Apoyo al laboratorio de Microbiologìa

1. TINCIÒN DE GRAM: UTILIDAD
CLÌNICA

2. ¿Como son las bacterias?
La tinción o coloración de GRAM fue ideada por el Bacteriólogo Danès Christian
Gram en el año 1981. Es una técnica diferencial empleada en bacteriología para la
visualización de la morfología celular bacteriana principalmente en muestras
clínicas, clasificando estas como Grampositivas o Gramnegativas según la
composición de su pared celular bacteriana.

3. Las características fenotípicas que presentan algunas bacterias contribuyen al
diagnostico clínico presuntivo: la observación de cocos Grampositivos dispuestos
en racimos sugieren la presencia de estafilococos; la disposición de cocos
Grampositivos en cadena indica estreptococos, etc… La coloración de Gram
permite apreciar las características fenotípicas de la bacteria en cuanto a tamaño,
forma, agrupación y características tintoriales, esta tinción muy importante ya
que en algunos casos permite la instauración del tratamiento rápido y oportuno

4. Fundamento de la coloración bacteriana
Gracias a la composición de la pared bacteriana, la cual contiene
peptidoglicanos, acidos teicoico, lipoteicoico, es que los colorantes
penetran en esta permitiendo su observación morfológica, forma,
tamaño, agrupación y su reacción tintorial:
Grampositivas= Moradas y Gramnegativas= Rosadas

5. Materiales y colorantes
Colorantes
• Cristal violeta: colorante
principal. (Gram +)
• Lugol: Mordiente
• Alcohol acetona:
Decolorante
• Safranina: colorante de
Contraste (Gram -)
Materiales
• Laminas porta objetos
• Palillos de madera
estériles/asa
microbiológica
• Microscopio
• Cronometro
• Agua destilada

6. Procedimiento
• Se extiende la muestra sobre un portaobjetos limpio y se fija pasándolo
una o dos veces sobre un mechero encendido. Se coloca la lamina y sobre
una bandeja recolectora de agua.
• El tiempo que debe permanecer el colorante en la lamina con la muestra es
de:
Cristal violeta = 1 minuto
Lugol= 1 minuto
Alcohol acetona= 30 segundos
Safranina= 1 minuto
Se realiza un lavado con agua destilada entre la aplicación de cada colorante.
Se deja secar a temperatura ambiente y se observa en el microscopio con el
objetivo de 100X