Apresentação sobre Homocistinúria

1. Marta Regina de Castro Belfort
LabGeM
Ciências Biológicas - UFMA

2. Introdução
(Childes et al, 2001)
Erros Inatos do Metabolismo (EIM)
Doenças hereditárias;
Autossômicas recessivas;
Mutifatoriais;
Alcaptonúria- 1898 e 1902;
Síntese de uma proteína alterada que ocorre devido a um bloqueio
numa via enzimática com consequente acúmulo de substrato e
diminuição na síntese do produto.
Definição
(Mudd et al, 2001)

3. Introdução
Classificação
Desordens decorrentes à deficiência na produção de energia ou na sua utilização
pelo fígado, coração, músculo, cérebro e outros tecidos  Cadeia respiratória,
oxidação de ácidos graxos, glicólise;
Desordens que levam a intoxicação Acúmulo de compostos tóxicos
(Aminoácidos);
Desordens que levam a alteração da síntese e catabolismo de moléculas
complexas Lisossomais, peroximais;
(Saudrubay et al, 2006)
Os EIM são individualmente raros, mas coletivamente numerosos
(Saudrubay et al, 2006)

4. Introdução
Homocisteína (Hcy)
Aminoácido sulfurado;
Dieta e degradação de proteínas endógenas;
Catabolismo da metionina (Met);
Fórmula estrutural da Homocisteína
(Stead et al, 2004)

5. Introdução
Metionina
S- adenosil Homocisteína
(SAH)
S- adenosilmetionina (SAM)
Homocisteína (Hcy)
Recebe um grupamento adenosil do ATP
Adenosiltransferase
Metiltransferase
Hidrólise- S- adenosil Homocisteína hidrolase
Adenosina
Via da Metionina (Met)

6. Introdução
Homocisteína (Hcy)
Metionina(Met) Cistationina e Cisteína
Remetilação à Met
-Recebe CH3 do N5-metiltetrahidrofolato-
Metionina sintase;
-Betaína- Betaína Homocisteína
metiltransferase;
-Condensação com Serina catalisada
pela cistationina β-sintase
Transufuração à Sisteína
Via da Metionina (Met)
(Finkelstein,2007)

7. Introdução
Homocistinúria clássica
Cistationina β-sintase;
McCully- 1969  Homocistina na urina de pacientes com
alterações vasculares;
Bloqueio enzimático  Hcy e Met acumulam-se no organismo;
Elevadas concentrações de Hcy e deficiência de vitaminas do
complexo B;
(McCully, 1969)
92 diferentes mutações no gene que codifica à CBS;
(Zschocke, 2009)

8. Introdução
Aspectos bioquímicos
Acúmulo tecidual de Hcy;
Elevação do seu precursor;
Redução na atividade da CBS;
Redução dos produtos da via de Transufuração  Cistationina e
Cisteína;
Eliminação da Homocistina;
(Mudd et al, 2001)
Manifestações clínicas
Alterações no SNC;
Anormalidades oculares;
Sistema esquelético, renal, hepático e pulmonar comprometido;
Retardo mental;
Deformações ósseas
(Jiang et al, 2005)

9. Introdução
Diagnóstico
Sinais clínicos e avaliações bioquímicas e moleculares;
Identificação da Homocistina na urina;
Identificação da Hcy e seus metabólitos no plasma;
Tratamento
Dieta reduzida em Met;
Suplementação com Vitaminas do complexo B e Cisteína;
(Jiang et al, 2005)

10. Introdução
Estresse oxidativo e Homocistinúria
Acúmulo de metabólitos tóxicos  A produção de ROS e depleção
da capacidade antioxidante;
(Smith et al, 2005)

11. Objetivo
Investigar o possível papel do estresse oxidativo na
fisiopatologia da Homocistinúria em pacientes antes e
durante o tratamento

12. Materiais e Métodos
Pacientes e controles
-Serviço de Genética do Hospital das Clínicas;
-9 Pacientes com diagnóstico de Homocistinúria (Idade média:10
anos; Intervalo de 4-27 anos);
-11 Pacientes homocistinúricos em tratamento (Idade média: 12
anos; Intervalo de 12-32 anos); Duração média de 11 anos;
-11 Indivíduos controle (Idade média: 22 anos; Intervalo 5-30 anos);
Tratamento
Vitamina B6 Dose média: 500 mg/dia;
Vitamina B9 Dose média: 5 mg/dia;
Vitamina B12 Dose média: 1 mg/mês- intramuscular;
Betaína  Dose média: 6 g/dia

13. Materiais e Métodos

14. Materiais e Métodos
Preparação do Plasma
O plasma foi obtidos de a partir de pacientes e controles;
Mensuração de Carbonil
Níveis de compostos Carbonílicos no plasma;
Quantificação por espectrofotômetro;
Valores do Carbonil foram expressos nmol Carbonil/mg proteína;
Mensuração de Sulfidrila
Níveis de compostos Sulfidrílicos no plasma;
Níveis de sulfidrila são inversamente correlacionada aos danos
oxidativo em proteínas;

15. Materiais e Métodos
Mensuração de Malondialdeido (MDA)
Níveis de Malondialdeido foram medidos por HPCL (Cromatografia
Líquida de Alta eficiência;
Resultados expressos em μM;
Capacidade Antioxidante Total (TAS)
Níveis de antioxidantes no tecido foram mensurados por Kits-
RANDOX;
Resultados foram expressos nmol/L;
Mensuração de Homocisteína (tHcy)
Níveis de Homocisteína total: Homocisteína livre, Homocisteína ligada
a proteína e Homocistina e outros metabólitos;
Resultados foram expressos pmol/L;

16. Materiais e Métodos
Mensuração da Metionina (Met)
Níveis de Met foram medidos por HPCL (Cromatografia Líquida de Alta
eficiência;
Resultados foram expressos em log;
Mensuração de Proteína
Concentrações de proteínas foram mensuradas por Kits LabTest
Análise estatística
ANOVA;
Correlação de Pearson;
Software SPSS;

17. Resultados
Foram analisados os parâmetros in vivo de estresse oxidativo em plasma de
pacientes com diagnóstico de Homocistinúria (Grupo A), sob tratamento (Grupo
B) e Grupo Controles;
Teor de compostos sulfidrílicos, carbonílicos, Malondialdeido (MDA) e
antioxidantes;

18. Resultados
Pacientes em tratamento apresentaram diminuição nos níveis de MDA;
Dietas restritas às vitaminas do Complexo B impediu danos lipídicos;

19. Resultados
Formação de compostos sulfidrílicos foram menores no grupo A e grupo B;

20. Resultados
Associação entre os níveis de Homocisteína e metionina com o estresse oxidativo
em pacientes homocistinúricos;
Não foram encontrados correlações entre os níveis de metionina e estresse
oxidativo;

21. Resultados
Correlação positiva entre os níveis de MDA e de Homocisteína;

22. Discussão
Poucos estudos sobre os parâmetros de estresse oxidativo em pacientes
homocistinúricos;
(Robert et al, 2005)
Aumentos dos compostos carbonílicos e MDA em pacientes homocistinúricos
quando comparados ao grupo em tratamento;
Aumento no dano oxidativo às proteínas e lipídeos;
Diminuição das defesas antioxidantes;
Lesão oxidativa podem diminuir com o tratamento adequado;
Tratamento com vitaminas do complexo B diminui os níveis plasmáticos de Hcy
em pacientes com Homocistinúria clássica;
(Jakubowskiet al, 2008; Yap et al, 2001)

23. Discussão
Mecanismos responsáveis pelo efeito tromboembólicos causados pela Hcy;
Inibição da Transufuração e estresse oxidativo;
(Mudd et al, 2001; Matté et al, 2009)
O uso de marcadores de estresse oxidativo são importantíssimos, uma vez que,
refletem os danos causados pelos ROS e a eficiência das defesas antioxidantes
do organismo;
Avaliam os danos em componentes celulares: proteínas, lipídeos;
SOD, CAT e GPx
(Beal, 2003)
Efeitos nocivos da Hcy ao dano endotelial  Tromboembolia  Mudanças
complexas na parede dos vasos sanguíneos;
(Lentz et al, 2004)

24. Discussão
Foi demonstrado que a Hcy sofre oxidação no plasma, gerando Hcy tiolactona;
Este processo produz ROS, iniciando o processo de peroxidação lipídica;
Foram encontrados níveis altos de MDA em plasmas de pacientes
homocistinúricos;
(Lentz et al, 2004)

25. Conclusão
Foi um dos primeiros trabalhos que demonstram que os danos oxidativos e
defesas antioxidantes são alterados em pacientes homocistinúricos;
O tratamento foi capaz de diminuir os níveis de Hcy e dano oxidativo lipídico em
pacientes homocistinúricos;
O estresse oxidativo está envolvido na fisiopatologia da doença;
Novas abordagens dever ser utilizadas para melhorar a terapêuticas nessa
desordem.

26. Obrigada