Introdução a Microbiologia Aplicada

1. LAQB
Laboratório de Analises
Químicas e Biológicas
Principais conceitos e técnicas
utilizados na microbiologia
Aluno: Ivson Cassiano de O. Santos
2012

2. INTRODUÇÃO
 A Microbiologia é o ramo da biologia que estuda os
microrganismos, incluindo eucariontes unicelulares e
procariontes, que incluem Bactérias, Fungos, Vírus,
Protozoários, Algas unicelulares, Viróides e Prions.
 A Bacteriologia é uma ciência, ramo da Biologia, que
estuda as bactérias e suas propriedades.

3. CONDUTAS, BARREIRAS, EQUIPAMENTOS E
INSTRUMENTAIS DE PROTEÇÃO INDIVIDUAL E AMBIENTAL
 ambiente apropriado
 instrumentais estéreis
 luvas, máscaras e óculos protetores
 Flambar as alças e agulhas e boca dos tubos.
 limpar e desinfetar periodicamente a bancada.
Todas as operações envolvendo manipulação de culturas e
meios de cultura deverão ser efetuadas na área de proteção
conferida pela chama do bico de Bunsen.

4. ÁLCOOL 70%
Sua atividade ocorre pela desnaturação de proteínas e remoção de
lipídios, inclusive dos envelopes de alguns vírus. Para apresentar
sua atividade germicida máxima, o álcool deve ser diluído em
água, que possibilita a desnaturação das proteínas. A concentração
recomendada para atingir maior rapidez microbicida com o álcool
etílico é de 70% em peso e com o isopropílico, entre 60 e 95%.
Possuir fácil aplicabilidade, baixo custo e reduzida toxicidade.
Diluição correta e tempo de exposição

5. CUIDADOS DE ASSEPSIA NA REMOÇÃO DE BACTÉRIAS

6. CUIDADOS DE ASSEPSIA NA REMOÇÃO DE BACTÉRIAS
Fig.: Procedimento para remover bactérias de um caldo com a
alça de platina

7. CUIDADOS DE ASSEPSIA NA REMOÇÃO DE BACTÉRIAS
Fig.: Procedimento para inocular um meio Agar inclinado a partir de
uma Placa de Petri

8. INOCULAÇÃO NA PLACA DE PETRI
Isolamento de colônias
bacterianas e obtenção
culturas puras.
Estrias múltiplas ou
esgotamento

9. DESCONTAMINAÇÃO
 Um dos principais problemas nos laboratórios de microbiologia é a grande
quantidade de resíduos contendo microrganismos infecciosos.
 Autoclaves
 Desinfecção química
Os recipientes que acondicionam material com perigos microbiológicos
devem conter um desinfetante na diluição de uso apropriada.
Compostos à base de fenol 5% , hipocloritos (água sanitária a 2%) e
glutaraldeído 2%, formaldeído (solução alcoólica 8% e solução aquosa
10%).

10. BANCO DE DADOS
O nosso laboratório dispõe de uma tabela com as bactérias presentes
em estoque com suas devidas informações e observações.
Bactéria Cepa/numero Origem Espécie
Condições de crescimento Incubação Condições de estoque
Ultima data de estoque Observações

11. INTRODUÇÃO
 Cepas bacterianas
Isto deriva dos fenômenos espontâneas ou
induzidos da natureza ou mesmo
artificialmente, chamado "Mutação Genética"

12. CEPAS PADRÃO
 São cepas destinadas ao controle de qualidade
bacteriológico.
 Apresentam resposta conhecida a uma série de
provas laboratoriais, entre as quais bioquimismo,
reação tintorial ao Gram, morfologia e resposta a
antibióticos.
ATCC AYE SDF
ACICU AB

13. CEPAS LAQB
 Cepas ATCC - American Type Culture
Collection.
Escherichia coli ATCC 10536

14. ESCHERICHIA COLI ATCC 10536
Referencia para esta cepa :
Di Modugno E et al. 1994
Misiek et al. 1973.

15. STAPHYLOCOCCUS AUREUS ATCC 8096

16. PSEUDOMONAS AERUGINOSA ATCC 9027

17. MICROCOCCUS LUTEUS ATCC 10240
 ATCC 14452

18. MEIO DE CULTURA
Conjunto de substâncias, formuladas de maneira adequada,
capazes de promover o crescimento bacteriano, em condições
laboratoriais. Para isso um meio de cultura necessita conter
características básicas, que incluem:
 - Fonte de carbono e nitrogênio
 - Fonte de energia
 - Sais minerais
 - Fatores de crescimento
 - Condições físicas
 - Esterilização

19. TIPOS DE MEIOS DE CULTURA
 Meios de enriquecimentos
 Caldo Brain Heart Infusion (BHI)
 Caldo Tetrationato
 Meios de transporte
 Meio de Stuart
 Meio de Cary-Blair
 Caldo Tioglicolato
Meio seletivo
o
 Agar Manitol Salgado
 Agar SS

20. TIPOS DE MEIOS DE CULTURA
Meio diferencial
 Agar Eosin Meteiolene Blue (EMB)
 Agar McConkey
 Agar Hektoen.
 Meio indicador
 Agar Triple Sugar Iron (TSI)
 Agar Citrato de simimons.

21. PROCEDIMENTOS E CUIDADOS NA PREPARAÇÃO
DE MEIOS DE CULTURA
 Na preparação de um meio, deve-se adicionar uma pequena
quantidade de água até que o meio fique úmido e então completar
com o resto de água homogeneizando a solução.
 O tempo de esterilização em autoclave é de 15 minutos á
temperatura de 121°C.
 Os meios devem ser autoclavados com as tampas semi-abertas,
para que a esterilização seja por igual em todo o conteúdo dos
tubos - tampas fechadas não permitem a entrada do vapor.

22. Todos os meios confeccionados
devem ser devidamente
identificados com o nome do
meio e do responsável, data de
fabricação, data de validade e
tipo de armazenamento.

23. MANUTENÇÃO DE CULTURAS
 A manutenção de culturas é realizada para que
se possa manter viável as cepas em estoque.
De acordo com a cepa a concentração de glicerol
pode variar.
Ex.: E. coli 50% glicerol e 50% Ágar Nutriente.
Prazo de validade: 3 meses á -20°C.

24. PLANO DE TRABALHO LAQB - 2012
Objetivo: Fazer o levantamento de cepas atualmente encontradas no
LAQB e preparar o mesmo para aquisição de outras.
Método:
1°- Inoculado as amostras em meio enriquecido para proporcionar o
crescimento das amostras. O meio de enriquecimento escolhido foi o
caldo BHI, após a semeadura , incubar por 24h á 37ºC.
Resultados: POSITIVO para turvação no meio.
NEGATIVO para coloração intacta do meio.
2° - De acordo com os resultados obtidos na etapa 1, será semeado as
amostras de acordo com o meio seletivo de cada espécie.
Staphylococcus aureus = manitol
E. coli = EMB
Pseudomonas areuginosa = agar Pseudomonas
Micrococcus luteus = MH

25. Método:
 Análise do crescimento bacteriano (morfologia e coloração)
O Manitol é fermentado pelo Staphylococcus Aureus,
mas não pela maioria dos Staphylococcus; o Sal inibe o
crescimento da maioria dos microrganismos, mas o
Staphylococcus Aureus.
Meio Manitol salgado para
Staphylococcus Aureus.
O meio EMB, o azul de Eosina e Metileno
inibem o crescimento de Gram positivas. E. coli
apresentam colônias escuras ou verde metalico,
fermentação da lactose e sacarose.
Meio EMB (Eosine Methylene
Blye) para E. coli

26. Método:
Análise do crescimento bacteriano (morfologia e coloração)
Permite a diferenciação de P. aeroginosa de outras
Pseudomonas. As P. aeroginosa apresentam
pigmento azul-verde escuro que se funde ao meio.
Meio Agar Pseudomonas.
M. luteus apresentam pigmentação amarela
tanto em meio AN, quanto em MH.
Micrococcus luteus em meio MH

27. Método:
3° - Ressemear, por esgotamento, todas as amostras crescidas
e isoladas em meio agar nutriente 24h 37°C
Meio Agar Nutriente
4° - Teste bioquímico
A investigação das atividades metabólicas das bactérias “in vitro” é chamada de
Provas Bioquímicas e servem para auxiliar o microbiologista a identificar grupos ou
espécies de bactérias

28. Método:
4° - Teste bioquímico
Meio TSI, meio SIM, meio citrato de Simons, Meio úreia.
5° - Preparo para estoque
Semear em placa, com swab, as amostras cultivadas no caldo
6° - Estoque
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29. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
 APOSTILA DE AULAS PRÁTICAS – DISCIPLINA:
BACTERIOLOGIA. PROFESSOR ALOYSIO
CERQUEIRA, UFF.
 Descrição dos Meios de Cultura Empregados nos
Exames Microbiológicos – ANVISA.
 Protocolos para Preparo de Meios de Cultura da
Embrapa Agrobiologia, 1999.
 Biossegurança em Laboratórios Biomédicos de
Microbiologia - 3.a edicao, 2006.