1. Сравнительные характеристики мезенхимных
стволовых клеток костного мозга больных
хроническим миелоидным лейкозом в культуре
Абрамова О.А., Бутылин П.А., Ломаиа Э.Г., Зарицкий А.Ю.
ФГБУ «СЗФМИЦ им. В. А. Алмазова» Минздрава России, г. Санкт-Петербург, Россия
2. Введение
Хронический миелолейкоз (ХМЛ)-клональное заболевание поражающее
мультипотентные гемопоэтические стволовые клетки(ГСК).
Основной онкогенный ген- BCR-ABL, его несут почти все ГСК
Мезенхимные стволовые клетки(МСК) не несут онкогенную мутацию, они
обеспечивают гемопоэзиндуцирующее стромальное микроокружение.
МСК участвуют в морфогенезе, гемостатических реакциях организма и процессах
регенерации.
Но, как изменяются МСК при ХМЛ выполняя свои функции в больном организме?
3. Цель исследования
Получение и сравнение основных характеристик культур МСК
пациентов с ХМЛ без лечения (первичных), на фоне лечения
(резистентных) и у здоровых доноров.
4. Методы исследованияМетоды исследованияМетоды исследования
Анализ
колониеобразующих
единиц
Получение МСК,
пассирование
с построением кривой роста
Взятие костного мозга
Адипоцитарная
дифференцировка
Остеогенная
дифференцировка
Анализ клеточного старения
по ß-gal+
5. Dob time p1
0
20
40
60
80
Dob time p2
0
10
20
30
40
50
Dob time p3
0
10
20
30
40
Анализ времени удвоения
Время удвоения у МСК незначительно увеличивается с первого по третий пассажи, у первичных пациентов
и здоровых доноров. У МСК от резистентных пациентов остается почти неизменным со второго по третий
пассажи.
Сокращения:
P-пассаж
R-резистентные пациенты ХМЛ
P- первичныпациенты ХМЛ
N-данные от здоровых доноров
7. Adipo P1
0
5
10
15
20
Adipo P2
0
5
10
15
Adipo P3
0
5
10
15
Анализ адипоцитарной дифференцировки
Уровень адипоцитарной дифференцировки у МСК от резистентных пациентови от здоровых людей с первого
по третий пассажи снижается, а у МСК от первичных пациетов увеличивается, при этом на первом и втором
пассажах максимальное адипоцитобразование наблюдалось в МСК от здоровых людей, а на третьем- у
первичных.
Сокращения:
P-пассаж
R-резистентные пациенты ХМЛ
P- первичныпациенты ХМЛ
N-данные от здоровых доноров
8. Osteo P1
0
5
10
15
Osteo P2
0
5
10
15
20
Osteo P3
0
5
10
15
Анализ остеогенной дифференцировки
Остеогенная дифференцировка в норме плавно растет с первого по третий пассажи. У МСК от
резистентных пациентов происходит снижение способности клеток дифференцироваться в остеогенном
направлении с первого по третий пассаж. У МСК от первичных пациентов пик приходится на второй
пассаж.На первом и втором пассажах остеогенная дифференцировка наиболее выражена у МСК от
первичных больных менее всего у здоровых,однако на третьем пассаже МСК здоровых людей показывают
наиболее выраженную остеогенную дифференцировку. Менее всех в остеогенном направлении
диференцируются МСК от резистентных пациентов.
Сокращения:
P-пассаж
R-резистентные пациенты ХМЛ
P- первичныпациенты ХМЛ
N-данные от здоровых доноров
9. Аназиз клеточного старения
Сокращения:
P-пассаж
R-резистентные пациенты ХМЛ
P- первичныпациенты ХМЛ
N-данные от здоровых доноров
ββββ-gal р1
0
20
40
60
0,05
ββββ-gal р2
0
20
40
60
80
ββββ-gal р3
0
50
100
150
% % %
Во всех МСК отмечено резкое увеличение репликативного старения(по окраске на -
галактозидазу) с первого по третий пассажи. На первом пассаже МСК от резистентных
пациентов выделяют значимо больше остальных данный фермент.
10. Заключение
Базовые клеточные характеристики достоверно не отличалась у
МСК пациентов с ХМЛ без лечения (первичных), на фоне лечения
(резистентных) и у здоровых доноров. Это подтверждает,что
способность ниши костного мозга сохранять свои функции при
развитии заболевания. Признаки старения, обрануженные в МСК
резистентных пациентов уже на ранних пассажах связаны,
вероятно, с продолжительным приёмом ингибиторов тирозинкиназ.
