2. Non-coated vesicles bij hoge concentratie EGF

3. Ci: role voor cholesterol

4. Twee routes

6. EGF versnelt receptor internalisatie Anti-EGFR EGF

7. EGFR internalisatie: kinase afhankelijk Kinase onafhankelijk Time (min) EGF Internalized/Surface

8. Het intracellulaire domein van de EGFR bevat internalisatie signalen 1 2 3

9. c-Cbl ( Casitas B-lineage lymphoma proto-oncogene) stimuleert EGFR internalisatie + c-Cbl

10. 4H EF SH2 RF Pro UBA S 4H: 4 helix domein EF: EF-hand (Ca-binding) SH2 SH2-domein RF: Ring finger ( Really Interesting New Gene) Pro: Proline rijk domein UBA: UBiquitin Associating domein Cbl: E3 ligase en EGFR substraat Y Y Y Y

11. De drie stappen van de eiwit-ubiquitinering: De enzymen E1, E2 en E3

12. Eiwit-ubiquitinering

13. Twee typen E3-ligases: met HECT of Ring domein

14. Vier typen eiwit-ubiquitinering

15. C-Cbl stimuleert ubiquitinering van de EGFR

16. SH2 RING CIN85 UbcH7 Pro Grb2 Endophilin Ubi Hoe doet c-Cbl dat? Wat zijn de bindingspartners van Cbl? E2 E3

17. Y1045 is nodig voor de Cbl-afhankelijke ubiquitinering van de EGFR

18. EGFR 1045Y is nodig voor c-Cbl gestimuleerde EGFR-internalisatie

19. pY1045: De binding site van het Cbl-SH2 domein

20. SH2 RING CIN85 UbcH7 Pro SH2 Grb2 SH3 Endophilin Model: Cbl stuurt de EGFR ubiquitinering door directe binding aan pY1045 en indirect via Grb2 Ubi EGFR C-Cbl 1045 1068 1086 E2 E3 Y Y Y Y

21. De eerste stappen van de EGFR internalisatie Ub EGF EGF P P P c-Cbl SH2 Ub UbcH7 + Ub

22. Rol voor EGFR ubiquitinering?