no disolvieron el coagulo, agregar 3 gotas de NaOH
concentrado, y agitar.
6. Observar y anotar diferencias.
RESULTADOS.
Proteína Acetona Éter Butanol Tolueno
Espinacas Soluble Soluble Soluble Soluble
Levadura Soluble Soluble Soluble Soluble
Grenetina Soluble Soluble Soluble Soluble
Pescado Soluble Soluble Soluble Soluble
Albumina No Soluble No Soluble No Soluble No Soluble
Leche Soluble Soluble Soluble Soluble

12. OBTENCIÓN DE CASEÍNA DE LA LECHE.
MATERIAL.
-2 vasos de precipitados de 250ml

13. -1 probeta de 100ml
-1 embudo
-2 papeles filtro
REACTIVOS.
-Leche entera

14. -HCl 0.2N
-Acetona
-Éter
PROCEDIMIENTO.
1. Colocar 100ml de leche en un vaso de precipitado
2. Agregar 100ml de agua destilada
3. Con una pipeta añadir HCl 0.2N hasta obtener un pH de 4.8
4. Dejar reposar hasta que el sedimento precipite.
5. Suspender el precipitado en 100ml de agua destilada y dejar reposar.
6. Repetir este lavado 4 veces.
7. Filtrar el precipitado final en un embudo Buchner, colectando en el papel la
proteína.

15. 8. Suspender la caseína en 25ml de agua destilada, agitar para homogeneizar y
filtrar. Repetir 4 veces.
9. Después del último lavado, suspender la proteína en 5ml de éter y 5ml de
acetona, y filtrar.
10.Colocar el polvo obtenido en un desecador con cloruro de calcio y pesar el
polvo 24 horas después.
RESULTADOS.
Caseína.
CONCLUSIONES.
Las proteínas constituyen una de las moléculas más importantes en el organismo
ya que cumplen muchas funciones. Las proteínas están constituidas por
aminoácidos por los cuales los métodos que llevamos acabó en esta ocasión se
basan en el reconocimiento de los aminoácidos En las reacciones donde se
obtuvo precipitación se debió a un cambio en el estado físico de la proteína,
mientras que en la coagulación se ha producido un cambio en el estado físico y en
la estructura química por eso es irreversible nuestro equipo pudo llevar acabo
todos los experimentos con éxito y obteniendo los resultados esperados.
Por lo anterior podemos concluir que el objetivo de la práctica pudo ser alcanzado.

16. OBSERVACIONES.
Para esta práctica cabe mencionar que es muy importante nuestra capacidad de
precisión y atención, ya que se trabaja con solventes corrosivos y tóxicos que
pueden dañar nuestra salud, además para las pruebas que se realizan por método
cuantitativo es importante poner atención al momento de poner las gotas de
reactivo y así observar en que tiempo aparecen las coloraciones.
CUESTIONARIO.
1.- ¿Cómo se manifiesta la desnaturalización de las PROTEÍNAS?
Se llama desnaturalización de las proteínas a la pérdida de las estructuras de
orden superior (secundaria, terciaria y cuaternaria), quedando la cadena
polipeptídica reducida a un polímero estadístico sin ninguna estructura
tridimensional fija.
La desnaturalización provoca diversos efectos en la proteína:
 Cambios en las propiedades hidrodinámicas de la proteína: aumenta la
viscosidad y disminuye el coeficiente de difusión.
 Una drástica disminución de su solubilidad, ya que los residuos hidrofóbicos
del interior aparecen en la superficie.
 Pérdida de las propiedades biológicas.
2. ¿Cuál de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de
desnaturalización?
Con el ácido clorhídrico se tiene mayor poder de desnaturalización ya que tiene
mayor pérdida de conformación nativa por ser éste un ácido fuerte y provocar
cambios en sus propiedades.
3. ¿Cómo podríamos saber que una sustancia desconocida es una
proteína?
Podríamos realizar sobre esa sustancia la reacción de Biuret para detectar la
presencia de proteínas.
4. ¿Qué coloración da la reacción del Biuret?
Provoca una coloración violeta cuya intensidad de color depende de la
concentración de proteínas.
5. ¿Una proteína coagulada podría dar la reacción del Biuret?
Sí, puesto que el reactivo reacciona con cualquier proteína ya sea líquida o sólida.

17. 6. Si se realiza la reacción del Biuret sobre un aminoácido como la Glicina
¿es positiva o negativa? ¿Por qué?
Será negativa porque si analizamos un solo aminoácido, no hay ningún enlace
peptídico puesto que este enlace se da entre dos aminoácidos, y la reacción de
Biuret va a dar positivo cuando exista enlace peptídico (CO-NH) coordinándose
con él el Cu en medio alcalino.
7.-Explica la reacción Xantoproteica
La reacción xantoproteica es un método que se puede utilizar para determinar la
presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico
concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con
aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de
tirosina. Si una vez realizada la prueba se neutraliza con un álcali, se torna color
amarillo oscuro.
La reacción xantoproteica se puede considerar como una sustitución electrofílica
aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un
compuesto coloreado amarillo a pH ácido.
Según las guías químicas es una reacción cualitativa, más no cuantitativa. Por
ende determina la presencia o no de proteínas. Para cuantificar se usa otra
reacción, como la de Biuret, y se hace un análisis espectro fotométrico.
BIBLIOGRAFÍA.
- Título: Desnaturalización de las proteínas. Tema: Desnaturalización de las
proteínas. Link:
http://www.ehu.eus/biomoleculas/proteinas/desnaturalizacion.htm
- Título: Blogspot. Tema: Reconocimiento de prótidos. Link:
http://gutierrezpechoainhoacmc.blogspot.mx/2011/03/reconocimiento-de-
protidos.html
- Título: Wikipedia. Tema: Reacción Xantoproteica. Link:
https://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_xantoproteica