1. CITOGENÉTICA MOLECULAR
BÉJAR VILELA ROSARIO

2. CITOGENETICA MOLECULAR
 Se fundamenta en la capacidad que poseen los ácidos nucleicos para
hibridizarse entre sí.
 Permite la detección y localización de secuencias específicas de ADN.

3. CITOGENÉTICA MOLECULAR
 Biología molecular y citogenética.
 Utilización de una serie de técnicas del estilo de hibridación
por fluorescencia in situ (FISH).

4. FISH
 Método Directo: Utiliza nucleótidos marcados con
sustancias fluorescentes puede observarse la señal
inmediatamente después del FISH al microscopio de
fluorescencia.
 Método Indirecto: Utilizan sondas unidas a moléculas
como la biotina o digoxigenina marcadas con sondas
fluorescentes que permiten su observación al
microscopio de fluorescencia. Hay una amplia variedad
de sondas comerciales y tambien pueden fabricarse con
la técnica “nick translation

8. ADNsc

9. - Reconoce 2 - 3% secuencias
centromericas.
- Detección de cromosomas
concretos
- Anormalidades numéricas
-
Secuencia especifica del ADN:
LOCUS DETERMINADO
- Reordenamiento estructurales
- Anormalidades estructurales
Detección de cromosomas
concretos
Anormalidades numéricas

14. TECNICA DE FISH
 PREPARACION PREVIA DE LA MUESTRA
 PREPARACION DE LAS PLACAS
 PREPARACION DE LAS SONDAS
 HIBRIDACION
 LAVADOS POST-HIBRIDACION
 DETECCION
 TINCION DE CONTRASTE (yoduro de propidium o
DAPI)
 VISUALIZACION (microscopio de epifluorescencia)

20. PCR
 Técnica que permite la amplificación in vitro de una
secuencia específica de ADN hasta generar millones de
copias de una manera rápida y sencilla
 Permite analizar muestras con cantidades mínimas de
ADN

21. FASES DE AMPLIFICACIÓN DE PCR
Separar las hebras molde para la síntesis de
nuevas hebras
“Aparear” primers a la hebra molde para dirigir
la síntesis de DNA .
La síntesis de DNA requiere de primers para
comenzar.
Adición de nucleótidos, uno a la vez, para extender la
hebra de DNA (extremo 3’) utilizando a la hebra
madre como molde
A partir de este ciclo, se empieza a acumular, de
forma exponencial, la secuencia diana de ADN

24.  Sondas marcadas
fluorescentemente son para
cada cromosoma hechas
para marcar DNA específico
de cada cromosoma con
diferentes fluoróforos.
 La diferencia espectral generada por el
etiquetado combinatorio son capturadas y
analizadas usando un interferómetro agregado a
un microscopio de fluorescencia.
 El programa de procesamiento de imágenes
entonces asigna un pseudocolor a cada
combinación espectralmente diferente,
permitiendo la visualización de cromosomas
coloreados.

25. SKY

28. GRACIAS