guia de estaccion de adn

1. FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD PROGRAMA DE MEDICINA
FORMATO PARA GUIAS DEL LABORATORIO DE CIENCIAS BÁSICAS
FUNDACIÓN UNIVERSITARIA SAN MARTÍN-Nit: 860.503.634-9
Personería Jurídica N° 12387 de Agosto 18 de 1981 Ministerio de Educación
Sede Norte: Carrera 18 No. 80-06 PBX: (1) 530-1001
Sede Calle 60: Calle 61A No. 14-28
www.sanmartin.edu.co
IDENTIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD PRÁCTICA
Facultad Programa Semestre Asignatura
Ciencias de la Salud Medicina II Biología Funcional.
Nombre de la Práctica Número de la Práctica Fecha de Publicación Docente
Extracción de ADN
9 23 de mayo de 2023
Dr. Julio Cesar Giraldo
Luz Amanda Martínez S
Nombre del estudiante Grupo de Trabajo Fecha de Práctica
Mayo 29,30, 31y junio 1,2 de 2023
CONTENIDO DE LA PRÁCTICA
1. TÍTULO
EXTRACCIÓN DE ADN
2. INTRODUCCIÓN
El ADN es una macromolécula muy larga, de aspecto filamentoso, que en las células eucariotas se
encuentra en el núcleo y en pequeñas cantidades en la mitocondria y el cloroplasto. El estudio de ésta
biomolécula es importante para analizar el contenido y función génica mediante la aplicación de
técnicas de biología molecular; esto comienza con la extracción de ADN.
3. OBJETIVOS
1. Obtener ADN a partir d partir de muestra de sangre periférica.
2. Comprender que la extracción de ADN, se basa en la solubilidad de la membrana celular y
nuclear
3. Entender los cuatro pasos básicos para realizar la extracción de ADN.

2. FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD PROGRAMA DE MEDICINA
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4. MARCO TEORICO
Para evaluar el ADN el primer paso consiste en su extracción, para lo cual existen técnicas
estandarizadas, manuales o automatizadas, que remueven el ADN de cualquier tejido con células
nucleadas como la sangre, cualquier tipo de tejido organizado y de vellosidades coriónicas. El ADN
extraído puede almacenarse indefinidamente en condiciones especiales, esto con el fin de realizar
estudios posteriores inclusive a familiares que han fallecido.
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son
atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la
célula. Se empieza por lisar las células mediante un detergente orgánico, su efecto de lisis en las
células lo ejerce por destrucción de los lípidos a nivel de la membrana plasmática o por diferencia de
presión osmótica entre la célula y el medio obteniéndose biomoléculas disueltas, entre ellas el ADN,
que puede ser separada del resto de los componentes con ayuda de agentes químicos. En este paso,
la solución contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos, proteínas y
otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán
fraccionado en cadenas pequeñas y separadas de él por acción del detergente. El alcohol se utiliza
para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol el ADN se
desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.
El producto filamentoso obtenido de la extracción, no es ADN puro, ya que, entremezclado con él, hay
fragmentos de ARN. Una extracción pura de ADN se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las
moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.
El método de Salting Out, es una técnica que permite la extracción de ADN de diferentes tipos
de muestra como sangre, cabello, semen, saliva, etc. El ADN es extraído del núcleo y colocado en un
medio de altas concentraciones de sal que permite la precipitación de restos de membrana y proteínas
que contaminen el ADN y obtenerlo así de forma pura.
5. PALABRAS CLAVE
1. Extracción
2. Membranas
3. Cloruro de sodio
4. Detergente.
5. Etanol
6. REQUISITOS PREVIOS PARA REALIZAR PRÁCTICA
1. Revisar el procedimiento de venopunción
2. Conocimientos de las generalidades del ADN
3. Investigar las técnicas para la Extracción de ADN
7. MATERIAL REQUERIDO EN EL LABORATORIO
Extracción de ADN
1. Elementos de protección personal. ( Bata, gorro, gafas de seguridad, tapabocas y
guantes de nitrilo o latex.

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2. Elementos para la venopunción: Tubos tapa lila (con anticoagulante), aguja, camisa de
venopunción, torniquete, algodón, alcohol antiséptico, cura, guardián, caneca roja.
3. Tubos eppendorf 1.5 ml
4. Pipeta Pasteur
5. Gradilla
6. Centrífuga para tubos eppendorf
7. Buffer de lisis 1
8. Buffer de lisis 2
9. Solución de precipitación proteica
10. Solución de precipitación de ADN
8. PROCEDIMIENTO
Recuerde tener todos los elementos de bioseguridad para el ingreso al laboratorio y la
realización de la práctica. Debe llevar la guía impresa para realizar el procedimiento, el
informe y hacer la entrega al finalizar la práctica.
1. Recolectar la sangre en tubo con anticoagulante.
2. Tome con la pipeta Pasteur 6 gotas de sangre anticoagulada y transfiéralas a un tubo
eppendorf.
3. Adicione 18 gotas de Buffer de lisis 1 al tubo eppendorf con sangre. Incube durante 15 minutos
a temperatura ambiente y mezcle por inversión durante el tiempo de incubación.
4. Pasado el tiempo de incubación, centrifugue a 10.000 rpm durante 3 minutos.
5. Después de centrifugar, destape el tubo eppendorf y deseche el sobrenadante, invirtiendo el
tubo sobre el recipiente designado para recolectar material biológico.
6. Agite vigorosamente durante 15 segundos hasta resuspender completamente las células que
quedaron en el sedimento.
7. Adicione 6 gotas de Buffer de lisis 2, mezcle vigorosamente por 15 segundos.
8. Adicione 4 gotas de la solución de precipitación proteica, mezcle vigorosamente por 20
segundos.
9. Centrifugue a 10.000 rpm durante 3 minutos.
10. Transfiera el sobrenadante invirtiendo el tubo a otro tubo eppendorf. Tenga cuidado de no
adicionar el sedimento.
11. Al tubo eppendorf con el sobrenadante, adicione 6 gotas de solución de precipitación de ADN,
tape y mezcle suavemente la solución por inversión hasta que el ADN se observe en forma de
mota de algodón.
11. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS Y BASES DE DATOS
Alberts, B., Johnson, A., Lewis, J., Morgan, D., Raff, M., Roberts, K., & Walter, P. (2016). Biología celular y
molecular.
Karp, G. (2013). Biología Celular y Molecular. 7ma Edición, Ed.
Wallace, R. A., Sanders, G. P., & Ferl, R. J. (1996). Biology, the science of life. New York: HarperCollins.
Access Medicina. Libros. Biología molecular. Fundamentos y aplicaciones en las ciencias de la salud. Capítulo
11. Extracción de ácidos nucleicos.