1. FUNDAMENTO EN COLORACIÓN
PAPANICOLAU-USOS
BÉJAR VILELA, ROSARIO
HONADOMANI
SAN BARTOLOME

2. COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU
 Creada por George Papanicolaou.
 En 1941 publica una técnica de
tinciones: Permite correlacionar
cambios citológicos vaginales
con el ciclo menstrual de las
mujeres y con el diagnóstico de
casos asintomáticos de
neoplasia intrauterina.

3. COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU
 Se denomina “CITOLOGIA
CERVICO VAGINAL”:Estudian
las Células Epiteliales de la
Pared Vaginal, Exocervix y
Endocervix.
 Mx obtenida con el
instrumental adecuado:
Espéculo y Pipeta de Ayre, la
cual garantiza un muestra de las
3 zonas involucradas.

4. INFORME CITOLÓGICO CERVICO VAGINALINFORME CITOLÓGICO CERVICO VAGINAL
Coloración de PapanicolaouColoración de Papanicolaou
SISTEMA BETHESDASISTEMA BETHESDA
1.- CALIDAD DE LA MUESTRA
Inadecuada para Evaluación:
Adecuada para Evaluación:
Con Células Endocervicales
Sin Células Endocervicales Con
Células MetaplásicasSin Células Metaplásicas
2.- CAMBIOS BENIGNOS CAUSADOS POR INFECCIÓN:
Ninguno Cándida
Cocobacilos Herpes Simple
Gardnerella Actinomises
Trichomona vaginalis Otros
3.- CAMBIOS ASOCIADOS A:
Ninguno
Reparativos Atrofia DIU
Reactivos Radiación
Inflamación: Leve Moderada Severa
4.-ANORMALIDADES CELULARES EPITELIALES:
Ninguno: Negativo para Lesión Intraepitelial y/o Neoplasia Maligna
Células Escamosas Atípicas
( ASCUS )
Lesión Escamosa Intraepitelial de Bajo Grado: Infección por PVH
Lesión Escamosa Intraepitelial
de Bajo Grado: Displasia Leve ( NIC I ) Lesión
Escamosa Intraepitelial de Alto Grado: Displasia Moderada( NIC II )
Lesión Escamosa Intraepitelial de Alto Grado:
Displasia Severa ( NIC III ) Lesión
Escamosa Intraepitelial de Alto Grado: Carcinoma In Situ
Carcinoma Epidermoide
Células Glandulares Atípicas
( AGUS )
Adenocarcinoma
5.-OTROS:
COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU
 “SISTEMA BETHESDA” Ciudad
de Bethesda – Maryland (USA)
donde desde 1988 hasta el 2001,
se reunieron un grupo de
profesionales de la salud con:
Objetivo establecer un sistema
de nomenclaturas y terminologías
uniformes para informar
resultados Citológicos Cérvico
Vaginales.

5. COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU
 Núcleo:Núcleo: Nítido, con buena
definición del detalle,
pudiendo evidenciarse el
patrón de cromatina.
 Citoplasma:Citoplasma: De aspecto
transparente, que permite
apreciar los grados de
diferenciación celular y
actividad metabólica.

6. 1.-Agua Corriente 5’ => Hidratación
2.-Hematoxilina de Harris 7’ => Tinción Nuclear => Colorante
3.-Agua Corriente 2’ => Tinción Nuclear
4.-Agua Acida 1% 2” => Tinción Nuclear
5.-Agua Corriente 2’ => Tinción Nuclear
6.-Agua Amoniacal 10” => Tinción Nuclear
7.-Agua Corriente 2’ => Tinción Nuclear
8.-Alcohol Etílico de 96% 1’ => Tinción Citoplasmática
9.-Orange G 3’ => Tinción Citoplasmática => Colorante
10.-Alcohol Etílico de 96% 30” => Tinción Citoplasmática
11.-EA50 2’ => Tinción Citoplasmática => Colorante
12.-Alcohol Etílico de 96% 30” => Deshidratación
13.-Alcohol Etílico de 96% 30” => Deshidratación
14.-Alcohol Absoluto 30” => Deshidratación
15.-Alcohol Absoluto 30” => Deshidratación
16.-Xilol 2’ => Aclaramiento
17.-Xilol 1’ => Aclaramiento
COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU
 Comprende 17 pasos agrupados en 5 etapas (hidratación, tinción
nuclear, tinción citoplasmática, deshidratación, aclaramiento).
 Uso de 3 colorantes (Hematoxilina de Harris, Orange G y EA-50).

7. NUCLEONUCLEO
CITOPLASMACITOPLASMA
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
H2O
Alcohol EterAlcohol Eter
FIJACIÓN EN ALCOHOL ETER
o Fijador Químico por Deshidratación .
o Elimina el agua intracelular, desnaturalizando las proteínas e inactivando las
enzimas autodigestivas evitando la Autólisis,.
o Es un bactericida:Eliminando las bacterias e impidiendo la Putrefacción.

8. NUCLEONUCLEO
CITOPLASMACITOPLASMA
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
Alcohol EterAlcohol Eter
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH OH
OH OH
OH OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH OH OH
OH OHOH
OH OH OH
OH OH OH OH OH
Agua CorrienteAgua Corriente
AGUA CORRIENTE
 Elimina el Fijador y por arrastre físico los elementos que no son
parte de la estructura celular y tisular. Finalmente se obtendrá
una célula fijada y llena de moléculas de agua para que a través de
esta puedan desplazarse diversos colorantes.

9. Hematoxilina de HarrisHematoxilina de Harris
NUCLEONUCLEO
CITOPLASMACITOPLASMA
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
HEMATOXILINA DE HARRIS
 Las moléculas colorantes de Hematoxilina de Harris penetrarán en
la célula y se dirigirán al núcleo de la misma por un proceso Físico
Químico del Tipo Atracción Electrostática.
Esta unión se debe gracias a los grupos Fosforitos Ácidos (-) del
núcleo que le dan carga global Negativa a la estructura celular
tiñéndolo de un color violeta.

10. Hematoxilina de HarrisHematoxilina de Harris
NUCLEONUCLEO
CITOPLASMACITOPLASMA
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
Agua CorrienteAgua Corriente
AGUA CORRIENTE
 Eliminará por arrastre físico el exceso de colorante intra y
extracelular que no este ligado al núcleo.
 Solo permanecerán unidos al núcleo las moléculas colorantes
unidas por diferencia de cargas eléctricas con este.

11. Agua CorrienteAgua Corriente
NUCLEONUCLEO
CITOPLASMACITOPLASMA
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
Agua AcidaAgua Acida
AGUA ACIDA 1%
 Es una dilución del Ácido Clorhídrico al 1%, por lo que
presenta una carga fuertemente ácida (-).
 Las Cargas Negativas ingresarán a la célula y se unirán por
diferencia de carga con las Cargas Positivas, en este caso, con
los Grupos Auxocromos (+) de las moléculas de Hematoxilina.

12. CITOPLASMACITOPLASMA Agua AcidaAgua Acida
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
AGUA ACIDA 1%
 Esta unión le darán carga global negativa a algunas moléculas
de Hematoxilina separándolas del núcleo, logrando la
decoloración parcial evitando la sobresaturación de colorante
en el núcleo que podrían impedir la observación de finos
detalles nucleares.

13. CITOPLASMACITOPLASMA Agua AcidaAgua Acida
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
Agua CorrienteAgua Corriente
AGUA CORRIENTE
Eliminará el exceso de Agua Ácida (-) logrando que las moléculas
de Hematoxilina intracelulares separadas sean eliminadas por
arrastre físico del interior de la célulla.
Solo permanecerán al interior de la célula las moléculas de
Hematoxilina que se encuentren unidas electrostáticamente al
núcleo celular.

14. Agua CorrienteAgua CorrienteCITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
Agua AmoniacalAgua Amoniacal
AGUA AMONIACAL
 Es una solución alcalina (pH: 8) y los Grupos Auxocromos de las moléculas de
Hematoxilina son “Indicadores de pH”.
 Adopta tonalidad rojiza con pH<3
 Tonalidad azulada con pH >3,
 Al encontrarse en un pH de 8 el núcleo adopta un color fuertemente azulado,
por este motivo a este paso se le conoce también como “Azulamiento”.

15. Agua CorrienteAgua CorrienteCITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
Agua AmoniacalAgua Amoniacal
AGUA CORRIENTE
 Eliminará el exceso de Agua Amoniacal evitando que las
moléculas de Hematoxilina unidas al núcleo sigan virando su
color.
 La tinción nuclear de la célula habrá terminado con moléculas
de Hematoxilina unidas fuertemente al núcleo y citoplasma
con abundantes moléculas de agua.

16. Agua CorrienteAgua CorrienteCITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96%
ALCOHOL ETÍLICO 96%
 El Alcohol Etílico al 96% reemplazará el agua extracelular e
intracelular debido a que los colorantes posteriores son más
solubles en alcohol que en agua.

17. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96%
Queratina
Queratina
Queratina
Queratina
Queratina
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange GOrange G
ORANGE G
 Es un colorante monocromático penetra rápidamente en el citoplasma
celular y tiñe específicamente la Queratina de un color naranja
brillante.
 La Queratina normalmente no se encuentra en el citoplasma de las
células normales pero aparece en las células epiteliales cérvico
vaginales en Carcinomas Queratinizados

18. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96%
Queratina
Queratina
Queratina
Queratina
Queratina
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange G
Orange GOrange G
ALCOHOL ETÍLICO 96%
 El Alcohol Etílico de 96% al ser soluble en Orange G eliminará
el exceso de colorante extracelular e intracelular no ligado a
la Queratina.
 Solo permanecerán en el interior de la célula, las fibras de
Queratina (si las existiera) teñidas por el Orange G.

19. Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96%CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
EA-50EA-50
EA-50
 La tinción citoplasmática.
 EA50 colorante Policromático soluble en alcohol
 Comprende 3 colorantes: Eosina + Light Green + Pardo de Bismark

20. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
EA-50EA-50
EA-50
 La Eosina teñirá de rosado el citoplasma de las Células Maduras:
Superficiales, al unirse electrostáticamente a las proteínas
citoplasmáticas exclusivas de células “Metabolicamente Inactivas”

21. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
EA-50EA-50
 El Light Green teñirá de verde azulado el citoplasma de las Células
Intermedias y Parabasales, al unirse electrostáticamente a las proteínas
citoplasmáticas exclusivas de células “Metabolicamente Activas”
EA-50

22. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
EA-50EA-50
EA-50
 El Pardo de Bismark teñirá de pardo amarillo las Mucinas (compuestos de
proteínas y azucares) ubicadas en el citoplasma de las Células Cancerosas
propias de Adenocarcinomas.

23. Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96%CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
EA-50EA-50
ALCOHOL ETÍLICO 96%
 Los componentes del EA-50 (Eosina – Light Green – Pardo
Bismark) al ser solubles en Alcohol Etílico, y si no están
ligados a ningún componente proteico citoplasmático serán
desplazados de la célula.

24. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
EA-50EA-50
ALCOHOL ETÍLICO 96%
 En caso de tratarse de una Célula Superficial:
“Metabolicamente Inactiva” en el citoplasma solo se
encontrarán proteínas inactivas que serán teñidas por la
Eosina adoptando el citoplasma una tonalidad rosada,
culminando en este paso la coloración nuclear y citoplasmática

25. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96%
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96%
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
ALCOHOL ETÍLICO 96%
 Un segundo baño de alcohol etílico asegura la eliminación
completa del colorante

26. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
Alcohol Etílico al 96%Alcohol Etílico al 96%
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
Alcohol AbsolutoAlcohol Absoluto
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
ALCOHOL ABSOLUTO
 Un primer baño de Alcohol Absoluto busca eliminar el agua
intra y extracelular, ya que los posteriores procesos de
Aclaramiento y Montaje emplean insumos que nos son
miscibles en Agua.

27. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
Alcohol AbsolutoAlcohol Absoluto
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
Alcohol AbsolutoAlcohol Absoluto
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
ALCOHOL ABSOLUTO
 Un segundo baño de Alcohol Absoluto asegura la eliminación
completa del Agua.

28. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
Alcohol AbsolutoAlcohol Absoluto
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
OH
XilolXilol
XILOL
 Un primer baño de Xilol al ser misicble con el alcohol, busca su eliminación
de los espacios intra y extracelulares, ya que el posterior proceso de
Montaje emplean sustancias que nos son miscibles en Alcohol.
 El Xilol cambia el Índice de Refracción de la Célula transparentándola y
permitiendo una mejor observación de detalles celulares.

29. CITOPLASMACITOPLASMA
NUCLEONUCLEO
MembranaCelular–MembranaCelular–MembranaCelular
XilolXilolXilolXilol
XILOL
 Un segundo baño de Xilol asegura la completa eliminación del
alcohol y culmina con el proceso de transparentar las
estructuras celulares.

30. MONTAJE
 Impide la resequedad y
desintegración de las células,
preservando la lamina citológica para
su archivamiento posterior a la
lectura microscópica.
 Consiste en la unión de la lamina
portaobjeto con la laminilla
cubreobjeto mediante una resina lo
más transparente posible y cuyo
Índice de Refracción sea semejante
a la del vidrio.

31. GRACIAS